Методическая статья

Индукция экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита у мышей и оценка болезни зависимого распределения иммунных клеток в различных тканях

DOI:

10.3791/53933

⸱

8 мая 2016 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Institute of Clinical Pharmacology, Goethe University Hospital Frankfurt, 2Project Group for Translational Medicine & Pharmacology, Fraunhofer IME

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В этой рукописи описываются методы индукции и оценки экспериментальной модели аутоиммунного энцефаломиелита (ЭАЭ), а также оценка распределения иммунных клеток и уровней мРНК-цитокинов в лимфатических узлах, селезенке, крови и спинном мозге с использованием проточной цитометрии и количественной ПЦР, соответственно, на различных фазах заболевания.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Рассеянный склероз, как предполагают, воспалительное аутоиммунное заболевание, которое характеризуется образованием поражения центральной нервной системы (ЦНС), что приводит к когнитивной и двигательных нарушений. Экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (ЭАЭ) является полезной животной моделью MS, так как он также характеризуется образованием поражением ЦНС, нарушение двигательной и также определяется аутоиммунных и воспалительных реакций. Одна из моделей EAE индуцируют с пептидом , полученным из миелин олигодендроцитов белка (MOG) 35-55 у мышей. Мыши EAE разработать прогрессивное течение заболевания. Этот курс делится на три фазы: доклинические фазы (день 0 - 9), начало заболевания (день 10 - 11) и острой фазы (день 12 - 14). МС и ЕАЕ индуцируются аутореактивных Т-клеток, которые проникают в ЦНС. Эти Т-клетки секретируют хемокины и цитокины, которые приводят к набору дополнительных иммунных клеток. Таким образом, распределение иммунных клеток в спинном мозге Dйти во время трех фаз заболевания была исследована. Для того, чтобы выделить момент времени болезни, при которой начинается активация / пролиферации / накопление Т-клеток, В-клеток и моноцитов, распределение иммунных клеток в лимфатических узлах, селезенке и крови также оценивали. Кроме того, уровни ряда цитокинов (IL-1 & beta;, IL-6, IL-23, TNF-alpha, IFN & gamma;) в трех фазах заболевания были определены, чтобы получить представление о воспалительных процессах заболевания. В заключение отметим, что данные обеспечивают обзор функционального профиля иммунных клеток в процессе EAE патологии.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Рассеянный склероз (РС) и соответствующая модель животного, экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (ЭАЭ), показывают, аутоиммунные изменения нейровоспаления в центральной нервной системе (ЦНС). Ранние активные поражения MS и EAE характеризуются наличием проникших иммунных клеток. Этиология МС остается неизвестным, но широко считается вовлечь разрушение миелина, опосредованного аутореактивных Т-клеток. Эти аутореактивные Т-клетки секретируют провоспалительные цитокины и хемокины, которые привлекают другие иммунные клетки, такие как В-клетки, моноциты и нейтрофилы из кровообращения. Моноциты дифференцируются в макрофаги. Интерферон гамма (IFN & gamma;), секретир....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ЭТИКА ЗАЯВЛЕНИЕ: Наши экспериментальные процедуры одобрены Комитетом по этике Regierungspräsidium Дармштадт (Германия) по и подтвердить к национальным и европейским нормам. Все усилия были сделаны, чтобы минимизировать страдания животных и уменьшить количество используемых животных.

1. EAE модель

  1. Индукция модели EAE
    1. Используйте 10- до 13-недельного возраста самка 129S4 мышей / SvJae × C57BL / 6 для индукции EAE.
    2. Дайте Мышей подкожную инъекцию, в верхней и нижней части спины, на энцефалитогенных МОГ 35 - 55 (миелин олигодендроцитов гликопротеин) пептида (200 мкг), эмульгированного в 200 мкл полной F....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

