Микрожидком Платформа с высокой пропускной способностью изоляции одноклеточные и культуры

Ching-Hui Lin; Hao-Chen Chang; Chia-Hsien Hsu

doi:10.3791/54105

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Микрожидком Платформа с высокой пропускной способностью изоляции одноклеточные и культуры

11.2K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/54105

⸱

16 июня 2016 г.

Ching-Hui Lin¹^,² , Hao-Chen Chang¹^,² , Chia-Hsien Hsu¹^,²^,³

¹Institute of Biomedical Engineering and Nanomedicine, National Health Research Institutes, Taiwan, ²Tissue Engineering and Regenerative Medicine, National Chung Hsing University, ³Institute of NanoEngineering and MicroSystems, National Tsing Hua University

В этой статье

Краткое содержание

Здесь мы представляем протокол для выделения и культивирования одиночных клеток с помощью микрофлюидной платформы, в котором используется новая концепция дизайна микролунок, обеспечивающая высокоэффективную изоляцию одиночных клеток и долгосрочное клональное культивирование.

Аннотация

Изучение гетерогенности одиночных клеток имеет решающее значение для многих биологических вопросов, но технически сложно. Таким образом, существует потребность в простом, но высокопроизводительном методе для проведения экспериментов с культурами одиночных клеток. В данной работе мы представляем стратегию на основе микрофлюидных чипов для высокоэффективной изоляции одиночных клеток (~77%) и демонстрируем ее способность выполнять долгосрочный анализ одноклеточной культуры (до 7 дней) и клеточной гетерогенности с использованием клоногенного анализа. Эти приложения были продемонстрированы с мышиными нервными стволовыми клетками KT98 и раковыми клетками человека A549 и MDA-MB-435. Высокая эффективность выделения одиночных клеток и долговременная культурационная способность достигаются за счет использования микролунок различных размеров в верхней и нижней части микрофлюидного канала. Малая микролуночная матрица предназначена для точной изоляции одиночных клеток, а большая микролуночная матрица используется для клональной культивирования одиночных клеток в микрофлюидном чипе. Эта микрофлюидная платформа представляет собой привлекательный подход для применения в культурах одиночных клеток благодаря гибкости регулируемых пространств для клеточных культур для различных стратегий культивирования без снижения эффективности изоляции.

Введение

В настоящее время размещения отдельных клеток по отдельности в ферментационной пространстве обычно достигается за счет использования ограниченного разведения или флуоресценции активированного сортировки клеток (FACS). Для многих лабораторий, предельное разведение является удобным методом, так как он требует только пипеткой и тканевые культуры пластины, которые легко доступны. В этом случае суспензию клеток серийно разводили до соответствующей плотности клеток, и затем помещают в культуральные лунки с помощью ручной пипетки. Эти отдельные клетки , разделенные на отсеки, затем используются для анализа клеток, таких как генетической гетерогенности скрининг ¹ ....