Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Конкурентные трансплантатов для оценки гемопоэтических стволовых клеток Фитнес

15.3K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/54345

⸱

31 августа 2016 г.

 , 
1INRS-Institut Armand-Frappier, Université du Québec, Institut National de la Recherche Scientifique

В этой статье

Краткое содержание

Этот протокол предоставляет пошаговые рекомендации по организации конкурентных экспериментов по трансплантации костного мозга мышей для изучения функции гемопоэтических стволовых/прогениторных клеток без предварительной очистки стволовых клеток путем сортировки клеток.

Аннотация

Золотой стандарт определения гемопоэтической стволовой клетки (ГСК) - это клетка, которая при переносе в облученного реципиента будет иметь способность восстанавливать производство клеток крови в течение всей жизни реципиента. В этом протоколе объясняется, как настроить функциональный анализ для сравнения емкостей ГСК двух разных популяций клеток, таких как костный мозг мышей с двумя разными генотипами, и как анализировать мышей-реципиентов с помощью проточной цитометрии. Протокол использует эквиваленты ГСК, а не сортировку клеток для стандартизации, и обсуждает преимущества и недостатки обоих подходов. Далее мы обсуждаем различные варианты базового протокола, включая серийные трансплантации, анализы на ограничение разведения, анализы на хоуминг и неконкурентные трансплантации, включая преимущества и предпочтительные варианты использования этих различных подходов. Эти анализы имеют центральное значение для изучения функции ГСК и могут быть использованы не только для исследования фундаментальных внутренних аспектов биологии ГСК, но и для разработки доклинических анализов для трансплантации костного мозга и расширения ГСК в культуре.

Введение

Кровотворение представляет собой регенеративный процесс, который обеспечивает пополнение клеток крови, которые были утрачены из-за травмы, радиации и гибели клеток. Этот процесс обеспечивается гемопоэтических стволовых клеток (ГСК), которые в значительной степени проживают в костном мозге взрослого. Кроме того, гемопоэтические стволовые клетки могут быть использованы в терапевтических целях при аутоиммунных расстройств, гематологических злокачественных заболеваний и иммунодефицитных состояний 1. Существует, таким образом, необходимо, чтобы лучше понять механизмы, которые регулируют функцию HSC, включая их расширение пролиферативной и их способности достигать и прижился костный мозг получателя после пересадки. Хотя недавние исследования сообщали о нескольких маркеров клеточной поверхности, в том числе членов семьи SLAM CD150 и CD48, чтобы перспективно обогащают взрослых ГСК и плода ГСК до приблизительно 50% чистоты 2-4, золотой стандарт мера для функционального ГСК остается в естественных условиях заселив анализа на определить их способность восстановить крови грпроизводство ELL в облученном хозяина 5.

Клональная анализ заселив в естественных условиях изначально был разработан Till и McCulloch 6 и с тех пор была усовершенствована и расширена. Как первоначально определено, ГСК обеспечить пожизненную производство клеток крови через самообновлению и дифференцировке. Передача ГСК в облученного реципиента, таким образом, позволяет оценить: их способность дифференцировать на основе анализа различных линий клеток крови (Т-лимфоциты, В-лимфоциты, гранулоциты, моноциты) и их способности к самообновлению путем последовательной трансплантации. Анализ, как правило , предполагают сравнение функциональных и / или количества двух популяций ГСК, например, клетки , поступающие из двух мышей разных генотипов или клеток , которые были обработаны или необработанными с различными факторами , которые могут повлиять на сохранение или расширение ГСК в культуре. Донор химеризмом, или вклад переданы доноров ГСК тO производства клеток крови, то может быть определено с помощью проточной цитометрии в периферической крови и костного мозга с использованием маркеров клеточной поверхности или другие методы, которые отличит донорские клетки от реципиента, или хозяина. Наиболее широко используются маркеры, безусловно , два аллеля гена Ptprc или CD45 лейкоцитарного антигена 7 , которую мы выбрали для примеров , приведенных ниже.

