Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Повторные транскраниальной магнитной стимуляции к одностороннему полушарии мозга крысы

12.2K просмотров

DOI:

10.3791/54217

22 октября 2016 г.

В этой статье

Краткое содержание

Мы применили повторяющуюся транскраниальную магнитную стимуляцию (рТМС) к одностороннему полушарию мозга крысы, поместив 25-миллиметровую катушку в виде восьмерки на 1 см латеральнее вершины на биаурикулярной линии и наклонив катушку под углом 45°. Собственная система водяного охлаждения использовалась для rTMS более 20 минут.

Аннотация

Предыдущие модели повторяющейся транскраниальной магнитной стимуляции (рТМС) у грызунов использовали стимуляцию всего мозга вместо односторонней рТМС в полушарии, что отличается от протоколов, используемых для людей. Мы сообщаем об успешном применении рТМС в одностороннем полушарии мозга крысы. РТМС доставлялась с помощью низкочастотного (1 Гц), высокочастотного (20 Гц) или фиктивного протокола стимуляции в одну сторону мозга с помощью небольшой 25-миллиметровой катушки в форме 8. Мы поместили центр катушки на 1 см латеральнее вершины на биаурикулярной линии и наклонили катушку под углом 45° к земле, чтобы свести к минимуму потенциальное прямое воздействие рТМС на контралатеральную кору. Мы также использовали собственную систему водяного охлаждения, чтобы обеспечить повторяющуюся магнитную стимуляцию в течение более 20 минут, даже при частоте стимуляции 20 Гц. Увеличение транскрипции непосредственных ранних генов (Arc, Junb и Egr2) было больше после рТМС, чем после фиктивной стимуляции. После 5 последовательных дней 20-минутной рТМС с частотой 1 Гц экспрессия мРНК bdnf была значительно выше в стимулированной коре, чем в контралатеральной стороне. Представленная здесь модель прояснит молекулярные механизмы рТМС, позволив проанализировать межполушарные различия в ее эффекте.

Введение

Повторные транскраниальной магнитной стимуляции (мТМС), инструмент для неинвазивной стимуляции мозга и нейромодуляции, был применен при лечении различных заболеваний , таких , как центральной боли 1,2, депрессии, мигрени 3 4, и даже инсульта 5-7. Быстрое изменение электрического тока через катушки на головке индуцирует электрическое поле на коре головного мозга и результирующей нейрональной активации. Возбудимость коры головного мозга может быть модулируется МТР, который может длиться в течение более чем 30 минут после того, как стимуляция прекращается.

Предлагаемые механизмы МТР последействия включают долгосрочное потенцирование / эффект депрессивноподобному 8, переходные сдвиг ионного баланса 9, и метаболические изменения 10. Кроме того, Ди Лазаро и др. позволяют предположить, что прерывистый тета-взрыв стимуляция влияет на возбуждающие синаптические входы пирамидальных нейронов тракта, как в вынужденноеи контралатерального полушария 11.

Значительные ограничения, однако, препятствовали исследователям перевода на стенде доказательств в клинических ситуациях. Во- первых, в предыдущих исследованиях на животных, мТМС использовали для стимуляции всего головного мозга 12. Стимуляция всего головного мозга довольно сильно отличается от протоколов , используемых в исследованиях на людях 9. Другая проблема связана с длительностью стимуляции. Это, по меньшей мере, частично связано с тем, что эффективная система охлаждения была недоступна для маленьких катушек в прошлом.

В последние годы, семенных статьи были опубликованы предложения в отношении путей преодоления этих трудностей в эксперименте мТМС на маленьком мозга животных. С помощью этих моделей на животных, было обнаружено , что мозг крыс также показывает аналогичные изменения коры головного мозга возбудимости как у человека в ответ на низкочастотных МТР 13. Что еще более важно, клеточные и молекулярные механизмы МТР все чаще бейнг исследовали с использованием животных моделях МТР. Речь в данном случае является то , что особый тип ингибиторной интернейрон , как известно, наиболее чувствительной к прерывистой тета разрывного стимуляции 14. Грызун модели МТР, таким образом, открывают новые возможности для изучения столь искомых вопросы о молекулярных основ мТМС-индуцированных изменений. Если маленькие животные модели МТР могут быть использованы в большем количестве лабораторий, это может значительно ускорить и активизировать исследования в этой области.