На рисунке 1 приведен схематический обзор различных способов , описанных в этой статье. 1) Мыши получали инъекцию MOG 35-55 антигена и развить начальные клинические симптомы после 10,7 ± 0,3 дней 28. Представитель Конечно болезнь EAE мышей показано на рисунке 1. 2) Различные ткани (селезенка, лимфатические узлы, поясничного спинного мозга) и крови извлекаются из контрольных и ЕАЕ мышей в различные м.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Модель EAE , описанный здесь получил наибольшее внимание как модель MS и обычно используется при тестировании терапевтических стратегий для MS 32. Заболевание мыши обладает многими клинические и гистологические характеристики МС и обусловлена ​​индукцией аутоиммунитета к нейрональных антигенов. Сенсибилизация к миелиновых антигенов связано с гематоэнцефалического барьера дисфункции и, таким образом, инфильтрация клеток иммунной в ЦНС. Наши результаты показывают, что иммунные клетки увеличивают скоротечно в ли.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

MJP является консультантом Xellia и Leo Pharmaceuticals.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была поддержана Исследовательской учебной группой Фонда Эльзы Крёнера-Фрезениуса (EKFS) Translational Research Innovation - Pharma (TRIP) и "Landesoffensive zur Entwicklung wissenschaftlich-ökonomischer Exzellenz (LOEWE), Schwerpunkt: Anwendungsorientierte Arzneimittelforschung" земли Гессен.

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Система детектирования последовательностей ABI Prism 7500 Applied Biosystems, Остин, СШАколичественная ПЦР-система
AccutaseSigma Aldrich Мюнхен, ГерманияA6964раствор для отсоединения клеток
CD3-PE-CF594BD, Гейдельберг, Германия562286
CD4-V500BD, Гейдельберг, Германия560782
CD8-eFluor650 eBioscience, Франкфурт, Германия95-0081-42
CD11b-eFluor605eBioscience, Франкфурт, Германия93-0112-42
CD11c-AlexaFluor700BD, Гейдельберг, Германия560583
CD19-APC-H7 BD, Гейдельберг, Германия560143
CD45-Vioblue Miltenyi Biotec, Бергиш Гладбах, Германия130-092-910
CompBeadsBD, Гейдельберг, Германия552843компенсационные шарики
Коллагеназа АСигма Олдрич Мюнхен, ГерманияC0130
Цитометрический стандарт абсолютного числа Polyscience, Эппельхайм, ГерманияBLI-580-10
Настройка цитометра и отслеживание бусин BD, Гейдельберг, Германия642412
DNase ISigma Aldrich Munich, ГерманияD5025
EAE KitHooke Laboratories, Lawrence, СШАEK2110
F4/80-PE-Cy7 BioLegend, Фелл, Германия123114
набор для синтеза кДНК первой нити Thermo Scientific, Шверте, ГерманияK1612
Fc-рецептор-1 блокирующий буфер Miltenyi Biotec, Бергиш Гладбах, Германия130-092-575
Стандарт абсолютного подсчета проточных цитометрических данныхPolyscience, Эппельхайм, Германия580
Программное обеспечение FlowJo v10 Treestar, Ашленд, СШАпрограммное обеспечение для проточной цитометрии
LSRII/Fortessa BD, Гейдельберг, Германияпроточный цитометр
Ly6G-APC-Cy7 BD, Гейдельберг, Германия560600
Лизирующий раствор BD, Гейдельберг, Германия349202
Maxima SYBR Green Thermo Scientific, Шверте, ГерманияK0221флуоресцентный ДНК-связывающий краситель 
RNeasy Mini Kit Qiagen, Hilden, Германия74104Набор для экстракции РНК

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. McFarland, H. F., Martin, R. Multiple sclerosis: a complicated picture of autoimmunity. Nat Immunol. 8, 913-919 (2007).
  2. Proudfoot, A. E. Chemokine receptors: multifaceted therapeutic targets. Nat Rev Immunol. 2, 106-115 (2002).
  3. Mihara, M., Hashizume, M., Yoshida....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Experimental Autoimmune EncephalomyelitisMultiple Sclerosis ModelMyelin Oligodendrocyte GlycoproteinComplete Freunds AdjuvantPertussis Toxin InjectionLymph Node IsolationSpinal Cord DissectionSpleen Immune CellsFlow Cytometry AnalysisCytokine Expression Analysis

Похожие статьи