Построение моделей для прогнозирования неразрушающему ингредиента Содержание в чернике с помощью ближней инфракрасной спектроскопии на основе ВЭЖХ измерений

Краткое содержание

Мы представляем здесь протокол для построения и проверки моделей для неразрушающего прогнозирования общего сахара, общей органической кислоты и общего содержания антоцианов в отдельных черниках с помощью ближней инфракрасной спектроскопии.

Аннотация

Неразрушающее прогнозирование содержания ингредиентов в фермерских продуктах полезно для отгрузки и продажи продуктов с гарантированным качеством. Здесь ближняя инфракрасная спектроскопия используется для прогнозирования неразрушающего общего содержания сахара, общей органической кислоты и общего содержания антоцианов в каждой чернике. Ожидается, что эта техника позволит отбирать только вкусную чернику из всех собранных. Спектры поглощения черники в ближнем инфракрасном диапазоне измеряются с помощью режима диффузного отражения в положениях, отличных от чашечки. Содержание ингредиентов в чернике, определенное с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, используется для построения моделей для прогнозирования содержания ингредиентов по наблюдаемым спектрам. Для построения моделей используется регрессия по методу частичных наименьших квадратов. Необходимо правильно выбрать предварительные обработки для наблюдаемых спектров и области длин волн спектров, используемых для анализа. Для построенных моделей необходимы валидации, чтобы подтвердить, что содержание ингредиентов прогнозируется с практической точностью. В данной работе мы представляем протокол для построения и валидации моделей неразрушающего прогнозирования содержания ингредиентов в чернике с помощью ближней инфракрасной спектроскопии.

Введение

В ближней инфракрасной области (БИК) спектроскопии широко применяется в качестве неразрушающего метода анализа содержания фруктов и овощей различных видов. ^1,2 Неразрушающий анализ с помощью БИК - спектроскопии позволяют отгрузку только вкусных фруктов и овощей с гарантированными свойствами. БИК-спектроскопии уже применяется к апельсин, яблоко, арбуз, вишня, киви, манго, папайя, персик и так далее, чтобы знать их Брикса, что соответствует общему содержанию сахара, кислотность, TSC (всего содержание твердого вещества), и так далее , Недавно мы сообщали о применении NIR спектроскопии для оценки качества черники. ³ Мы измерили не только общее содержание сахара и общее содержание органической кислоты , соответствующей кислотности, но и общее содержание антоцианов. Антоцианин является биоактивный компонент, который, как полагают, улучшить здоровье человека. Это удобно для потребителей, если они могут купить вкусные черники с гарантией их содержания сахара, ACidity и антоцианов содержание.

В спектрах поглощения БИК фруктов и овощей, наблюдаются только широкие полосы поглощения. Они, в основном, полосы из-за волокна и влаги. Хотя многие слабые полосы из-за различных ингредиентов, не уничтоженного мишени наблюдаются одновременно, наблюдаемые полосы не могут быть отнесены к конкретным колебательными модами конкретных компонентов мишени в большинстве случаев. Таким образом, традиционный метод для определения содержания конкретного компонента с использованием закона Ламберта-Бера не является эффективным для спектров БИК. Вместо калибровки моделей для прогнозирования содержания целевых компонентов из наблюдаемых спектров , построенных с использованием хемометрики путем изучения корреляции между наблюдаемыми спектрами и содержание ингредиентов , соответствующих спектров. ^4,5 Здесь протокол для построения и проверки моделей для прогнозирования общего содержания сахаров, общее содержание органических кислот, соответствующих ACIDIти, а также общее содержание антоцианов черники из NIR-спектров представлена.