Теперь мы опишем , как применить МТР к одностороннему полушарии головного мозга крыс, продолжение предыдущей работы 15. Изменения стимуляции индуцированных оценивали с помощью микро-позитронно-эмиссионной томографии (ПЭТ) и мРНК микрочипов для изучения МТР-индуцированных изменений в стимулированной коре головного мозга.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все процедуры с использованием животных были рассмотрены и одобрены Institutional Animal Care и использование комитета Сеульского национального университета больницы с.

1. Экспериментальная установка

  1. подготовка животных
    1. Разрешить Самцов крыс Sprague-Dawley крыс 1 неделю, чтобы адаптироваться к новой среде перед началом эксперимента.
      Примечание: Несмотря на то, 8-недельных крыс использовали в настоящем исследовании, проявочный или мозг взрослого человека может быть выбран в соответствии с научно-исследовательскими гипотезами.
  2. Ингаляционного наркоза для индукции
    1. Индуцировать и поддерживать анестезию с 5% и 2% изофлуран , растворенного в 40% / 60% и 25% / 75% кислорода / азота через камеру и носовой обтекатель, соответственно. Регулировка глубины анестезии до уровня отмены вывода педали рефлекс на носок щепотку, чтобы подтвердить правильность обезболивание.
      Примечание: Использование Awoken животных может быть лучшим выбором в поступательных терминах, но есть трудности удержать во время МТР и тэй склонны к чрезмерному стрессу.
    2. Монитор температуры тела с ректальным зондом и поддерживать его при температуре 37 ° С, используя теплокровных одеяло. Монитор глубины анестезии с помощью педали вывода рефлекс, температуру, частоту дыхания и частоту сердечных сокращений.
  3. Переключение на внутривенной анестезии для поддержания
    1. Подготовьте хвост с тампоном, смоченным спиртом. Катетеризировать боковую хвостовую вену с 24- го калибра венозного катетера для перехода к IV анестезии (рис 1А). Нагрузка пропофол внутривенно (1 мг / кг [· мин] в течение 10 мин, с использованием 10 мг / мл эмульсии) к животным. Прекратите изофлуран через 5 мин после начала загрузки пропофола.
    2. Поддерживать пропофола седации со скоростью инфузии 500 - 700 мкг / (кг · мин) в течение всего эксперимента, как и в предыдущем исследовании 16. Дополнение кислорода на уровне 0,8 л / мин через носовой конус.
      Примечание: Анестезия с пропофола, чтобы уменьшить потенциальное подавление возбудимости коры по inhalвания агента 17-19. Тем не менее, анестезия не является обязательным в опытах МРВ, и будит животные также могут быть использованы. методы анестезии должны решаться с учетом научных гипотез.
    3. Используйте ветеринарную мазь на глаза, чтобы предотвратить сухость под наркозом.
    4. Применение магнитной стимуляции (см section2) в течение 10 мин после полного перехода к внутривенной анестезии.
  4. условия восстановления
    1. Монитор жизненно важных функций во время фазы восстановления. Не оставляйте животное без присмотра, пока он не пришел в сознание достаточное для поддержания грудины лежачее. Если животное перенес операцию, не вернуть его в компании других животных, пока полностью не выздоровел.
      Примечание: Если операция для модели заболевания выполняется, послеоперационные боли управления необходимо. Тем не менее, управление боли не требуется для этого эксперимента МТР.

