Коловратки — это микроскопический зоопланктон, используемый в качестве моделей в экотоксикологических исследованиях и исследованиях старения. Здесь мы предоставляем протокол для мощного и воспроизводимого измерения времени выживания коловраток Brachionus. Синхронизация условий культивирования в нескольких поколениях имеет особое значение, так как состояние матери влияет на историю жизни потомства.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Коловратки — это микроскопический космополитический зоопланктон, используемый в качестве моделей в экотоксикологических исследованиях и исследованиях старения из-за их нескольких преимуществ, таких как короткая продолжительность жизни, простота культивирования и партеногенез, который позволяет клонировать культуру. Тем не менее, требуется осторожность при измерении времени их выживания, так как на него влияет возраст матери и условия кормления матери. Здесь мы предоставляем протокол для мощного и воспроизводимого измерения времени выживания коловраток Brachionus после тщательной синхронизации условий культивирования в течение нескольких поколений. Эмпирически плохая синхронизация приводит к ранней смертности и постепенному снижению выживаемости, что приводит к слабой статистической мощности. Действительно, в таких условиях ограничение калорий (CR) не смогло значительно продлить продолжительность жизни B. plicatilis, хотя индуцированное CR долголетие было продемонстрировано с хорошо синхронизированными образцами коловраток в прошлых и настоящих исследованиях. Этот протокол, вероятно, полезен для других моделей беспозвоночных, включая плодовую муху Drosophila melanogaster и нематоду Caenorhabditis elegans, поскольку у этих видов также сообщалось о влиянии материнского возраста.
Введение
Коловратки являются микроскопическими космополитичный зоопланктона (<1 мм) , которые составляют филюмом Rotifera 1. Они имеют простой план тело состоит из примерно 1000 соматических клеток, а также характерным реснитчатого аппарата колесного типа называют коронным, который используется для передвижения и кормления. Большинство коловраток принадлежат к классам Monogononta или Bdelloidea, которые содержат около 1600 и 500 видов, соответственно 2. Monogonont коловратки обычно имеют как половое и бесполое репродуктивные фазы (циклический партеногенез), в то время как bdelloid коловратки размножаются обязательным партеногенеза 3. Таким обр....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Подготовка средств массовой информации
Примечание: Используйте половину разбавленный Brujewicz искусственную морскую воду с соленостью 16,5 п.п. (PSU). Другие искусственные морские воды также часто используются для культивирования Brachionus коловраток 25,26.
- Добавить 454 мМ NaCl, 26 мМ MgCl 2, 27 мМ MgSO 4, 10 мМ КСl, и 10 мМ CaCl 2 до 4,5 л дистиллированной воды (конечный объем будет 5 л). В качестве альтернативы, используйте деионизованной воды для разбавления вместо дистиллированной воды. Добавить CaCl 2 после растворения всех других солей.
- Пригото....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
На рисунке 1 показаны типичные кривые выживаемости слабо синхронизированных популяций (из двух повторностей). В этом эксперименте, коловратки были либо кормили каждый день [вволю (AL) , группа] или через день (ЕСЛИ группа). Медиана выживаемости составила 13 и 18 дней в AL и IF групп соответственно. Несмотря на то, как хорошо известно, что если продлевает срок службы коловратки, этот эксперимент не удалось обнаружить статистически значимую разницу между про.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Текущий протокол описывает метод измерения времени выживания в Brachionus коловраток. Важным шагом является синхронизация условий коловраток в течение нескольких поколений. Когда экспериментальные коловратки хорошо синхронизированы, типичный тип кривой выживаемости я наблюдается с очень небольшим количеством ранней смертности , как сообщалось в ряде предыдущих исследований 18,24,37,38. Поэтому стандартные отклонения времени выживания становятся меньше по сравнению с плохо синхронизированных коловрато.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторам нечего раскрывать.
Благодарности
Мы благодарны Джорджу Jarvis, Марта Бок и Бетт Hecox-Lea, морской биологической лаборатории, за помощь в съемках фильма.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Хлорид натрия | Wako | 190-13921 | |
| Хлорид магния | Wako | 136-03995 | |
| Сульфат магния | Wako | 131-00427 | |
| Хлорид калия | Wako | 168-22111 | |
| Хлорид кальция | Wako | 035-00455 | |
| Бикарбонат натрия | Wako | 199-05985 | |
| Бромид натрия | Wako | 190-01515 | |
| Мембранный фильтр (0,45&м; m размер пор) | Миллипоры | HAWP04700 | |
| Культуральная пластина, 6-луночная, необработанная | Scientific | 6902D01 | Плоскодонная |
| культуральная пластина, 48-луночная, необработанная | Thomas Scientific | 6902D07 | Плоскодонная |
| тетрасельмис, живая | Каролина Биологическая компания | снабжения 152610 | |
| PRISM 6 | GraphPad Версия программного обеспечения | 6.0d |
Ссылки
- Wallace, R. L., Snell, T. W., Ricci, C., Nogrady, T. Rotifera Vol.1: Biology, ecology and systematics. , 2nd edn, SPB Academic Publishing. (2006).
- Segers, H. Annotated checklist of the rotifers (Phylum Rotifera), with notes on nomenclature, taxonomy and distribution. , Magnoli....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
