Методическая статья

Gap Junctional межклеточной коммуникации: Функциональная биомаркеров для оценки неблагоприятного воздействия токсикантов и токсинами, и Польза для здоровья натуральных продуктов

DOI:

10.3791/54281

⸱

25 декабря 2016 г.

 ,  , 
1Department of Pediatrics & Human Development, Institute for Integrative Toxicology, Michigan State University, 2RECETOX — Research Centre for Toxic Compounds in the Environment, Faculty of Science, Masaryk University

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот протокол описывает скальпель погрузо-флуоресцентный краситель метод передачи, который измеряет межклеточной коммуникации через щелевых контактов каналов. Gap узловой межклеточной связи является одним из основных клеточный процесс, с помощью которого гомеостаз ткани сохраняется и нарушение этой клеточной сигнализации имеет неблагоприятные последствия для здоровья.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот протокол описывает погрузо-флуоресцентный перенос красителя скальпель техника (SL-DT), который измеряет межклеточной коммуникации через щелевых каналов, который является одним из основных межклеточное процесс, с помощью которого поддерживается гомеостаз ткани. Прерывание разрыва соединительного межклеточной коммуникации (GJIC) путем токсикантов, токсинов, лекарств и т.д. было связано с многочисленными неблагоприятными последствиями для здоровья. Многие генетические основе заболеваний человека были связаны с мутациями в генах щелевых контактов. Техника SL-DT представляет собой простой функциональный тест для одновременной оценки GJIC в большой популяции клеток. Анализ включает в себя предварительное нагружение клеток с флуоресцентным красителем, кратко возмущающее клеточную мембрану с скальпелем через популяцию клеток. Флуоресцентный краситель затем дают возможность пройти через щелевых каналов в соседних сотах в течение указанного времени. Анализ затем останавливали добавлением формалина к клеткам. Распространение флуофлуоресцентным красителем через популяцию клеток оценивают с помощью микроскопа эпифлуоресцентной и изображения анализируются с любым количеством морфометрических программных пакетов, которые доступны, в том числе свободных программных пакетов, найденных на свободном доступе. Этот анализ был также адаптирован для исследований в естественных условиях с использованием срезов тканей из различных органов у обработанных животных. В целом, анализ SL-DT может служить широкий спектр экстракорпорального фармакологических и токсикологических потребностей, а также потенциально могут быть адаптированы для высокой пропускной способности, установленных планом систем с автоматизированной флуоресцентной микроскопии визуализации и анализа для выяснения больше образцов в более короткие сроки.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Общая цель этого метода является обеспечение простой, всеобъемлющий и относительно недорогой метод для оценки потенциальной токсичности соединений. Это подход , в пробирке , который может быть использован в нескольких клеточных линиях. Стандартная клеточная биология лаборатории, оснащенные эпифлуоресцентной микроскопов можно проводить исследования с помощью этого теста.

Наши базовые знания клеточных функций была сильно зависит от биопроб в пробирке, и стал одним из важнейших компонентов в токсикологических оценках лекарственных средств , загрязняющих окружающую среду, а также пищевых продуктов родился загрязняющих веществ. К сожалению, нет ни одного в пробирке системы биоанализа , которые могут комплексно удовлетворить требованиям всех токсикологических оценок. Многие в анализах пробирке разработаны и оптимизированы для оценки, а также оценки конкретного биохимического или молекулярной конечной точки. Они довольно часто в сочетании с высокой пропускной способностью, созданной для отражения возмущенияопределенный пути передачи сигнала, такие как эстроген-рецептор сигнализации 1. Эта стратегия была довольно успешной, но обширное количество путей передачи сигнала, участвующих в экспрессии генов делает задачу выбора конкретного сигнального пути для оценки достаточно сложной. Высокие сквозные протоколы, поставленные в настоящее время разрабатываются и используются для одновременного измерения многочисленных сигнальных путей, который был один из подходов к преодолению некоторых ограничений единичных анализов. Тем не менее, не все сигнальные пути были успешно включены в более всеобъемлющие подходы, а также новые сигнальные пути постоянно обнаружили, что еще больше усложняет этот процесс оценки. Используя обширные количества подходов в пробирке, в частности , высокой пропускной поставленных систем, для комплексных токсикологические оценки также являются очень дорогими и не способствуют большей одного исследователя под руководством научно - исследовательских проектов.