2. Повторные транскраниальной магнитной стимуляции

  1. Стимулятор и катушки
    1. Применение стимуляции с помощью повторяющихся стимулятора , который обеспечивает двухфазные стимулы через 25 мм по фигуре 8 катушкой. Найдите центр катушки 0,5 см латеральнее вершины на biauricular линии, и угловыми катушка 45 ° к земле.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Максимальная напряженность магнитного поля катушки 4,0 T. Магнитная катушка жестко закреплялись на встроенном держателе.
  2. порог двигателя
    1. Определения порога двигателя (МТ) в горячей точке, с центром катушки расположена на 0,5 см латеральнее вершины на biauricular линии и с поверхностью плоской на своде черепа. Это та же методология , используемая в предыдущем исследовании 20.
      Примечание: Определить MT как минимальная интенсивность стимула, напоминающей 5 или более ощутимым схваток на контралатеральной лапой на 10 последовательных стимулов. Проверьте, является ли стимуляция в первую очередь вызывает контралатеральной сокращение мышц, чтобы обеспечить одностороннее стимулирование.
  3. Применение мТМС
    1. Применить мТМС 10 мин после стабилизации глубокой анестезии. Поместите центр катушки на участке-мишени мТМС, выбранный из коры головного мозга в зависимости от вопросов исследования. Затем наклонить катушку для обеспечения прямого контакта между центром катушки и поверхностью черепа в точке стимуляции.
      Примечание: Например, угловатый Спиральные 45 ° по отношению к земле , чтобы минимизировать возможное прямое действие МРВ на контралатеральной коре (рис 1В и 1С).
    2. Тема животных на сессии 20-минутного мТМС одностороннего полушария. С помощью консоли программного обеспечения, поставить МТР с низкой частотой (1 Гц), высокочастотные (20 Гц), или фиктивный протокол стимуляции, а также установить интенсивность стимуляции на 100 - 110% от МП.
    3. Выполните 1 Гц стимуляции без отдыха. Использование программного обеспечения консольного ввода "1200" кадры для "20" мин). Для 20 Гц стимуляции, проводят 2 сек стимуляции с последующим 28сек отдыха. Использование программного обеспечения консольного ввода "1600" кадры для "20" минут.
    4. Для стимуляции мнимым, наклон катушки перпендикулярно (90 ° вращение) в своде черепа и поместите край катушки 2 см от поверхности головы (рис 1D). Закрепить держатель катушки плотно к главному устройству; нет необходимости удерживать катушку вручную в течение эксперимента.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Для компенсации акустических и других неспецифических эффектов, различные протоколы фиктивных должны использоваться для различных протоколов стимуляции. Например, 1-Гц стимуляция фиктивный можно использовать для 1 Гц мТМС экспериментов.
  4. Охлаждение катушки
    1. Используйте систему водяного охлаждения для того, чтобы повторяющиеся магнитную стимуляцию в течение более 20 мин при 1- и 20-Гц частоты стимуляции (рисунок 2). Циркулируйте ледяную воду, окружающую всю длину катушки во время эксперимента, чтобы предотвратить перегрев, хотя температура катушки или стимулятора не контролируется.
      Примечание: Коммерчески доступные охлажденные катушки крысы также могут быть использованы.
    2. Если это возможно, контролировать температуру катушки путем просмотра нагревательного датчик машины МТР. ПРИМЕЧАНИЕ: Там не было каких-либо негативных последствий, связанных с стимуляции МРВ. Существует, однако, потенциальный риск ожога, если идентификация металла уха теги используются вблизи стимулирующего катушки.

3. Micro Позитронно-эмиссионная томография

  1. подготовка животных
    1. Проведение ингаляционной анестезии для индукции и внутривенного наркоза для обслуживания (этап 1.2.1 и 1.3.1). Нанести 1 Гц мТМС животному в течение 10 мин при интенсивности стимуляции 100-110% от МП.
    2. Через пять минут после окончания стимуляции МРВ, вводят 1 мКи 2- [F-18] фтор-дезоксиглюкозы (18 ФДГ) , растворенного в 0,5 мл физиологического раствора внутривенно с помощью катетера в хвостовую вену. Разрешить 30 минут для 18 поглощения ФДГ. Примечание: Поместите крысу под наркозом в течение всего микро-PET эксперимент.
  2. анализ изображений
    1. С помощью ПЭТ-сканер для получения изображений мозга, чтобы подтвердить unilaterality стимуляции. Реконструировать изображения с 3-D итеративного алгоритма. Для оценки изменений в обмене веществ , вызываемых МТР, идентифицировать области , представляющие интерес (трансформирования) в изображениях поперечных срезов мозга 21.
  3. эвтаназия
    1. После выполнения изображений микро-ПЭТ, эвтаназии крыс в камере укажи с диоксидом углерода, в то время как крысы находятся в глубокой анестезии.