Клональная анализ репопуляция может быть конкурентным или неконкурентным. В неконкурентной обстановке, управления и испытаний HSC, передаются на отдельные мышей-реципиентов, и результаты для каждого типа клеток будет независим от другого. В условиях конкурентной борьбы, функции и тестирования и управления ГСК измеряется против населения конкурента ГСК. Протокол, описанный здесь, использует конкурентной борьбы, но также могут быть адаптированы для неконкурентных ситуаций. Оба подхода имеют свои преимущества и недостатки, и мы сравним их подробно вобсуждение. Мы также описывают различные подходы к обеспечению справедливости в отношении количества пересаженных ГСК, объяснить, каким образом адаптировать анализ для количественного определения ГСК путем ограничения разбавления анализа (LDA), и привести примеры как успешных, так и неудачных трансплантаций для интерпретации результатов.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все процедуры, описанные в этом протоколе были одобрены институциональным комитетом по этике животных и следовать Канадский совет по руководящим принципам ухода за животными.

Примечание: Для поддержания стерильных / конкретного патогена жилищных условий, проводить все процедуры, связанные с прямой обработки живых мышей в кабинете биологической безопасности или ламинарный. Очистите или стерилизовать клетки, удерживающие устройства, жилищные материалы, чау и воды при условии, животным соответствующим образом. Используйте только стерильные одноразовые иглы для инъекций и забора крови. Техника Aseptic имеет решающее значение в процессе подготовки трансплантата.

1. Подготовка мышей-реципиентов

  1. Определить мышей - реципиентов с ушными выемками (или другим способом , утвержденным местным этическим комитетом животных 8) для того, чтобы отдельные РАЗВЕЙТЕ периферической крови и костного мозга восстановления в течение долгого времени. Взвесьте мышей для постпересадки наблюдения. НасМыши-реципиенты е, которые от 7 до 12 недель (менее 25 г).
    Примечание: В указанном примере мышей CD45.1 + CD45.2 + реципиенты были разведены в доме путем скрещивания мышей C57BL / 6 с конгенных мышей B6.SJL.
  2. Облучают мышей-реципиентов двумя дозами 450 рад, чтобы уничтожить гемопоэтической активности. Дайте первая доза за день до трансплантации и второй 1-2 ч перед трансплантацией.
    Примечание: рентгеновские или гамма-лучи могут быть использованы и в зависимости от наличия соответствующих объектов.

2. Подготовка доноров и Конкурент клеток костного мозга

  1. Эвтаназии доноров (испытание и контроль; CD45.2 +) и конкурент (CD45.1 +; B6.SJL) мышей СО 2 удушья с последующим смещением шейных позвонков или с использованием методов , одобренных местным комитетом по этике животных.
  2. Место мышей на их спине, ноги широко открыты, в пустой чашке Петри или на стерильную марлю (чтобы держать рабочую поверхность чистой) ЯNside кабинете биологической безопасности. Влажная кожа и мех с 70% этанола / 30% H 2 O (v / v).
  3. Отрезать ногу с хирургическим скальпелем или острыми ножницами. Разрежьте кожу вдоль ноги и отодвигать кожу с помощью пинцета с зубчатыми. Срежьте лишнюю мышечную массу.
  4. Вывихнуть бедренной кости, потянув на кости ноги и с помощью ножниц лезвий против тазовых костей в качестве противодействующей силы. Отделить берцовой и бедренной костями от коленной чашечки и удалите оставшиеся кусочки мышц и сухожилий. Поместите кости в 2-3 мл стерильного забуференного фосфатом физиологического раствора (PBS) в 6-луночный планшет для тканевых культур с.
  5. Сбор клеток костного мозга путем промывки кости с 5 мл стерильной PBS.
    1. Удерживая кость осторожно пинцетом и вставить 25 G иглу, присоединенную к заполненной 1 мл шприца в один конец кости. Нажмите на поршень и сбора клеток в 15 мл коническую пробирку. Повторите по мере необходимости, пока центр кости не является белым.
  6. Диссоциировать клетки путем многократного прохождения через иглу вполучения суспензии отдельных клеток. Избегайте пузырьков и избыток силы. Примечание: Используйте немного большую иглу (22 G), чтобы улучшить жизнеспособность клеток на этом этапе.
  7. Проходят клетки через 70 мкм нейлоновый сетчатый фильтр для обеспечения однородной суспензии клеток и для удаления мусора и комков.
  8. Удалить аликвоту для подсчета клеток с использованием гемоцитометра. Центрифуга оставшуюся суспензию клеток при 200 мкг в течение 5 мин при температуре 4 ° С. Отрегулировать плотность клеток в соответствии с требованиями в стерильном PBS (10 8 клеток / мл). Держите клетки на льду.