GJIC представляет собой процесс ВИГhtly контролируется изменением напряжения, концентрации кальция, рН, окислительно - восстановительного баланса, регулируемые основными трансдукции внутриклеточного сигнала путей и взаимодействия с мембраной и цитоскелета белков 2,3. Таким образом, ингибирование GJIC могут отражать различные типы клеточного стресса, нарушение функций различных клеточных функций, или возмущения различных путей передачи сигналов. Другой подход к преодолению использования ограниченных биопробы трансдукции сигнала , чтобы воспользоваться биологическими явлениями , что многие, если не большинство, пути передачи сигналов дополнительно модулируется кооперативных межклеточных сигнальных систем через щелевых контактов каналов 4-8. Несмотря на то, межклеточные системы сигнализации также многочисленные и при многократном управления токопровода, межклеточное передача сигналов через щелевых каналов в конечном счете, зависит от каналов открываются, частично закрытое или полностью закрыта. Это обеспечивает конечную точку, которая может быть легко измерить с помощью различногов пробирке биопроб систем 7. Учитывая , что гомеостатическое набор точка ткани требует открытых каналов, определения влияния соединений на разрыв соединительного межклеточной коммуникации (GJIC) представляет собой более комплексный подход при определении потенциальных токсических эффектов соединений 4,8. По сути, это критическое биологическое явление, которое играет центральную роль в координации нескольких событий передачи сигналов, контролирующих экспрессию генов обеспечивает широкую оценку токсических эффектов. Таким образом, биопробы, которые оценивают GJIC являются отличной отправной точкой для оценки токсичностью соединений.

Наиболее обширные методы, используемые для оценки GJIC основаны на предварительной загрузки клеток с флуоресцентным зондом, а затем мониторинга миграции красителя из загруженной клетки или клеток на соседние ячейки. Методы для предварительной загрузки красителя вовлекли микроинъекции 9, царапать загрузки 10, и метиловых эфиров зондов 11 . Перенос красителя , погрузо-флуоресцентный метод скальпель (SL-ДТ) является модификацией нагрузки скребкового - краситель анализа переноса , разработанный Эль Fouly 10. Вместо того , чтобы более инвазивной передряги, метод скальпель загрузки этого отчета включает в себя нежный рулон скальпелем с круглым лезвием через монослой клеток , которые сводят к минимуму повреждения инвазивный (рисунок 1). Преимущества этого метода являются токсикологическая оценка популяции клеток, а не отдельных клеток анализа микроинъекции. Кроме того, простота данного метода позволяет быстро выявить нескольких пластин в течение короткого времени, тогда как методы, использующие методы микроинъекции и методы, которые используют метиловые эфиры флуоресцентных зондов потребляют значительно больше времени и требует значительно более высокий уровень квалификации.

Хотя не существует ни одного метода, чтобы удовлетворить все потребности изучения GJIC; анализ SL-DT представляет собой простой, достаточно недорогой и универсальный тест, который можетудовлетворения многих потребностей для первоначальных оценок токсичности различных соединений. Основные преимущества включают в себя: простота, отсутствие особой необходимости в оборудовании или навыков, которые необходимы для других методов, таких как микроинъекции, флуоресцентного восстановления после фотообесцвечивания (FRAP) анализа и локальной активации молекулярных флуоресцентных анализов зондов, быстрой и одновременной оценки GJIC в большой количество клеток, способствует высокой пропускной способности установки с автоматизированной флуоресцентной микроскопии визуализации и анализа, а также возможности его адаптации для исследований в естественных условиях.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Протокол данного исследования был одобрен уходу за животными и использованию комитета Национальных институтов здравоохранения наук Японии, который является , где в естественных условиях эксперименты были сделаны, чтобы гарантировать , что крысы относились гуманно и с учетом облегчения страданий.

