Бесклеточной Анализ с помощью<em&gt; Xenopus Laevis</em&gt; Эмбрион Экстракты для изучения механизмов регулирования ядерной Размер

Lisa J. Edens; Daniel L. Levy

doi:10.3791/54173

Методическая статья

Бесклеточной Анализ с помощью

7.6K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/54173

⸱

8 августа 2016 г.

Lisa J. Edens¹ , Daniel L. Levy¹

¹Department of Molecular Biology, University of Wyoming

В этой статье

Краткое содержание

Механизмы клеточного и внутриклеточного масштабирования остаются неясными. Использование экстрактов эмбрионов Xenopus становится все более распространенным для выяснения механизмов регуляции размеров органелл. Этот метод описывает приготовление экстракта эмбриона и новый анализ ядерного масштабирования, с помощью которого можно идентифицировать механизмы регуляции размера ядер.

Аннотация

Фундаментальный вопрос в клеточной биологии, как клеточные и органелл размеры регулируются. Давно признано, что размер ядра в целом шкалы с размером ячейки, в частности, в процессе эмбриогенеза, когда происходят резкое сокращение в обеих клеточных и ядерных размеров. Механизмы регулирования размеров ядра в значительной степени неизвестны и могут иметь отношение к раку , где измененная размер ядра является ключевым диагностическим и прогностическим параметром. В естественных условиях подходы к идентификации регуляторов размера ядра осложняется существенным и сложным характером ядерной функции. В пробирке подход , описанный здесь , чтобы изучить контроль размеров ядра использует в своих нормальных сокращений ядерного размера , которые происходят во время развития Xenopus Laevis. Во- первых, ядра собраны в X. Laevis экстракт яйца. Затем эти ядра выделяют и ресуспендировали в цитоплазме от поздних эмбрионов стадии. После 30 - 90 мин инкубационного периода, площадь поверхности ядернаяуменьшается на 20 - 60%, обеспечивая полезный анализ для выявления цитоплазматических компонентов, присутствующих в поздних эмбрионов стадии, которые способствуют развития масштабированием размеров ядра. Основным преимуществом такого подхода является относительная легкость, с которой яйцо и эмбрион экстракты могут быть биохимически манипулировать, что позволяет для идентификации новых белков и деятельности, которые регулируют размер ядра. Как и при любом экстракорпоральное подходе, проверка достоверности результатов в системе в естественных условиях имеет важное значение, и микроинъекции X. Laevis эмбрионов особенно подходит для этих исследований.

Введение

Размеры клеточных органелл обычно масштабироваться с размером ячейки, и это было возможно , лучше всего документирован для масштабирования размера ядра с размером ячейки ^1-10. Это особенно верно в процессе эмбриогенеза и дифференцировки клеток, когда резкое сокращение как клетки и размера ядра часто наблюдаются ^11,12. Кроме того, изменен размер ядра является ключевым параметром в диагностике рака и прогнозирования ^13-17. Механизмы, которые способствуют регулированию размеров ядра в значительной степени неизвестны, отчасти из-за сложности и существенного характера ядерной структуры и функции. Описанный здесь метод был разработан как те....