Новые Метрики к характеризации эмбриональных Удлинение нематоды<em&gt; Caenorhabditis Элеганс</em

Emmanuel Martin; Olivier Rocheleau-Leclair; Sarah Jenna

doi:10.3791/53712

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Новые Метрики к характеризации эмбриональных Удлинение нематоды

5.7K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/53712

⸱

28 марта 2016 г.

Emmanuel Martin¹ , Olivier Rocheleau-Leclair¹ , Sarah Jenna¹

¹Department of Chemistry, Pharmaqam, Université du Québec à Montréal

В этой статье

Краткое содержание

Здесь мы подробно описываем протоколы, специально разработанные для мониторинга морфогенных дефектов, возникающих на ранних и поздних стадиях эмбриональной элонгации нематоды Caenorhabditis elegans. В конечном счете, эти протоколы предназначены для идентификации генов, которые регулируют эти фазы, и для характеристики их дифференциальных потребностей вдоль передне-задней оси эмбриона.

Аннотация

Анализ сигнальных путей, которые контролируют изменение морфогенных процессов во время эмбрионального развития, требует надежных и чувствительных метрик. Эмбриональное удлинение нематоды Caenorhabditis elegans представляет собой позднюю стадию развития, состоящую из удлинения эмбриона вдоль его продольной оси. Эта стадия развития контролируется межклеточной коммуникацией между гиподермальными клетками и нижележащими мышцами стенки тела. Эти сигнальные механизмы контролируют морфологию гиподермальных клеток путем ремоделирования цитоскелета и межклеточных соединений. Измерение эмбриональной летальности и остановки развития на личиночных стадиях, а также изменение цитоскелета и структур межклеточной адгезии в гиподермальных и мышечных клетках являются классическими фенотипами, которые используются уже более 25 лет для анализа этих сигнальных путей. Недавние исследования потребовали разработки новых показателей, специально нацеленных на раннюю или позднюю элонгацию и характеризующих морфогенные дефекты вдоль передне-задней оси эмбриона. Здесь мы предоставляем подробные протоколы, позволяющие точно измерить длину и ширину удлиняющихся эмбрионов, а также длину синхронизированных личинок. Эти методы представляют собой полезные инструменты для идентификации генов, контролирующих элонгацию, для оценки того, контролируют ли эти гены как ранние, так и поздние фазы этой стадии и требуются ли они равномерно вдоль передне-задней оси эмбриона.

Введение

В течение почти 50 лет нематод Caenorhabditis Элеганс зарекомендовал себя как мощная модель для изучения важных вопросов в области развития, нейробиологии, эволюции, хозяин-патоген взаимодействий и т.д. ¹ Сила этой модели в изучении развития заключается в: его короткого жизненного цикла от 3-х дней; легкость, с которой эти животные могут быть генетически изменены; его прозрачность, что позволяет наблюдать клетки перемещения и морфологии в живых животных и его развития, что в основном внематочная. Стадии развития нематоды включают эмбриогенеза и четыре личиночной стадии (L1 до L4), а затем во взрослую жизнь. Во время эмбрионального развити....