3. Создание донорских клеток HSC Эквиваленты

  1. Перенести эквивалент 3 - х 10 6 клеток (30 мкл) в 5 мл с круглым дном полистирола трубки для проточной цитометрии окрашивания. Добавить равный объем немеченых антител против CD16 / CD32, чтобы блокировать неспецифическую окрашивание (разбавленного окрашивающего буфера (PBS с добавлением 0,1% бычьего сывороточного альбумина (BSA) и 1 мМ ЭДТА) для конечной концентрации 2,5 мкг / мл). Выдержите 5 минут при комнатной температуре,
  2. Добавить 90 мкл Флуорохром-конъюгированные антитела основной смеси, полученной в буфере окрашивания: биотинилированный Lineage коктейль (B220, CD3e, CD11b, GR1, Ter119), СЦА1, CD117, CD135, CD150. Инкубировать на льду в течение 30 мин, защищенном от света месте.
    Примечание: соответствующие разбавлени должны быть определены для каждой партии антител. Таблицу материалов для разведений, используемых в данном исследовании.
  3. Добавляют 2 мл окрашивающего буфера к клеткам, вихря и центрифугировать при 200g в течение 5 мин при 4 ° С для удаления несвязанного антитела. Слейте супернатант и ресуспендируют осадок Смахивающее.
  4. Добавьте 10 мкл Флуорохром-конъюгированного стрептавидина , разбавленного окрашивающего буфера (см Материалы таблицу). Инкубируют на льду в течение 20 мин, защищенном от света месте. Вымойте как в шаге 3.3 для удаления несвязанного стрептавидин.
  5. Acquire клеточных образцов с использованием проточного цитометра, по крайней мере , шесть детекторов 9. Определить частоту Lin - СЦА1 + CD117 + CD135 - CD150 + клеток ( по оценкам ГСК) в каждом образце с использованием шаблона анализа показано на рисунке 2 , и , как сообщалось ранее 10,11.
    Примечание: Частота функциональных ГСК в пределах этой популяции может быть оценена между 1/3 и 1/5 2,12.
  6. Установить оценочные эквиваленты HSC для всех образцов 11, используя один образец ( как правило, конкурент, B6.SJL CD45.1 + в данном примере) в качестве базового уровня , как описано ниже и на рисунке 2.
    1. Подсчитайте количество клеток, необходимых с использованием следующих формул:
      #transplanted ГСК / реципиент = 5 × 10 5 клеток х расчетная частота ГСК (как определено для базового образца; это число обычно составляет от 75 до 125 для дикого типа C57BL / 6) , 10-12.
      Примечание: На рисунке 2, для образца А, результат 139 ГСК.
      Всего # трансплантированных клеток (для других образцов, например : Образец B на рисунке 2) = # транспосажено частота ГСК / HSC.
      Примечание: На рисунке 2, для образца В, то результат будет 197826 (или приблизительно 2 х 10 5) Общее количество клеток костного мозга.
  7. Подсчитайте общее количество клеток, необходимых для каждого получателя трансплантата для каждого образца, используя результаты, полученные выше.
    Примечание: Это число должно быть не менее 5 × 10 5 для базового образца (конкурента).
    1. Умножить число, полученного на стадии 3.7 по количеству мышей-реципиентов и добавить достаточное количество клеток, по крайней мере, два дополнительных мышей для компенсации мертвого объема в шприце.
  8. Смешайте конкурента (например, CD45.1 +) и тест - клетки (CD45.2 +) в соотношении 1: 1 эквивалентном соотношении HSC, рассчитанный на шаге 3.6 и настроить конечный объем для 200 мкл на инъекцию с использованием стерильной PBS.
    Примечание: Для группы из пяти мышей - реципиентов предлагаемый объем будет , таким образом, по меньшей мере , 1,4 мл, содержащего 3,5 х 10 6 конкурентов клеток костного мозга (или973 оценкам ГСК для образца А на рисунке 2), и эквивалентное число тестируемых клеток (на рисунке 2, эквивалент для образца B будет 197826 х 7 = 1,384,782 клетки костного мозга).