4. мРНК Microarray

  1. эвтаназия
    1. Индуцировать и поддерживать анестезию с 5% и 2% изофлуран , растворенного в 40% / 60% и 25% / 75% кислорода / азота через камеру и носовой обтекатель, соответственно. Обезболить глубоко до уровня отмены вывода педали рефлекс на носок крайнем случае перед тем, обезглавлены.
    2. Обезглавьте крыс на эвтаназию 5 мин после 1 сессии 1-Гц МТР.
  2. урожай тканей
    1. Разложите материалы и хирургические инструменты в порядке использования, в том числе сложенных бумажных полотенец, кости костными кусачками, microscissors, большие хирургические ножницы, microforcep, скальпелем № 10 или 11, закрытой крышкой 10 см стеклянной чашке Петри заполнены льдом и трубки 1,5 мл. Подготовьте пластиковый пакет для утилизации туши.
    2. Сделать надрез по средней линии кожи в черепе anterioposteriorly. Попросту рассекают мягкие ткани и окружающие мышцы с помощью хирургических ножниц и удалить кусок кости черепа, используя кости костными кусачками. Быстро рассекать свежий мозг тщательно из черепа. Затем положите ее на лед, используя microforceps и microscissors. Ополосните мозговую ткань в ледяной нормального физиологического раствора.
    3. Перенести мозг сухой лед немедленно, а затем хранить его при температуре -80 ° С в трубке до дальнейшей обработки.
    4. Разморозить ткани мозга до сбора урожая.
    5. Поместите мозг спинной стороной вверх, и урожай ткани мозга от стimulated кору головного мозга (вокруг горячего пятна в первичной моторной коре) на льду с помощью microforceps и microscissors. Поместите заготовленной ткани в 1,5 мл трубки.
  3. подготовка РНК
    1. Экстракт тотальной РНК из гомогенатов тканей с использованием реактива для лизиса 22. Процесс ДНКазой пищеварения и очистки процедур. Количественно образцы РНК и аликвоты и хранить их при температуре -80 ° С до использования.
    2. Для контроля качества, оценить чистоту и целостность РНК с помощью гель-электрофореза в денатурирующем, при соотношении OD 260: 280, и анализируют их на коммерчески доступного анализатора.
  4. Этикетировочное и очистка
    1. Amplify и очищают тотальной РНК с использованием коммерчески доступного набора для амплификации РНК с получением биотинилированного кРНК. Если коротко, то обратный транскрибировать 550 нг тотальной РНК в кДНК с использованием Т7 олиго (дТ) праймера. Обобщить и в пробирке транскрибировать второй нити кДНК , а затем пометить его с биотин-NTP.
    2. После того, как PURфикация, количественную оценку кДНК с использованием спектрофотометра.
  5. Гибридизация и экспорта данных 23
    1. Используйте выражение beadchip для анализа экспрессии мРНК. Гибридизацию меченных 750 нг кДНК образцов для каждого выражения шарика массива крысу-12 в течение 16 - 18 ч при 58 ° С. Провести обнаружение сигнала массива с помощью стрептавидин-Су3.
    2. Сканирование массивов с конфокальной сканера. Выполните обработку экспорта данных массива и анализ с использованием коммерчески доступного программного обеспечения.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Пятнадцать 8-недельные самцы Sprague-Dawley крыс были использованы для отдельного анализа надежности между оценщик определения МТ. Используя пальпацию подергивание мышц, МЦ были получены у всех крыс и измеряется как 33,00 ± 4,21% максимального выхода стимулятора (% MSO) и 33,93 ± 0,88% MSO, соответственно, двумя независимыми исследователями. смещения Бленд-Альтман был -0,93, а 95% пределов соглашения были -9.13 до 7.26%.