На рисунке 1 показана общая блок - схему для построения надежных и надежные калибровки моделей. Образцы достаточного количества собираются. Некоторые из них используются для построения моделей в то время как другие используются для проверки построенных моделей. Для каждого из собранных образцов, спектр БИК измеряется, а затем целевые компоненты анализируют количественно с традиционными методами деструктивных химического анализа. Здесь, высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) используется для химического анализа сахаров, органических кислот, и антоцианы. Частичные наименьших квадратов (БВР) регрессии используется для построения калибровочных моделей, где анализ рассматривается корреляция между наблюдаемыми спектрами и содержанием ингредиентов, определенной химической. Для того чтобы построить надежные модели с лучшей способностью прогнозирования, предварительной обработки obserвед спектры и области длин волн, используемых для прогнозирования также рассматриваются. Наконец, построенные модели проверяются, чтобы подтвердить их достаточную способность прогнозирования. В проверке, содержание предсказывается из наблюдаемого спектра с помощью построенной модели (предсказанные значения) сравниваются с содержанием определенных химических анализов (наблюдаемые значения). Если достаточная корреляция не может быть найден между предсказанными и наблюдаемыми значениями, модель калибровки должна быть реконструировано до тех пор, пока не будет получено достаточное корреляции. Хотя предпочтительно использовать разные группы образцов для построения и проверки модели, как показано на этом рисунке (внешней проверки), образцы в одной и той же группы используются как для построения и валидации (проверки кросс), когда число образцы не является достаточно большим.

Figure 1. Блок - схема для построения и проверки модели калибровки. Процедуры в окружении синих и зеленых линий соответствуют, соответственно, к построению модели калибровки и ее проверки. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

Протокол

1. Сбор образцов

1. Решите, какие культурные сорта растения будут включены в целевой модели калибровки.
2. Собрать достаточное количество и различные типы образцов черники целевых сортов.
   1. Собрать предпочтительно 100 чернику для построения модели калибровки, и, по меньшей мере, 10 для проверки построенной модели. Для того чтобы построить надежные модели, собирают образцы различных типов, т.е. с различными цветов, размеров, и при различных условиях созревания.
3. Взвесить каждую чернику. Примечание: Веса, измеренные в дальнейшем используются для расчета процентного содержания ингредиентов каждого голубики.

2. Измерения спектров

1. Разминка спектрофотометр достаточно (более 1 ч) перед измерениями, чтобы получить надежные спектры.
2. Установите спектрофотометр. Убедитесь в том, что условия являются постоянными на всем протяжении измерений.Пример типичных условий измерений приведена ниже.
   1. Установите диапазон измерений до 12,500-3,600 см ^-1.
   2. Установите спектральное разрешение 16 см ^-1.
   3. Установите накопление в 32 раза.
3. Выберите диффузного отражения в качестве режима измерения.
4. Поместите стандартный отражатель на окне спектрофотометра для измерения диффузного отражения. С помощью команды "фоновый" одноканальный, измерить фоновый спектр, который автоматически используется для расчета относительных спектров отражения от спектров образцов черники, измеренной позже.
5. Поместите образец черники в центре окна спектрофотометра для измерения диффузного отражения. С помощью команды "образца одного канала", измерять спектры каждого голубики предпочтительно в нескольких точках плода.
   Примечание: Кубелка-Мунка преобразование ^6,7 также будет выполняться автоматическийчески для наблюдаемых спектров образцов голубика, если условие спектрального приобретения устанавливается сделать это. преобразование Кубелка-Мунка изменяет спектров, измеренных в режиме диффузного отражения в спектрах эквивалентные тем, которые измеряются в режиме передачи, и необходим для анализа спектров с высокой точностью. Спектры в шкале оптической плотности используются для анализа.
6. Вычислить средний спектр спектров каждого образца с использованием программы обработки данных, таких как MS Excel, если спектры образца черники измеряются в нескольких точках. Используйте усредненный спектр для анализа.

3. Предварительная обработка для ВЭЖХ измерений сахаров и органических кислот ⁸

Примечание: Извлечение сахара и органические кислоты каждого черника, которые растворимы в воде, сверхчистой водой следующим образом. Весь каждого черника используется для анализа.