4. Трансплантация костного мозга

  1. Разогреть мышей-реципиентов, облученный в шаге 1.2 с красной лампой тепло, чтобы обеспечить расширение кровеносных сосудов и сделать боковой хвостовой вены более заметными.
  2. Подготовка к туберкулину шприц 1 мл, снабженный иглой 27 G (или меньше). Отберите приблизительно 750 мкл приготовленной суспензии клеток (для мышей 3-реципиентов). Убедитесь, что нет воздушных пузырьков в шприце.
  3. Вставьте мышь в удерживающей устройство. Осмотрите хвост и искать боковые вены хвоста, которые должны быть хорошо видны с обеих сторон хвоста. Протрите место инъекции этанола. Вставьте иглу скосом вверх, параллельно коже и осторожно нажмите на поршень. Инъекции должно быть легко. Если сила повторнопотребовавшие, игла не в вене.
    Примечание: Более старые мыши имеют более толстую кожу, что может сделать найти вену более трудным. Если игла не в вене, повторно вставить иглу проксимальнее исходного места инъекции.
  4. Удалите иглу и нажать на место инъекции стерильной марлей в течение нескольких секунд, чтобы остановить кровотечение. Перенесите мышь в чистую клетку.
    Примечание: Используйте один и тот же шприц и иглу для трех инъекций, после чего игла может стать слишком унылым.
  5. Для постпересадки наблюдения, вводят 1 мл стерильной PBS подкожно регидрировать мышей в течение первых пяти дней. Добавить антибиотики в питьевой воде, для профилактики инфекций (если это требуется; по желанию). Взвесьте мышей через каждые два-три дня в течение первых трех недель и усыпить мышей, которые потеряли более 15-20% их предтрансплантационной массы тела (или, как это определено местным комитетом по этике животных).

5. Анализ периферической крови

  1. Собрать каплю крови (pprox. 50-100 мкл) в EDTA пробирки.
    1. Для сбора крови из вены нижней челюсти, используйте ланцет или 22 G иглой прокалывают кожу лица возле голую пятна , расположенного под челюстью и место сбора трубки получить каплю крови 13. Собрать кровь на 4, 8, 12 и 16 недель после пересадки следовать несколько клонов восстановления.
  2. Добавить 1 мл свежеприготовленной RT красных кровяных клеток лизис буфера (9 частей 0,16 М NH 4 Cl + 1 часть 0,17 М Трис-HCl рН 7,65) до капли крови , собранной на этапе 5.1.1. Смешайте и передачи образца до 5 мл с круглым дном полистирола трубки, пригодного для проточной цитометрии. Дайте постоять в течение 4 мин при комнатной температуре.
  3. Добавьте 4 объемов охлажденного льдом PBS. Смешайте поворотом конца в конец и передавать сразу на льду. Центрифуга 10 мин при 200g при температуре 4 ° С.
  4. Слейте супернатант и ресуспендируют осадок Смахивающее. Супернатант должны быть четкими и красный. Добавляют 2 мл окрашивающего буфера и вихрь кратко. Центрифуга 5 мин при 200 XGAт 4 ° C.
  5. Слейте супернатант и ресуспендируют осадок Смахивающее.
  6. Продолжайте проточной цитометрии окрашивания с использованием общего протокола, подробно описанную в шагах 3.1 до 3.3 и следующих антител для мастер-микс: CD45.1, CD45.2, CD3e, CD19, Ш1.
  7. Acquire клеточных образцов с использованием проточного цитометра, по крайней мере , шесть детекторов 9. Определить частоту донорских клеток , полученных для каждой линии (CD19 + В - лимфоцитов, CD3e + Т - лимфоциты, GR1 яркие гранулоцитов) в каждом образце с использованием шаблона анализа , представленного на рисунке 3 , и как опубликованные 10,11.

6. Анализ костного мозга восстанавливающей

  1. Сбор клеток костного мозга, как описано в разделе 2. Пятно клетки для анализа потока цитометрии с использованием общего протокола, подробно описанную в шагах 3.1 до 3.3 и следующие антитела для мастер-микс: Lineage коктейль, СЦА1, CD117, CD135, CD150, CD45.1 , CD45.2. Обнаружение линEAGE коктейль антител с использованием Флуорохром-конъюгированного стрептавидина, как описано в шаге 3.4.
  2. Acquire образцы клетки с использованием проточного цитометра, по меньшей мере восемь детекторов 9. Если только шесть доступны, добавьте CD135 к тому же каналу, клонального панели , как CD135 + клетки будут исключены. Определить частоту донорского происхождения Lin - СЦА1 + CD117 + CD135 - CD150 + ГСК в каждом образце с использованием шаблона анализа , представленного на рисунке 4 и опубликованной 10.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Общее описание конкурентной борьбы трансплантата, в том числе вторичных трансплантатов (обсуждается ниже) можно найти на рисунке 1. Представитель анализа для предварительной трансплантации костного мозга ГСК можно найти на рисунке 2. Более подробную информацию об исключении дублетов и мертвые клетки могут быть найдены в других местах 9.