1. SL-DT биопроб

  1. Семя 3 х 10 5 WB-F344 эпителиальные печени крысы клеток на 35 мм диаметр культуральные планшеты , содержащие орлов модифицированной среде плюс 5% эмбриональной телячьей сыворотки, и культивирования клеток в инкубаторе при 37 ° С , 100% относительной влажности (RH), 5% CO 2.
  2. Культуры клеток, пока они не достигают 100% слияния (как правило, 2 дня) и провести нужные экспериментальное лечение клеток, как описано ниже.
    1. Проведение экспериментов доза реагирования
      1. Добавляют 10 мкл и 20 мкл 2 мМ исходного раствора фенантрена в 100% ацетонитрила и 4 мкл, 6 мкл и 8 мкл 20 мМ маточного раствора phenanthrene в 100% ацетонитрила до трех пластин клеток, содержащих 2 мл среды роста для каждого добавленного объема исходного раствора.
      2. Добавляют 4 мкл, 6 мкл, 8 мкл, 10 мкл и 20 мкл 100% -ного раствора ацетонитрила с трех пластин клеток, содержащих 2 мл среды роста для каждого добавленного объема раствора ацетонитрила, чтобы служить в качестве управления транспортным средством.
      3. Инкубируйте пластины в течение 15 мин в термостате при 37 ° C, 100% относительной влажности и 5% СО 2.
      4. Перейдите к шагу 1.3.
    2. Проведение экспериментов Время отклика
      1. Добавить 7 мкл 20 мМ маточного раствора фенантрена в 100% ацетонитрила до трех пластин клеток , содержащих 2 мл ростовой среды для каждой временной точки (то есть, 0, 1, 2, 3, 4, 5, 10 мин).
      2. Добавить 7 мкл 100% ацетонитрила до трех пластин клеток, содержащих 2 мл ростовой среды, для каждой временной точки, чтобы служить в качестве управления транспортным средством.
      3. Инкубируйте пластины для каждого указанного времени рoint в термостате при температуре 37 ° С, 100% относительной влажности и 5% СО 2.
      4. Перейдите к шагу 1.3.
    3. Провести эксперименты Время восстановления
      1. Добавить 7 мкл 20 мМ маточного раствора фенантрена в 100% ацетонитрила до трех пластин клеток, содержащих 2 мл ростовой среды в течение 15 мин.
      2. Добавить 7 мкл 100% ацетонитрила до трех пластин клеток, содержащих 2 мл ростовой среды в течение 15 мин, чтобы служить в качестве управления транспортным средством.
      3. Декантируйте среду, содержащую либо фенантрен или ацетонитрил и полоскание 3-кратный каждый с 3 мл фосфатно-буферного раствора (PBS).
      4. Добавляют 2 мл свежей среды для роста к каждой пластине и инкубировать нужное время для восстановления (то есть, 25, 35, 45, 60, 90, 120, 150, 180, 240, 360 мин) в термостате при температуре 37 ° С, 100 % относительной влажности и 5% СО 2.
      5. Перейдите к шагу 1.3.
    4. Проведение экспериментов Механизм
      1. Добавьте ингибитор трансдукции сигнала, т.е.
      2. Добавьте 5 мкл 100% ацетонитрила до трех пластин клеток, содержащих 2 мл ростовой среды в течение 15 мин, чтобы служить в качестве управления транспортным средством.