1. Держите чернику в морозильной камере ниже -30 ° C готовый FOR химических анализов, если они не анализируются только после того, как спектральных измерений.
2. Вырезать голубики на несколько частей, поэтому он может быть легко гомогенизируют в следующих шагах. Вырезать чернику без размораживания, когда она замерзает.
3. Поместите кусочки в химический стакан на 50 мл.
4. Добавить ок 10 мл сверхчистой воды (дистиллированная вода, которой электропроводность меньше 0,1 мкСм / см) в мензурку.
5. Нагреть отрезанный чернику в сверхчистой воде в микроволновой печи в течение 20 секунд, чтобы дезактивировать ферменты, которые могут разлагаться сахара во время анализа.
6. Добавить приблизительно 10 мл сверхчистой воды в стакан.
7. Перемешать смесь в течение 5 мин при 12000 оборотах в минуту с помощью гомогенизатора, оснащенного стандартной валом и генератором.
8. Центрифуга гомогенизированной смеси в течение 10 мин при скорости 3000 оборотов в минуту (2000 & bull; g).
9. Сбор фильтрата с помощью вакуумной фильтрации центрифугированной пробы с использованием бумажного фильтра 5В.
10. Повторите шаги 3,6-3,9 раза по наце осадок после фильтрации, чтобы собрать все сахара и органические кислоты, и объединить все фильтратов.
11. Измеряют рН фильтрата и регулировать его до 7 разбавленной хлористоводородной кислотой (0,1 и 0,01 моль · л ^-1) и разбавленные водные растворы гидроксида натрия (0,1 и 0,01 моль · л ^-1).
12. Развести фильтрата до 50 мл сверхчистой воды.
13. Разделите выборку на две; один для анализа сахаров, а другой для анализа органических кислот.
14. Пропускают первый образец раствора через колонки (два С18, CM и QMA), соединенных последовательно, чтобы исключить пигменты, катионы и анионы. Выбросьте первые 1 мл раствора образца из колонн. Затем используют раствор образца из колонок для анализа сахаров с помощью ВЭЖХ.
15. Пропускают второго образца раствора через колонки (два С18 и КМ), соединенных последовательно, чтобы исключить пигменты и катионы. Выбросьте первые 1 мл раствора образца из колонн. Затем используйте раствор образца из Columns для анализа органических кислот с помощью ВЭЖХ.
16. Центрифуга каждое решение с шагом 3,14 и 3,15 при 6,600 оборотах в минуту (5,800 & bull; g), в течение 10 мин в микропробирки, снабженной фильтром 0,45 мкм с мини-центрифуге перед анализом методом ВЭЖХ.

4. ВЭЖХ Измерения Sugars

Примечание: В данном исследовании содержание сумма сахарозы, глюкозы и фруктозы каждого голубики рассматривается как общее содержание сахара. Таким образом, рабочая кривая для каждого из трех сахаров получается, а затем содержание сумма сахаров в каждом голубики получается. Стандартные материалы представлены в виде 0,3-0,4% мас (сахароза), 3.8-4.8% по весу (глюкоза) и 4.2-5.3% мас (фруктоза). ⁹