На рисунках 3 и 4

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Протокол, описанный здесь, предназначен для оценки относительной пригодности доноров (тест) ГСК от известных конкурента ГСК. Ситуация конкуренции увеличивает относительную чувствительность анализа (что более вероятно обнаружить умеренное снижение в стволовых клеток пригодности) и обеспечивает внутренний технический контроль за эффективностью облучения и инъекции. Тем не менее, это не следует использовать в качестве абсолютной мерой HSC пригодности; снижение конкурентного восстановления автоматически не означает, что ГСК...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

Мы благодарны Roxann хету-Арбор за помощь в разработке фигуры и демонстрации процедур. Исследования, проведенные в лаборатории была поддержана Transition награду от Cole Foundation, Discovery грант №. 419226-2012 от естественных наук и инженерного исследовательского совета Канады (NSERC) и Канада Фонд инноваций (CFI Лидеры фонда грант №. 31377). KMH является Chercheur-Boursier Младший для Fonds де Recherche дю Квебек - Santé (FRQS).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Микротайнерные пробирки с K2EDTABD Biosciences365974
иглой 20 GBD ШприцДля забора крови из нижнечелюстной вены
LabQuake ShakerГриль Thermo  НаучнаяC415110
Очищенный антимышиный CD16/CD32 (клон 2.4G2, Fc блок)BD Biosciences5531422.50 μ г/мл
Pe-Cy7-конъюгированный антимышиный CD3e (клон 145-2C11)eBioscience25-00310,25 μ г/мл
ПЭ-конъюгированный антимышиный CD19 (клон 1D3)eBioscience12-01930,25 μ г/мл
APC-eFluor780 (эквивалент APC-Cy7)-конъюгированный антимышиный GR1 (клон RB6-8C5)eBioscience47-59310.25 μ г/мл
FITC-конъюгат антимышиный CD45.1 (клон A20)eBioscience11-04532.50 μ г/мл
eFluor450-конъюгированный антимышиный CD45.2 (клон 104)eBioscience48-04541.00 μ г/мл
Биотинилированный античеловек/мышиный CD45R (B220) (клон RA3-6B2)eBioscience13-04521.25 μ г/мл
Биотинилированный антимышиный CD3e (клон 145-2C11)eBioscience13-00311.25 μ г/мл
Биотинилированный антимышиный CD11b (клон M1/70)eBioscience13-01121.25 μ г/мл
Биотинилированный антимышиный GR1 (клон RB6-8C5)eBioscience13-59311.25 μ г/мл
Биотинилированный антимышиный TER119 (клон TER119)eBioscience13-59210.625 μ г/мл
V500 стрептавидинBD Biosciences561490,5 μ г/мл
ПЭ-конъюгированный антимышиный CD117 (клон 2B8)BD Biosciences5533550,25 г/м; г/мл
PE-Cy7-конъюгированный антимышиный Ly6A/E (Sca1) (клон D7)BD Biosciences5581620,25 г/мл
PerCP-eFluor710-конъюгированный антимышиный CD135 (клон A2F10)eBioscience46-13510.5 μ г/мл
Alexa fluor 647-конъюгированный антимышиный CD150 (клон TC15-12F12.2)Biolegend1159180,625 μ г/мл BD Biosciences и eBioscience не имеют одного и того же клона
туберкулинового шприца 1 мл с иглой 27 G BDШприц309623
1 мл туберкулинового шприца с иглой 25 GBD Шприц309626
70 мкм; m сетчатый фильтрBD Falcon352350