      3. Добавить 7 мкл 20 мМ маточного раствора фенантрена в 100% ацетонитрила до трех пластин клеток, содержащих 2 мл среды для роста плюс D609 в течение еще 15 мин.
      4. Добавить 7 мкл 100% ацетонитрила до трех пластин клеток, содержащих 2 мл среды для роста, плюс 100% ацетонитрила в течение еще 15 мин, чтобы служить в качестве управления транспортным средством.
      5. Перейдите к шагу 1.3.
  3. Откажитесь культуральной среды либо осторожно наливая от среды или с помощью вакуумного отсоса.
    Примечание: Утилизировать культуральной среды, содержащей опасные отходы надлежащим образом.
  4. Прополощите клетки трижды, каждый раз с 3 мл PBS и либо сцеживать или аспирата betweeп полосканий.
  5. Пипетка 1 мл 1 мг / мл Люцифер желтого красителя, растворенного в PBS (LY) в каждую ячейку пластины.
  6. Поджать красителя в клетки, осторожно прокатки # 20 из хирургической стали лезвие с закругленным краем с помощью популяции клеток в трех различных областях пластины.
    1. Начнем с размещения скальпель перпендикулярно ( под углом 90 °) и 5 мм от края культурального планшета, а затем катить скальпелем с этим пр мым углом примерно под углом 15 ° (см рисунок 1).
      Примечание: Это достигается за счет защемления скальпель между указательным и большим пальцем. Используйте тяжести, чтобы позволить скальпель, чтобы аккуратно перейти от 90 ° до 15 ° положение (как закругленная лезвие просто зашкаливает клетки). Это движение оставит визуально заметный отступа линии.
  7. Инкубируйте клетки с раствором LY в течение 3 мин при комнатной температуре.
  8. Слейте или аспирата LY и промыть три раза с 3 мл PBS, чтобы удалить все extracellular краситель для устранения внеклеточный фоновой флуоресценции.
  9. Добавьте 0,5 мл 10% -ного раствора формалина, забуференном фосфатом, чтобы зафиксировать клетки.
    Примечание: После фиксации в формалине, воздух сухой клетки и хранить в темноте в течение до двух лет с минимальным фотообесцвечивания красителя LY. При необходимости повторной гидратации с 10% -ным раствором формалина, чтобы визуализировать переднюю флуоресцентный краситель.
  10. Просмотр фиксированные клетки, используя эпифлуоресцентной микроскопа, снабженного дихроичным кубом для пиков возбуждения / испускания 428/536 нм при увеличении 200Х. Align все пластины так, чтобы отступы линия параллельна горизонтальной поля зрения.
    Примечание: FITC дихроичных куб хорошо работает.
    1. Захват изображения с ПЗС-камерой и поддержкой программного обеспечения.
      1. Откройте поддерживающее программное обеспечение для ПЗС-камеры и использовать настройки для автоматической экспозиции. С помощью кнопки «захват» в цифровом приобрести изображение. Сохранить изображение как .tif файлов с помощью кнопки "Сохранить".