1. Мера около 200 мг сахарозы точно, и растворить его в 50 мл сверхчистой воды для приготовления стандартного раствора. Разбавляют 5 мл раствора до 50 мл сверхчистой воды для приготовления второго стандартных решений. Аналогичным образом готовят третью позициюARD раствор из второго стандартного раствора.
2. Подготовка стандартных растворов глюкозы и фруктозы, аналогичным образом.
3. Расположить систему ВЭЖХ следующим образом:
   1. Используйте колонку для гель-проникающей в колонку печи при 40 ° C.
   2. Используйте дегазированной сверхчистой воды с расходом 0,1 мл / мин в качестве элюата.
   3. Использование детектора показателя преломления.
4. Измерение с помощью ВЭЖХ спектрограммы стандартных растворов путем инъекции 20 мкл аликвоты для каждого измерения. Примечание: В данном РАС решение используется в качестве программного обеспечения для измерения.
5. Получить интенсивности площадь полосы сахара на хроматограмме каждого стандартного раствора, нажав кнопку "повторный анализ" с правой кнопкой мыши.
6. Участок интенсивности ПЛОЩАДЬЮ соответствующие концентрации, чтобы получить рабочую кривую для каждого сахара с помощью линейной регрессии, где уравнение, представляющее соотношение между интенсивностью областью и концентрации получают FOг каждый сахар.
7. Измерение с помощью ВЭЖХ спектрограммы растворов образцов путем инъекции 20 мкл аликвоты для каждого измерения.
8. Получить интенсивности площадь из полос сахаров на хроматограмме каждого раствора образца, как описано выше в шаге 4.5.
9. Получить концентрации сахаров в растворах с использованием уравнений, соответствующих рабочему кривых, полученных на шаге 4.6.
10. Получить количество каждого сахара в каждом голубики от концентрации раствора образца, полученного на предыдущей стадии, и общий объем раствора образца (50 мл, см этап 3.12).
11. Получить общее количество сахара каждого плода путем суммирования содержания трех сахаров.
12. Получить содержание процента от общего сахара каждого голубики, используя вес, измеренный на этапе 1.3.

5. ВЭЖХ измерения органических кислот

Примечание: В данном исследовании содержание сумма лимонной кислоты, хинной кислоты, яблочнойкислота, янтарная кислота и рассматриваются как общее содержание органических кислот. Таким образом, рабочая кривая для каждого из четырех органических кислот получают первый, а затем содержание органических кислот в каждом голубики измеряется. Стандартные материалы представлены в виде 0.42-0.62% мас (лимонная кислота), 0-0,15 мас% (хинной кислоты), 0.08-0.23 мас% (яблочной кислоты), и 0.06-0.25 мас% (янтарная кислота). ⁹

1. Мера около 5 мг лимонной кислоты точно, и растворить его в 50 мл сверхчистой воды для приготовления стандартного раствора. Разбавляют 5 мл раствора до 50 мл сверхчистой воды для приготовления второго стандартных решений. Аналогичным образом готовят третьего стандартного раствора из второго стандартного раствора.
2. Готовят стандартные растворы хинной кислоты, яблочной кислоты и янтарной кислоты, аналогичным образом.
3. Расположить систему ВЭЖХ следующим образом:
   1. С помощью двух анионообменных колонок, соединенных последовательно в колонку печи при 40 ° C.
   2. Использование дегазированной 0,1% -ного водного раствора фосфорнойкислоты со скоростью потока 0,02 мл / мин в качестве элюата.
   3. Используйте набор детекторов ультрафиолетовой и видимой при 210 нм.
4. Измерение с помощью ВЭЖХ спектрограммы стандартных растворов путем инъекции 20 мкл аликвоты стандартного раствора для каждого измерения.
5. Получить интенсивности площадь полосы органической кислоты на хроматограмме каждого стандартного раствора, нажав кнопку "повторный анализ" с правой кнопкой мыши.
6. Участок интенсивности ПЛОЩАДЬЮ соответствующие концентрации, чтобы получить рабочую кривую для каждой органической кислоты, с помощью линейной регрессии, где уравнение, представляющее соотношение между интенсивностью областью и концентрации определяется для каждой органической кислоты.
7. Измерение с помощью ВЭЖХ спектрограммы растворов образцов путем инъекции 20 мкл аликвоты пробы для каждого измерения.
8. Получить интенсивности по площадям полос органических кислот на хроматограмме каждого раствора пробы, как описано выше на стадии 5.5,
9. Получить концентрации органических кислот в растворах с использованием уравнений, соответствующих рабочему кривым, полученным на шаге 5.6.
10. Получить количество каждой органической кислоты, в каждом из голубики концентрации раствора образца, полученного на предыдущей стадии, и общий объем раствора образца (50 мл, см этап 3.12).
11. Получить количество общей органической кислоты в каждой голубики путем суммирования содержание четырех органических кислот.
12. Получить содержание процентов от общей органической кислоты каждого голубики, используя вес, измеренный на этапе 1.3.