В экс...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Основная цель данного исследования состояла в том, чтобы ввести животную модель односторонних МТР. Хотя одностороннее стимулирование является одним из наиболее фундаментальных характеристик исследований человека МТР, многие исследования не принимали его в маленьких животных. Тем не менее, Ротенберг и др. 15 записано контралатеральной MEPs при стимуляции 100% МП с помощью катушки фигура-8 с наружным диаметром лепестка 20 мм, в то время как стимуляция с 112,5% и 133,3% MT производства Ипсилатерал...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Эта работа была поддержана грантом Корейского исследовательского фонда, финансируемым корейским правительством (KRF-2008-313-E00458). Авторы благодарят Джин-Джу Ли за техническую помощь.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Гомеотермическое одеяло с ректальным зондомГарвардский аппарат507222F
Изофлуран (Форан сол.)Choongwae
Propofol (Provive Inj. 1% 20 мл)Claris Lifesciences
Повторяющийся магнитный стимулятор (Magstim Rapid2)Magstim Company Ltd
25 мм катушка в виде 8Magstim Company Ltd1165-00
PET-CTGE Healthcare
QIAzol Lysis ReagentQiagen(патент США No 5,346,994)
RNeasy Lipid Tissue Mini KitQiagen74804
RNeasy Mini Spin ColumnsQiagen(Mat No. 1011708)
Agilent 2100 БиоанализаторAgilent Technologies Ambion
Illumina Набор для амплификации РНКAmbion
Nanodrop Спектрофотометр NanoDropND-1000
Illumina RatRef-12 Экспрессия BeadChipIllumina, Inc.
Амершам флуорлинк стрептавидин-Cy3GE Здравоохранение Био-Науки