    2. Адаптация SL-DT анализа для ткани печени

    1. Удалить около сантиметра кусочек 2 х 2 из левой доли печени от 5 недель, самцы Fischer 344 крыс с использованием рассечение ножницами и поместить его на пластиковую взвешивании плита , покрытая влажной марлей 12.
    2. Пипетка 0,5 мл раствора ПБС, содержащего 1 мг / мл каждого из Lucifer желтый и родамина-декстрана (РД) на поверхность среза печени в пластике взвешивать пластины.
      Примечание: RD представляет собой краситель, который не может пройти щелевых каналов и отметит ячейки, которые были загружены.
    3. Сделать от трех до пяти надрезов длиной около 1 см на поверхности среза печени, который имеет раствор красителя в взвешивании пластины с острым лезвием, а затем добавить дополнительный краситель является достаточным для заполнения надрезы.
    4. Инкубируйте ткани в течение 3 мин при комнатной температуре на пластиковой взвешивании пластины.
    5. Промыть три раза с 5 мл PBS.
    6. Закрепить Ove тканиrnight в 30 мл 10% -ного фосфатно-буферном формалине в 50 мл коническую центрифужную пробирку в темноте при комнатной температуре.
    7. На следующий день, мыть ломтики с водой, обрезать ткань вокруг разреза с рассечения ножницами в 1 х 1 х 0,5 см 3 полоски , а затем использовать стандартные методы для встраивания ломтики в парафиновой 13.
    8. Раздел ломти перпендикулярно к линии разреза по толщине 5 мкм и хранить образцы в темноте до готовности быть визуализируют с помощью стандартных методов секционирования с микротома 13.
    9. Используйте эпифлуоресцентной микроскопа , оборудованного цифровой камерой CCD для визуализации и захвата изображений флуоресцентного красителя фронтов в соответствии с разделом 1.10 7.

