Method Article

Сравнение трех различных методов для определения пролиферации клеток рака молочной железы в клеточных линиях

DOI:

10.3791/54350

⸱

September 3rd, 2016

 ,  , 
1Medical Genetics, Hunter Medical Research Institute, 2Priority Research Centre for Cancer, School of Biomedical Sciences and Pharmacy, Faculty of Health and Medicine, University of Newcastle, 3Pathology North, John Hunter Hospital

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот протокол описывает использование трех различных методов анализа пролиферации клеток в клеточных линиях рака молочной железы. Это включает в себя использование обычного подсчета клеток, жизнеспособность клеток на основе люминесценции и подсчет клеток с помощью клеточного имиджера. Каждый из них обладает преимуществами для воспроизводимого измерения пролиферации клеток.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Измерение пролиферации клеток может быть выполнено с помощью ряда различных методов, каждый из которых имеет различные уровни чувствительности, воспроизводимости и совместимости с высокопроизводительным форматированием. Этот протокол описывает использование трех различных методов измерения пролиферации клеток in vitro, включая обычную счетную камеру гемоцитометра, анализ на основе люминесценции, который использует изменение метаболической активности жизнеспособных клеток в качестве меры относительного числа клеток, и многорежимный клеточный имидж-сканер, который измеряет количество клеток с помощью алгоритма подсчета. Каждый метод имеет свои преимущества и недостатки для измерения пролиферации клеток, включая время, стоимость и высокую производительность. Этот протокол демонстрирует, что каждый метод может точно измерять пролиферацию клеток с течением времени и чувствителен к обнаружению роста при различной плотности клеток. Кроме того, измерение пролиферации клеток с помощью клеточного имидж-сканера позволило получить дополнительную информацию, такую как морфология, слияние клеток, и позволило осуществлять непрерывный мониторинг пролиферации клеток с течением времени. В заключение следует отметить, что каждый метод способен измерять пролиферацию клеток, но выбранный метод зависит от пользователя.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ген - супрессор опухолей р53, является существенным регулятором ряда клеточных процессов, в том числе остановки клеточного цикла, апоптоза и старении 1. Он отвечает за поддержание стабильности генома, и, следовательно, имеет решающее значение для поддержания баланса гибели клеток и роста клеток. Мутации в p53 являются общими в рак и являются основной причиной инактивации р53 приводит к пролиферации клеток рака неконтролируемое 2. Интересно отметить , что мутации в р53 составляют лишь около 25% случаев рака молочной железы 3, предполагая , что другие механизмы ответственны за потерю функции р53. Недавно открытые изоформы р53 , как было показано быть избыточно экспрессируется в ряде злокачественных опухолей человека, и могут модулировать функцию p53 4,5. Ранее мы показали, что р53 изоформы, Δ40p53, является самым высоким уровнем экспрессии изоформ при раке молочной железы, а также значительно усиливает свою активность в клетках рака молочной железы, по сравнению с нормальными смежного TISS6 уе. Вслед за этим, мы стабильно трансдуцированная человеческой линии клеток рака молочной железы MCF-7 гиперэкспрессией Δ40p53 с использованием Лего-IG2-Puro + вектор (GFP +) 7. Эти клетки были использованы для исследования, если высокий уровень экспрессии Δ40p53 увеличивает скорость пролиферации клеток в клетках рака молочной железы.

Есть много прямых и косвенных методов измерения клеточной пролиферации культивируемых клеток в пробирке 8,9. Они могут быть выполнены либо в виде непрерывных измерений с течением времени, или в качестве конечной точки анализов 10. Обычные методы по-прежнему полезны, например, подсчета клеток с помощью гемоцитометра. Этот анализ является низкая стоимость и прямой мерой числа клеток, но он полагается на больших кровяных клеток и высококвалифицированной подготовки для минимизации ошибок и больших стандартных отклонений от подсчетов. Необходимость проведения измерений, совместимых с форматами высокой пропускной способности привело к разработке анализов многоямный тарелками. Эти люминесценции на основе анализов колбыRe числа клеток на основе сигнала , люминесцентный , который пропорционален метаболической активности клетки 11,12. Совсем недавно, введение платформ формирования изображений с высоким содержанием позволило новых инструментов , которые контролируют пролиферацию клеток, обеспечивая количественный и качественный сбор фенотипических данных, и включает в себя множество систем 13. Все эти методы обеспечивают пути для измерения роста клеток, либо путем непрерывного измерения или конечных точек анализов, и каждый обладает целым рядом преимуществ и недостатков в отношении чувствительности, пропускная способность номера образцов, а также информацию ячейки, все из которых могут быть весила соответствующим образом в зависимости на вопрос исследования.