Ссылки

  1. Lefaucheur, J. P., et al. Neurogenic pain relief by repetitive transcranial magnetic cortical stimulation depends on the origin and the site of pain. J Neurol Neurosurg Psychiatry. 75 (4), 612-616 (2004).
  2. Hirayama, A., et al. Reduction of intractable deafferentation pain by navigation-guided repetitive transcranial magnetic stimulation of the primary motor cortex. Pain. 122 (1-2), 22-27 (2006).
  3. O'Reardon, J. P., et al. Efficacy and safety of transcranial magnetic stimulation in the acute treatment of major depression: a multisite randomized controlled trial. Biol Psychiatry. 62 (11), 1208-1216 (2007).
  4. Brighina, F., et al. Facilitatory effects of 1 Hz rTMS in motor cortex of patients affected by migraine with aura. Exp Brain Res. 161 (1), 34-38 (2005).
  5. Lefaucheur, J. P. Stroke recovery can be enhanced by using repetitive transcranial magnetic stimulation (rTMS). Neurophysiol Clin. 36 (3), 105-115 (2006).
  6. Khedr, E. M., Ahmed, M. A., Fathy, N., Rothwell, J. C. Therapeutic trial of repetitive transcranial magnetic stimulation after acute ischemic stroke. Neurology. 65 (3), 466-468 (2005).
  7. Fregni, F., et al. A sham-controlled trial of a 5-day course of repetitive transcranial magnetic stimulation of the unaffected hemisphere in stroke patients. Stroke. 37 (8), 2115-2122 (2006).
  8. Pascual-Leone, A., Valls-Sole, J., Wassermann, E. M., Hallett, M. Responses to rapid-rate transcranial magnetic stimulation of the human motor cortex. Brain. 117 (4), 847-858 (1994).
  9. Ridding, M. C., Rothwell, J. C. Is there a future for therapeutic use of transcranial magnetic stimulation). Nat Rev Neurosci. 8 (7), 559-567 (2007).
  10. Valero-Cabre, A., Payne, B. R., Pascual-Leone, A. Opposite impact on 14C-2-deoxyglucose brain metabolism following patterns of high and low frequency repetitive transcranial magnetic stimulation in the posterior parietal cortex. Exp Brain Res. 176 (4), 603-615 (2007).
  11. Di Lazzaro, V., et al. The physiological basis of the effects of intermittent theta burst stimulation of the human motor cortex. J Physiol. 586 (16), 3871-3879 (2008).
  12. Post, A., Keck, M. E. Transcranial magnetic stimulation as a therapeutic tool in psychiatry: what do we know about the neurobiological mechanisms. J Psychiatr Res. 35 (4), 193-215 (2001).
  13. Muller, P. A., Dhamne, S. C., Vahabzadeh-Hagh, A. M., Pascual-Leone, A., Jensen, F. E., Rotenberg, A. Suppression of motor cortical excitability in anesthetized rats by low frequency repetitive transcranial magnetic stimulation. PLoS One. 9 (3), 91065(2014).
  14. Funke, K., Benali, A. Modulation of cortical inhibition by rTMS - findings obtained from animal models. J Physiol. 589 (18), 4423-4435 (2011).
  15. Rotenberg, A., et al. Lateralization of forelimb motor evoked potentials by transcranial magnetic stimulation in rats. Clin Neurophysiol. 121 (1), 104-108 (2010).
  16. Beom, J., Kim, W., Han, T. R., Seo, K. S., Oh, B. M. Concurrent use of granulocyte-colony stimulating factor with repetitive transcranial magnetic stimulation did not enhance recovery of function in the early subacute stroke in rats. Neurol Sci. 36 (5), 771-777 (2015).
  17. Haghighi, S. S., Green, K. D., Oro, J. J., Drake, R. K., Kracke, G. R. Depressive effect of isoflurane anesthesia on motor evoked potentials. Neurosurgery. 26, 993-997 (1990).
  18. Fishback, A. S., Shields, C. B., Linden, R. D., Zhang, Y. P., Burke, D. The effects of propofol on rat transcranial magnetic motor evoked potentials. Neurosurgery. 37 (5), 969-974 (1995).
  19. Rohde, V., Krombach, G. A., Baumert, J. H., Kreitschmann-Andermahr, I., Weinzierl, M., Gilsbach, J. M. Measurement of motor evoked potentials following repetitive magnetic motor cortex stimulation during isoflurane or propofol anaesthesia. Br J Anaesth. 91 (4), 487-492 (2003).
  20. Lee, S. A., Oh, B. M., Kim, S. J., Paik, N. J. The molecular evidence of neural plasticity induced by cerebellar repetitive transcranial magnetic stimulation in the rat brain: a preliminary report. Neurosci Lett. 575, 47-52 (2014).
  21. Fu, Y. K., et al. Imaging of regional metabolic activity by (18)F-FDG/PET in rats with transient cerebral ischemia. Appl Radiat Isot. 67 (18), 1743-1747 (2009).
  22. Silveyra, P., Catalano, P. N., Lux-Lantos, V., Libertun, C. Impact of proestrous milieu on expression of orexin receptors and prepro-orexin in rat hypothalamus and hypophysis: actions of Cetrorelix and Nembutal. Am J Physiol Endocrinol Metab. 292 (3), 820-828 (2007).
  23. Zidek, N., Hellmann, J., Kramer, P. J., Hewitt, P. G. Acute hepatotoxicity: a predictive model based on focused illumina microarrays. Toxicol Sci. 99 (1), 289-302 (2007).
  24. Hsieh, T. H., Dhamne, S. C., Chen, J. J., Pascual-Leone, A., Jensen, F. E., Rotenberg, A. A new measure of cortical inhibition by mechanomyography and paired-pulse transcranial magnetic stimulation in unanesthetized rats. J Neurophysiol. 107 (3), 966-972 (2012).
  25. Salvador, R., Miranda, P. C. Transcranial magnetic stimulation of small animals: a modeling study of the influence of coil geometry, size and orientation. Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. 2009, 674-677 (2009).
  26. Parthoens, J., Verhaeghe, J., Servaes, S., Miranda, A., Stroobants, S., Staelens, S. Performance Characterization of an Actively Cooled Repetitive Transcranial Magnetic Stimulation Coil for the Rat. Neuromodulation. , (2016).
  27. Toro, R., et al. Brain size and folding of the human cerebral cortex. Cereb Cortex. 18 (10), 2352-2357 (2008).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Односторонняя рTMSстимуляция мозга крыскатушка «восьмерка»система водяного охлажденияопределение моторного порогаранние гены экспрессииэкспрессия BDNFметаболизм глюкозымежполушарные различия