    3. Количественная GJIC

    1. Измерьте распространение флуоресцентного красителя с использованием морфометрического пакет программного обеспечения (например, ImageJ).
      1. Перейдите на вкладку "Файл" и нажмите кнопку "Открыть", чтобы открытьсохраненное изображение.
      2. Нажмите на кнопку "Free Hand Tool" в панели инструментов Tab, чтобы проследить контур фронта красителя.
      3. Перейдите на вкладку "Анализ" и нажмите кнопку "Measure".
        Примечание: При этом генерируется значение площади разворота листа, который можно скопировать в другие программы распространения листа, если это необходимо.
    2. С помощью программы работы с электронными таблицами, вычислить долю контроля (ВОК) путем деления площади распространения красителя в экспериментальной пластине области краситель пройденное в контрольной пластине, используя следующее уравнение:
      figure-protocol-1
      А е = площадь распространения красителя в клетках , подвергнутых экспериментальной переменной, например, клетки , обработанные химическим веществом при определенной дозе или во времени
      А С = площадь распространения красителя в контроле, которые являются клетки , обработанные транспортное средство , используемое для растворения химический интерес
      Примечание: Для определения влияния транспортного средства,А е будет площадь распространения красителя в клетках , обработанных транспортным средством и С будет площадь распространения красителя в клетках , не обработанных транспортным средством. Влияние транспортного средства предпочтительно должно быть менее 10%.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Прерывание GJIC широко используется в качестве биомаркеров для идентификации токсичных соединений на nongenotoxic, эпигенетической уровень контроля гена , который вызывает неблагоприятные последствия для здоровья 14. Например, полициклические ароматические углеводороды (ПАУ) вездесущи загрязнители окружающей среды , но различаются по их эпигенетическими токсичностью в зависимости от их молекулярных структур 15. Нижние ПАУ молекулярная масса обычно находятся на относ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Анализ SL-DT представляет собой простой и универсальный метод измерения GJIC, но есть несколько важных проблем, которые должны быть учтены при разработке соответствующих экспериментальных протоколов. Для получения надежных измерений GJIC с помощью анализа SL-DT должно быть хорошее распространение красителя из LY через щелевые контакты клеток. Как минимум, достаточное время должно быть выбрано, чтобы гарантировать, что краситель распространяется через восемь или более рядов ячеек из скальпель загружены клеток в обоих нап...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Поддерживается грантами NIEHS #R01 ES013268-01A2, и содержание является исключительной ответственностью автора и не обязательно отражает официальную точку зрения NIEHS, и поддерживается проектом CETOCOEN UPgrade No. CZ.1.05/2.1.00/19.0382.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
WB-F344 Эпителиальные клетки печени крысыОт докторов Дж.В. Гришэма и М.С. Цао из Университета Северной Каролины (Чапел-Хилл, Северная Каролина)НетПредоставлено докторами Дж.В. Гришэмом и М.С. Цао Университет Северной Каролины-Чапел-Хилл-Северная Каролина
35 мм Культуральные планшетыCorning430165
25 см<суп>2 колбы для культурыCorning430639
75 см<суп>2 колбы для культурыCorning430641
D-medium, модифицированная среда Eagles ThermoFisher/GIBCO Формула No 78-5470EF
фетальная бычья сывороткаThermoFisher/GIBCO 10437
0,25% трипсин-ЭДТА ThermoFisher/GIBCO 15050
фосфатный буферный солевой раствордомашнего приготовлениясм. ниже ингредиент cat#137 мМ NaCl, 2,7 мМ KCl, 10 мМ Na2PO4, 2 мМ KH2PO4
KClJT Baker - Mallinckrodt 3040-01
NaClJT Baker - Mallinckrodt 3624-05
Na2HPO4JT Baker - Mallinckrodt 3819--01
KH2PO4JT Baker - Mallinckrodt 3246-01
Люцифер желтый CH, соль литияSigma-Aldrich ChemicalL0259
родамин-декстранSigma-Aldrich ChemicalR9379
1-метилантраценSigma-Aldrich Chemical
фенантренSigma-Aldrich ChemicalP11409
ресвератролSigma-Aldrich ChemicalR5010
D609Токрис Бионаука 1437
ацетонитрилEMDAX0145-1
37% раствор формальдегидаJT Baker - Mallinckrodt 2106-01
#20 хирургическое лезвиеFine Science Tools Inc. 10317-14
Конические стерильные пробирки 50 млThermo scientific 
Эпифлуоресцентный микроскоп Nikon Nikon -Mager ScientificEclipse TE300
Nikon FITC дихроичный кубNikon -Mager Scientific96107
CCD камераNikon -Mager ScientificCool Snap EZ CCD
система формирования изображенийNikon -Mager ScientificNikon NIS-Elements F2.2.
ImageJНациональный институт здравоохраненияhttp://imagej.nih.gov/ij/
339652 Nikon