Этот протокол описывает три различных метода измерения пролиферации клеток в пробирке, с каждым способом , использующим различные диапазоны чувствительности, воспроизводимости и многолуночных форматов пластин. Этот протокол направлен сравнить использование подсчета гемоцитометр CHAmber, жизнеспособность клеток анализ на основе люминесценции, а ячейка тепловизор, при измерении пролиферации клеток с течением времени курс 96 часов. Для этого, рост вектор-трансдуцированных клеток (MCF-7-Лего) сравнивали с клетками трансдуцированных что экспрессия Δ40p53 (MCF-7-Δ40p53), с использованием трех различных плотностей клеток. пролиферации клеток измеряли каждые 24 ч в течение до 96 часов. был найден Каждый метод имеет свои преимущества и недостатки, и в зависимости от цели эксперимента, каждый по-прежнему является ценным методом для предоставления информации о скорости пролиферации.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Подготовка Клетки для анализа пролиферации

Примечание: Подготовьте две клеточные линии таким же образом, и семя в том же формате, для каждого метода для анализа.

  1. Grow MCF-7-Лего и MCF-7-Δ40p53 7 клеток до 75-80% слияния в Т 75 см 2 флаконах для культуры ткани с использованием фенола-красный свободный Дульбекко в модификации Дульбекко (DMEM) , дополненной 10% фетальной телячьей сыворотки (FBS) , , 200 мМ L-глутамина, 2 мкг / мл инсулина и 1 мкг / мл пуромицина при температуре 37 ° с с 5% CO 2. Обрабатывать клетки в стерильный биозащитой класса II.
    Примечание: количество времени, которое требуется, чтобы вырастить клетки до слияния варьирует в зависимости от посевного разведения. В процессе подготовки к металлизации клеток для анализа пролиферации, семенные клетки в отношении 1: 3 разведением в среде DMEM, дополненной и поддерживать в нормальных условиях роста, в течение 3-х дней, пока 75-80% сплошности.
  2. Для удаления клеток из колбы, слейте носитель вотходов контейнер. Немедленно промыть слой клеток с 2 мл подогретого 2x трипсина. Отберите трипсина. Добавить еще 2 мл подогретого трипсин к слою клеток и место в термостате в течение 5 мин при температуре 37 ° С с 5% CO 2.
    1. После того, как клетки отделить, промыть клетки с 10 мл утепленные свежей DMEM, дополненной. Передачи клеточной суспензии в стерильный 15 мл пробирку и центрифугируют при 491 х г в течение 5 мин при комнатной температуре. Тщательно аспирата и распоряжаться супернатанта.
  3. Ресуспендируют осадок клеток в 5 мл свежей среды DMEM, дополненной. Выполнить подсчет клеток, чтобы определить правильную плотность потомству клеток в 96-луночные планшеты.
    1. Разбавляют 100 мкл суспензии клеток в 900 мкл 1x Дульбекко фосфатно-солевом буферном (DPBS). Установите новый датчик 60 мкм на автоматизированный счетчик клеток. Удерживая поршень и погрузить датчик в разбавленной клеточной суспензии. Медленно отпустите поршень на прилавке клетки. Извлеките датчик из ячейки CouNTER после их завершения.
      Примечание: Количество клеток будет отображаться на счетчике клеток в клетках / мл.
  4. Семенной клетки в конечном объеме 100 мкл (в DMEM) , в 96-луночный планшет при ~ 20% сплошности , чтобы места для роста клеток и измерения пролиферации в течение 3-5 дней (таблица 1). Семенной все клеточные линии, в трех экземплярах.
    Примечание: Для этого эксперимента три разные плотности клеток оценивали для определения оптимальной плотности клеток. Требуемые номера ячеек приведены в таблице 1. Семенной клеток при более низкой плотности , если измерение более долгосрочной роста требуется.
    1. Для гемоцитометра и анализов люминесценции на основе, подготовить одну пластину за каждую единицу времени (т.е. 4 пластин в анализе). Для анализа клеточных тепловизора, готовят только одну пластину, на время эксперимента.
  5. Поддерживать клетки при 37 ° С с 5% СО 2 в течение 24 часов.

2. Определение Cell Count UsING гемоцитометра

  1. Предварительно теплой и средней и трипсин до 37 ° С в инкубаторе для клеточных культур, духовой шкаф или водяную баню. Аспирируйте средств массовой информации из клеток в контейнер для отходов, мыть один раз с 30 мкл 2x трипсина и аспирация трипсина.
  2. Промыть клетки снова с 30 мкл 2x трипсина, и инкубируют в течение 5 мин при 37 ° С. Осторожно постучите краем пластины, чтобы вытеснять клетки от пластины. Добавьте 50 мкл среды DMEM, дополненной и смешать клетки пипеткой до тех пор, пока клетки не образуют суспензии отдельных клеток.
  3. Подготовка гемоцитометра путем очистки поверхности и стеклянной крышкой с 70% этанола.
  4. Поместите стеклянную крышку скольжения над счетных камер и наклейте до тех пор, пока можно увидеть "Ньютона рефракции кольца" между краями крышки проскальзывания и гемоцитометра.
    Примечание: Они указывают, что крышка скользит правильно приклеена к гемоцитометра.
  5. Аккуратно пипеткой 20 мкл клеточной суспензии под покровным стеклом, заполняя счетнокамерное с помощью капиллярного движения.Поместите гемоцитометра под 10-кратным увеличением микроскопа и визуализировать счетные камеры в макете сетки.
  6. Количество клеток в 4-х внешних квадратов макета сетки. Для повышения точности повторить подсчет дополнительных внешних квадратов , если требуется, или до подсчета не достигнет 70 - 100 клеток 14,15.
    1. Рассчитать концентрацию клеток на мл следующим образом : Среднее количество клеток на квадратный коэффициент разбавления х (если используется) х 10 4
  7. Повторите шаги 2.1-2.8 каждые 24 ч в течение 96 часов после высева.