Ссылки

  1. Li, H. W., Sykes, M. Emerging concepts in haematopoietic cell transplantation. Nat Rev Immunol. 12 (6), 403-416 (2012).
  2. Kiel, M. J., Yilmaz, O. H., Iwashita, T., Terhorst, C., Morrison, S. J. SLAM family receptors distinguish hematopoietic stem and progenitor cells and reveal endothelial niches for stem cells. Cell. 121 (7), 1109-1121 (2005).
  3. Kim, I., He, S., Yilmaz, O. H., Kiel, M. J., Morrison, S. J. Enhanced purification of fetal liver hematopoietic stem cells using SLAM family receptors. Blood. 108 (2), 737-744 (2006).
  4. Mayle, A., Luo, M., Jeong, M., Goodell, M. A. Flow cytometry analysis of murine hematopoietic stem cells. Cytometry A. 83 (1), 27-37 (2013).
  5. Rossi, L., et al. Less Is More: Unveiling the Functional Core of Hematopoietic Stem Cells through Knockout Mice. Cell Stem Cell. 11 (3), 302-317 (2012).
  6. Till, J. E., McCulloch, E. A direct measurement of the radiation sensitivity of normal mouse bone marrow cells. Radiat Res. 14, 213-222 (1961).
  7. Shen, F. W., et al. Cloning of Ly-5 cDNA. Proc Natl Acad Sci U S A. 82 (21), 7360-7363 (1985).
  8. Identification of GM mice. Laboratory Animals. 37 (suppl 1), 33-35 (2003).
  9. Rundberg Nilsson, A., Bryder, D., Pronk, C. J. H. Frequency determination of rare populations by flow cytometry: A hematopoietic stem cell perspective. Cytometry Part A. 83A (8), 721-727 (2013).
  10. Abidin, B. M., Owusu Kwarteng, E., Heinonen, K. M. Frizzled-6 Regulates Hematopoietic Stem/Progenitor Cell Survival and Self-Renewal. J Immunol. 195 (5), 2168-2176 (2015).
  11. Heinonen, K. M., Vanegas, J. R., Lew, D., Krosl, J., Perreault, C. Wnt4 enhances murine hematopoietic progenitor cell expansion through a planar cell polarity-like pathway. PLoS One. 6 (4), e19279(2011).
  12. Oguro, H., Ding, L., Morrison, S. J. SLAM family markers resolve functionally distinct subpopulations of hematopoietic stem cells and multipotent progenitors. Cell Stem Cell. 13 (1), 102-116 (2013).
  13. Golde, W. T., Gollobin, P., Rodriguez, L. L. A rapid, simple, and humane method for submandibular bleeding of mice using a lancet. Lab Anim (NY). 34 (9), 39-43 (2005).
  14. Santaguida, M., et al. JunB protects against myeloid malignancies by limiting hematopoietic stem cell proliferation and differentiation without affecting self-renewal. Cancer Cell. 15 (4), 341-352 (2009).
  15. Czechowicz, A., Kraft, D., Weissman, I. L., Bhattacharya, D. Efficient transplantation via antibody-based clearance of hematopoietic stem cell niches. Science. 318 (5854), 1296-1299 (2007).
  16. Zhang, C. C., Lodish, H. F. Murine hematopoietic stem cells change their surface phenotype during ex vivo expansion. Blood. 105 (11), 4314-4320 (2005).
  17. Benveniste, P., et al. Intermediate-Term Hematopoietic Stem Cells with Extended but Time-Limited Reconstitution Potential. Cell Stem Cell. 6 (1), 48-58 (2010).
  18. Fazekasde St Groth, B. The evaluation of limiting dilution assays. J Immunol Methods. 49 (2), R11-R23 (1982).
  19. Louis, I., Heinonen, K. M., Chagraoui, J., Vainio, S., Sauvageau, G., Perreault, C. The signaling protein Wnt4 enhances thymopoiesis and expands multipotent hematopoietic progenitors through beta-catenin-independent signaling. Immunity. 29 (1), 57-67 (2008).
  20. Cui, Y. Z., et al. Optimal protocol for total body irradiation for allogeneic bone marrow transplantation in mice. Bone Marrow Transplant. 30 (12), 843-849 (2002).
  21. Benz, C., et al. Hematopoietic Stem Cell Subtypes Expand Differentially during Development and Display Distinct Lymphopoietic Programs. Cell Stem Cell. 10 (3), 273-283 (2012).
  22. Eppert, K., et al. Stem cell gene expression programs influence clinical outcome in human leukemia. Nat Med. 17 (9), 1086-1093 (2011).
  23. McIntosh, B. E., et al. Nonirradiated NOD,B6.SCID Il2rgamma-/- Kit(W41/W41) (NBSGW) mice support multilineage engraftment of human hematopoietic cells. Stem Cell Reports. 4 (2), 171-180 (2015).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Конкурентная трансплантацияподготовка костного мозгаанализ методом проточной цитометрииэквиваленты стволовых клетоканализ предельного разведениясерийные трансплантациитесты на хомингнеконкурентная трансплантацияхимеры костного мозга
Конкурентные трансплантатов для оценки гемопоэтических стволовых клеток Фитнес
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.