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Rotroff, D. M., et al. Predictive endocrine testing in the 21st century using in vitro assays of estrogen receptor signaling responses. Environ.Sci.Technol. 48 (15), 8706-8716 (2014).
  2. Axelsen, L. N., Calloe, K., Holstein-Rathlou, N. H., Nielsen, M. S. Managing the complexity of communication: regulation of gap junctions by post-translational modification. Front Pharmacol. 4, 130(2013).
  3. Nielsen, M. S., et al. Gap junctions. Compr.Physiol. 2 (3), 1981-2035 (2012).
  4. Sovadinova, I., et al. Phosphatidylcholine specific PLC-induced dysregulation of gap junctions, a robust cellular response to environmental toxicants, and prevention by resveratrol in a rat liver cell model. PLoS.One. 10 (5), e0124454(2015).
  5. Trosko, J. E., Chang, C. C. Biologically Based Methods for Cancer Risk Assessment. Travis, C. C. , Plenum Press. New York. 165-179 (1989).
  6. Trosko, J. E. Biomarkers and occupational health: progess and perspectives. Mendelsohn, M. D., Peeters, J. P., Normandy, M. J. , John Henry Press. Washington D.C. 264-274 (1995).
  7. Upham, B. L. Role of integrative signaling through gap junctions in toxicology. Curr.Protoc.Toxicol. 47, 2.18:2.18.1-2.18:2.18.18 (2011).
  8. Vinken, M., et al. Connexins and their channels in cell growth and cell death. Cell.Signal. 18 (5), 592-600 (2006).
  9. Browne, C. L., Wiley, H. S., Dumont, J. N. Oocyte-follicle cell gap junctions in Xenopus laevis and the effects of gonadotropin on their permeability. Science. 203 (4376), 182-183 (1979).
  10. El-Fouly, M. H., Trosko, J. E., Chang, C. C. Scrape-loading and dye transfer. A rapid and simple technique to study gap junctional intercellular communication. Exp.Cell Res. 168 (2), 422-430 (1987).
  11. Wade, M. H., Trosko, J. E., Schindler, M. A fluorescence photobleaching assay of gap junction-mediated communication between human cells. Science. 232 (4749), 525-528 (1986).
  12. Upham, B. L., et al. Structure-activity-dependent regulation of cell communication by perfluorinated fatty acids using in vivo and in vitro model systems. Environ. Health Perspect. 117 (4), 545-551 (2009).
  13. Paraffin Processing of Tissue. Protoplasma. , http://protocolsonline.com/histology/sample-preparation/paraffin-processing-of-tissue (2012).
  14. Trosko, J. E. Gap junctional intercellular communication as a biological "Rosetta stone" in understanding, in a systems biological manner, stem cell behavior, mechanisms of epigenetic toxicology, chemoprevention and chemotherapy. J. Membr. Biol. 218 (1-3), 93-100 (2007).
  15. Upham, B. L., Weis, L. M., Trosko, J. E. Modulated gap junctional intercellular communication as a biomarker of PAH epigenetic toxicity: structure-function relationship. Environ.Health Perspect. 106, 975-981 (1998).
  16. Upham, B. L., et al. Tumor promoting properties of a cigarette smoke prevalent polycyclic aromatic hydrocarbon as indicated by the inhibition of gap junctional intercellular communication via phosphatidylcholine-specific phospholipase. C. Cancer Sci. 99 (4), 696-705 (2008).
  17. Sai, K., Kanno, J., Hasegawa, R., Trosko, J. E., Inoue, T. Prevention of the down-regulation of gap junctional intercellular communication by green tea in the liver of mice fed pentachlorophenol. Carcinogenesis. 21 (9), 1671-1676 (2000).
  18. Upham, B. L., Deocampo, N. D., Wurl, B., Trosko, J. E. Inhibition of gap junctional intercellular communication by perfluorinated fatty acids is dependent on the chain length of the fluorinated tail. Int. J. Cancer. 78 (4), 491-495 (1998).
  19. Trosko, J. E., Tai, M. H. Infections and inflammation: Impacts on oncogenesis. Impacts on Oncogenesis. Contrib Microbiol. Dittmar, T., Zaenkar, K. S., Schmidt, A. , Karger. Basel. 45-65 (2006).
  20. Trosko, J. E. Human stem cells as targets for the aging and diseases of aging processes. Med. Hypotheses. 60 (3), 439-447 (2003).
  21. JE, T. rosko Stem Cells and Cancer. Dittmar, T., Zaenkar, K. , Nova Publishers. New York. 147-188 (2008).
  22. Osgood, R. S., et al. Polycyclic aromatic hydrocarbon-induced signaling events relevant to inflammation and tumorigenesis in lung cells are dependent on molecular structure. PLoS. One. 8 (6), e65150(2014).
  23. Weis, L. M., Rummel, A. M., Masten, S. J., Trosko, J. E., Upham, B. L. Bay or baylike regions of polycyclic aromatic hydrocarbons were potent inhibitors of gap junctional intercellular communication. Environ.Health Perspect. 106 (1), 17-22 (1998).
  24. Yotti, L. P., Chang, C. C., Trosko, J. E. Elimination of metabolic cooperation in Chinese hamster cells by a tumor promoter. Science. 206 (4422), 1089-1091 (1979).
  25. Zhao, Y., et al. New caged coumarin fluorophores with extraordinary uncaging cross sections suitable for biological imaging applications. J. Am. Chem. Soc. 126 (14), 4653-4663 (2004).
  26. Goldberg, G. S., Bechberger, J. F., Naus, C. C. A pre-loading method of evaluating gap junctional communication by fluorescent dye transfer. Biotechniques. 18 (3), 490-497 (1995).
  27. Ziambaras, K., Lecanda, F., Steinberg, T. H., Civitelli, R. Cyclic stretch enhances gap junctional communication between osteoblastic cells. J.Bone Miner.Res. 13 (2), 218-228 (1998).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

in vitro

Похожие статьи