6. Предварительная обработка для ВЭЖХ измерений антоцианов

1. Хранить чернику в морозильной камере ниже -80 ° С готовым для химических анализов, если они не анализируются только после того, как спектральных измерений.
2. Сушат каждый замороженные фрукты с вакуумной лиофилизации в течение 12 ч.
3. Экстракт антоцианов из высушенного черники в 1% раствор в метаноле OF трифторуксусной кислоты [вес черники (г) / объем раствора (мл) = 1/10], оставляя смесь в холодильнике при температуре 4 ° С в течение 12 часов.
4. Центрифуга экстракт в течение 15 мин в 2 мл микропробирок с использованием ультрацентрифуге при -8 ° С и 15000 оборотов в минуту (21900 & bull; g).
5. Фильтр экстракта через фильтр с размером 0,45 мкм, чтобы получить образец для измерений ВЭЖХ.

7. ВЭЖХ Измерение антоцианового

Примечание: Около 13 вид антоцианы включены в чернике. Так как трудно получить рабочие кривые для всех антоцианы, рабочая кривая только цианидин-3- хлорида O -glucoside, один из самых популярных антоцианов в чернике, получается. Рабочая кривая применяется для приближенного количественными других антоцианов.

1. Мера около 1,5 мг цианидин-3- O хлорида -glucoside точно, и растворяют его в 10 мл 1% раствора метанола трифторуксусной кислоты в прepare стандартное решение. Разбавляют 5 мл раствора до 10 мл 1% раствора метанола трифторуксусной кислоты для получения второго стандартного решения. Аналогичным образом, подготовить третий и четвертый стандартные решения последовательно.
2. Расположить систему ВЭЖХ следующим образом:
   1. С помощью колонны с обратной фазой С18 в колонне печи при 40 ° C.
   2. Применение градиентного метода с использованием элюатов 0,1% -ной водной трифторуксусной кислоты (элюирования) и 0,5% -ной трифторуксусной кислоты в ацетонитриле (элюирования В) со скоростью потока 0,1 мл / мин, где соотношение элюирования B возрастает с 8% до 15% в течение 0-50 мин после инъекции и от 15% до 75% в течение 50-60 мин после инъекции.
   3. С помощью мониторинга матричного детектора фотодиод при длине волны 520 нм.
3. Измерение с помощью ВЭЖХ спектрограммы стандартных растворов путем инъекции 10 мкл аликвоты для каждого измерения. "LC-решение" используется в качестве программного обеспечения для измерения.
4. Получить интенсивности площадь полосыцианидин-3- хлорид O -glucoside на хроматограмме каждого стандартного раствора, нажав кнопку "Повторный анализ" с правой кнопкой мыши.
5. Участок интенсивности площадь против соответствующих концентраций , чтобы получить рабочую кривую для цианидин-3- хлорида O -glucoside линейной регрессии, где уравнение , представляющее зависимость между интенсивностью площади и концентрации получают для цианидин-3- хлорида O -glucoside.
6. Измерение с помощью ВЭЖХ спектрограммы растворов образцов путем инъекции 10 мкл аликвоты для каждого измерения.
7. Получить интенсивность площади полосы каждого антоцианов на хроматограмме каждого раствора пробы, как описано ранее на шаге 7.4.
8. Получить указаны концентрации антоцианов в растворах с использованием уравнения, соответствующего рабочей кривой, полученной на стадии 7.5.
9. Получение количества каждого антоцианов в каждой голубики от концентрации, полученного на предыдущейшаг и общий объем раствора образца, используемого на стадии 6.3.
10. Получить общее количество антоцианов в каждой голубики путем суммирования содержания тринадцати антоцианов.
11. Получить содержание процента от общего антоцианов каждого голубики, используя вес, измеренный на этапе 1.3.

