Характеристика человека моноцитов дендритные клетки путем обработки изображений проточной цитометрии: Сравнение между двумя моноцитов Isolation протоколов

Gloria Figueroa; Tiyash Parira; Alejandra Laverde; Gianna Casteleiro; Amal El-Mabhouh; Madhavan Nair; Marisela Agudelo

doi:10.3791/54296

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Характеристика человека моноцитов дендритные клетки путем обработки изображений проточной цитометрии: Сравнение между двумя моноцитов Isolation протоколов

13.7K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/54296

⸱

18 октября 2016 г.

Gloria Figueroa¹ , Tiyash Parira¹ , Alejandra Laverde¹ , Gianna Casteleiro¹ , Amal El-Mabhouh² , Madhavan Nair¹ , Marisela Agudelo¹

¹Department of Immunology, Herbert Wertheim College of Medicine, Florida International University, ²Millipore Sigma

В этой статье

Краткое содержание

В этом исследовании сравниваются два различных метода выделения моноцитов человека для получения in vitro дендритных клеток (ДК). Моноциты отбираются путем адгезии или отрицательно обогащаются магнитной сепарацией. Выход и жизнеспособность моноцитов, а также жизнеспособность MDDC, пролиферацию и экспрессию поверхностных маркеров CD11c/CD14 будут сравниваться между обоими методами.

Аннотация

Дендритные клетки (ДК) — это антигенпрезентирующие клетки иммунной системы, которые играют решающую роль в реакциях лимфоцитов, защитных механизмах хозяина и патогенезе воспаления. Выделение и изучение ДК имеют важное значение в биологических исследованиях из-за их отличительных особенностей. Несмотря на то, что ДК являются важными ключевыми медиаторами иммунной системы, они очень редко встречаются в крови, составляя примерно 0,1 - 1% от общего количества мононуклеарных клеток крови. Таким образом, альтернативы методам выделения основаны на дифференцировке ДК из моноцитов, выделенных из мононуклеарных клеток периферической крови (ПМЦ). Использование надлежащих методов изоляции, сочетающих в себе простоту, доступность, высокую чистоту и высокую производительность клеток, является обязательным для рассмотрения. В настоящем исследовании будут сравнены два различных метода генерации ДК. Моноциты отбирали путем адгезии или отрицательно обогащали с помощью процедуры магнитной сепарации с последующей дифференцировкой в ДК с IL-4 и GM-CSF. Жизнеспособность, пролиферацию и фенотип моноцитов и MDDC оценивали с помощью красителей на жизнеспособность, анализа МТТ и анализа поверхностных маркеров CD11c/CD14 с помощью визуализационной проточной цитометрии. Несмотря на то, что метод магнитной сепарации позволил получить значительно более высокий процент моноцитов с более высокой пролиферативной способностью по сравнению с методом адгезии, результаты продемонстрировали способность обоих методов одновременно генерировать моноциты, способные пролиферировать и дифференцироваться в жизнеспособные CD11c+ MDDC после семи дней в культуре. Оба метода дали > 70% CD11c+ MDDC. Таким образом, наши результаты дают понимание, которое способствует разработке надежных методов выделения и определения характеристик ДК человека.

Введение

Дендритные клетки (ДК) являются важными медиаторами врожденной и адаптивной системы иммунитета. Они действуют, чтобы вызвать первичные иммунные реакции и способствуют развитию иммунологической памяти. Эти клетки в первую очередь ответственны за захват антигена, миграции и стимуляции Т - клеток и, следовательно , называют профессиональных антиген - представляющих клеток (АРС) ¹ .Manipulation ДК могут быть использованы в самых различных областях исследований и в клинических условиях для лечения различных воспалительных заболеваний , таких как ВИЧ , ^6,7, рак ^8, аутоиммунные заболевания ^9, а также аллергические реакции ^10.....