8. Построение градуировочных моделей для прогнозирования Ингредиент Содержание

Примечание: PLS регрессии, ^4,5 , который является своего рода метод множественного регрессионного с использованием латентных вариантов, используется для построения калибровочных моделей для каждого ингредиента из наблюдаемых спектров и содержания ингредиентов , определенных химических анализов. PLS регрессии осуществляется либо с коммерческими программами или с самодельными программами. Смотри рекомендации ^5,10 для детальных процессов построения моделей.

1. Изучение, которое для предварительной обработки наблюдаемых спектров являются наиболее эффективными для точной инадежный прогноз.
   1. Построить калибровки моделей путем применения одного или двух из следующих предварительных обработок: MSC (мультипликативный Scatter коррекции), ^1,2,5 SNV (Стандартная нормальная случайная величина), ^1,2,5 MMN (Min-Max нормировки), COE (Constant Offset Устранение ), а также метод первой или второй производной расчет по SG (Савицкого-Голея). ^1,2,5 Прогнозировать содержание ингредиента набор подтверждающих данных из их спектров с построенных моделей.
      Примечание: В ММН, спектр нормирован так, чтобы минимальное и максимальное значения становятся равными 0 и 1 соответственно. В COE, ордината спектра смещается так, чтобы минимальное значение становится равным нулю.
   2. Вычислить коэффициент детерминации, R ^2, и остаточного предиктивного отклонения, РПД, между наблюдаемыми и предсказанные значения проверки , установленного для рассмотрения которых предварительная обработка для наблюдаемые спектры являются наиболее эффективными. Выберите сочетание предварительной обработки, дающих большеR ² и РПД.
2. Исследовать которых волновое число областей эффективны для точного и надежного прогнозирования , путем применения, например, перемещающим и окна PLS технику ¹¹ искать эффективные регионы.
   Примечание: Эта процедура соответствует удаления областей волновых чисел, где спектры не содержат информацию для эффективного предсказания или содержат информацию, которая мешает с предсказаниями.

9. Проверка Построенная калибровки моделей

Примечание: ссылки см ^5,10 для детальных процессов проверки построенных моделей.

1. Предсказать ингредиент содержимое проверки набора из их спектров с построенных градуировочных моделей с лучшей комбинацией предварительной обработки и для волнового числа областей эффективных для прогнозирования. ^5,10
2. Вычислить R ² и RPD между наблюдаемым и прогнозируемымзначения множества валидации. ^5,10
3. Выяснить , имеются ли общие критерии для практического выполнения калибровки моделей, ^12,13 R ^2> 0,85 и РПД> 2,5, удовлетворены. Рассмотрим реконструкцию модели, если критерии не будут удовлетворены.

Результаты

На рисунке 2 показано в качестве примера набор спектров поглощения БИК голубика , где спектры 70 черники показаны одновременно. Так как полосы определенно назначаемые до сахаров, органических кислот, или антоцианов не наблюдаются в спектрах NIR, закон традиционного Ламберта-Бера не применяется для количественного определения содержания ингредиентов. Таким образом, построение моделей для прогнозирования ингредиента содержание необходимо.

Обсуждение

Некоторые дополнительные замечания по протоколу описаны здесь. Во-первых, на этапе 1.1, упоминается, чтобы решить культурные сорта, включенные в цель. Несмотря на то, что можно построить модели, охватывающие чернику из многих культурных сортов или без указания культурных сортов, то точность предсказания с моделями иногда значительно ниже, чем те, с моделями для одного сорта и для ограниченных культурных сортов. Следует также отметить , что модели калибровки должны быть сконструированы для чернику из каждой производствен...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
FT-NIR спектрофотометр	Bruker Optics GmbH	MPA
Высокоэффективная жидкостная хроматография	Shimadzu Corporation	228-45041-91, 228-45000-31, 228-45018-31	Для анализа
		223-04500-31, 228-45010-31, 228-45095-31	Детектор показателя преломления
Высокопроизводительная жидкостная хроматография	Shimadzu Corporation	228-45041-91, 228-45003-31, 228-45000-31	Для анализа
		228-45018-31, 228-45010-31, 223-04500-31	Ультрафиолетово-видимый детектор
Высокопроизводительная жидкостная хроматография	Shimadzu Corporation	228-45041-91, 228-45018-31, 228-45000-31	Для анализа
		228-45012-31, 228-45119-31, 228-45005-31	Фотодиодный матричный детектор
		228-45009-31
pH-метр	Mettler-Toledo	30019028	S220, Автоматическая температурная компенсация
Оборудование для очистки сверхчистой воды	ORGANO Corporation	ORG-ULXXXM1; ПРА-0015-0V0	PURELAB ультра;
Биомедицинские морозильные камеры PURELITE	SANYO	2-6780-01	MDF-U338
Сверхнизкотемпературный морозильник	Panasonic healthcare Co., Ltd.	КМ-ДУ73У1-80	и град;
C Вакуумный лиофилизатор	IWAKI GLASS Co., Ltd	119770	DRC-3L; Гомогинизатор FRD-82M
	Microtec Co., Ltd.	Физкотронная
ультрацентрифуга	Hitachi Koki Co., Ltd	S204567	CF15RXII
мини-центрифуга	LMS Co., Ltd.	KN3136572	MCF-2360
Центрифуга	Kokusan Co., Ltd	2-5534-01	H-103N
Фильтровальная бумага	Advantec	1521070	5B, Eqvalent to Whatman 40
Sep-Pak C18 колонка	Waters Corporation Milford	WAT020515
Sep-Pak CM колонна	Waters Corporation Milford	WAT020550
Sep-Pak QMA колонна	Waters Corporation	Milford WAT020545
Центробежная фильтрующая установка	Merck Millipore Corporation	R2SA18503	PVDF, 0,45 μ m
Микропробирка	As One Corporation	1-1600-02	PP, 2 мл
Шприцевой фильтр	GE Healthcare CO., LTD.	6788-1304	СТР, 0,45 ММ; m
Сахароза	Wako Pure Chemical Industries,Ltd	194-00011	Реагентная
глюкоза	Wako Pure Chemical Industries,Ltd	049-31165	Реагентная
фруктоза	Wako Pure Chemical Industries,Ltd	123-02762	Реагентная
лимонная кислота	Wako Pure Chemical Industries,Ltd	036-05522	Реагентная
яблочная кислота	Wako Pure Chemical Industries, Ltd	355-17971	Реагентная
янтарная кислота	Wako Pure Chemical Industries,Ltd	190-04332	Реагентная
хинная кислота	Alfa Aesar, A Johnson Matthey Company	10176328	Реагентная
фосфорная кислота	Wako Pure Chemical Industries,Ltd	162-20492
Трифторуксусная кислота	Wako Pure Chemical Industries,Ltd	208-02746	Метанол реагентного качества
	Wako Pure Pure Chemical Industries,Ltd	131-01826	Реагентный
ацетонитрил	Wako Pure Chemical Industries,Ltd	015-08633
Цианидин-3-O-глюкозид хлорид	Wako Pure Chemical Industries,Ltd	306-37661
Программное обеспечение для анализа	ВЭЖХ Bruker Optics GmbH	OPUS ver. 6.5
Softoware для препроцессирование	Microsoft	Excel на базе Visual Basic for Applications
Программное обеспечение для построения моделей		Freemat 4.0	http://freemat.sourceforge.net/