3. Определение клеточной пролиферации при использовании люминесценция на основе Пробирной

Примечание: Это измерение конечной точки. После того, как реагент добавляют к клеткам, пластина может быть количественно определена только один раз.

  1. Оттепели люминесценцию реагента в водяной бане при 22 ° С в течение 30 мин.
  2. Аккуратно перемешайте реагент, перевернув бутылку, чтобы получить однородную смесь.
  3. Равновесие одну пластину из посеянных клеток (из стадии1,5) при комнатной температуре в течение 30 мин.
  4. Добавьте 100 мкл реагента люминесценции в каждую лунку. Смешайте содержимое на орбитальном шейкере в течение 2 мин. Разрешить пластины инкубируют в течение 10 мин при комнатной температуре.
  5. Настройка свечения эксперимент с использованием многомодового программного обеспечения на планшет-ридер.
    1. Включите многорежимный ридере и откройте программное обеспечение. В "диспетчере задач", выберите "эксперименты" и "создать new'.Select 'файл' из боковой панели, а под" протокола "вкладки, выберите« процедура ».
    2. Выберите 'Гренье 96 плоское дно "пластинчатого типа, и установите флажок" Использовать крышку ". Выберите "читать" действия в графе "метод чтения". Выберите метод обнаружения "люминесценции". Нажмите 'OK'.
    3. В ступенчатой ​​коробкой для чтения, выберите лунки, которые будут проверяться на вкладке "полную тарелку" и выберите колодцы, чтобы действовать как пустые скважины.
    4. Установите фильтр установлен на пустой фильтр (например, пробки, Em: отверстие, зеркало: нет). Установить усиление на135, со временем интегрирования 0,5 сек на лунку и для чтения высотой 6,5 мм. Нажмите "OK" для сохранения настроек для чтения люминесценции.
  6. Выполнение Люминесцентные Read
    1. Извлечь держатель пластин, выбрав вкладку "Управление прибором" и нажмите на "тарелку out'.Place 96-луночного планшета на держателе, обеспечивая крышку на. Закройте держатель пластины, нажав на "тарелку" на вкладке в разделе "управления прибором". Нажмите на «читать сейчас» из панели инструментов, чтобы выполнить люминесцентный чтения.
    2. Экспорт относительных измерений люминесцентный блок (РОС) для каждой скважины в электронную таблицу для дальнейшего анализа.
  7. Повторите шаги 3.1-3.6 для записи пролиферации каждые 24 ч до 96 ч после посева клеток.

4. Определение ячеек Count с помощью мобильного тепловизора

  1. Настройка эксперимента визуализации клеток с использованием многомодового ячейки Imager программного обеспечения на
    1. Включите томографа ячейки многорежимный и открытой гое программное обеспечение.
    2. В "диспетчере задач", выберите вкладку "Эксперименты" и "создать new'.On на '' панель инструментов, нажмите на" Файл "вкладку и открыть 'протокол процедуры' tab.Select 'заданной температуры' действий. Установить инкубатор 'на' и установить температуру до 37 ° C и проверьте "Прогрев" перед продолжением следующего шага 'коробки. Нажмите "OK" для сохранения настроек.
    3. Выберите "читать" действия. Нажмите на метод обнаружения 'изображения', выберите 'конечной точки / кинетическое' прочитать тип и тип оптики "Фильтры". Нажмите на ссылку "OK'.Click на" вкладке полную тарелку "и выберите лунки на планшете для включения в образ. Нажмите "OK", чтобы сохранить настройки.
    4. Выберите цель 2.5x из выпадающего вариантов "целей". На вкладке "каналы", выберите два канала: 469, GFP 525 и светлом поле. Проверить "Auto" экспозиции для обоих каналов и выбрать автоматическую экспозицию хорошо.
    5. Для определения Autо настройки фокусировки, выберите "автофокус" и нажмите на кнопку "Параметры". Для вариантов автоматической фокусировки, выберите метод "сканирования, а затем автоматической фокусировки '. Нажмите "OK" для сохранения настроек.
    6. Установите горизонтальное и вертикальное смещение от центра скважины (мкм) до 0.Select для сканирования нескольких изображений на лунку в 3 х 2 монтажа с горизонтальным шагом (мкм) = 2,881 и вертикальное расстояние между ними (мкм) = 2,127. Нажмите "OK" для сохранения настроек процедуры.
      Примечание: смотри таблицу 2 для параметров чтения.
  2. Выполнение чтения эксперимент по Selected Plate
    1. Нажмите на вкладку "управления прибором" и выберите "осаждаются" function.Place 96-луночного планшета в держателе, обеспечивая крышку на. На вкладке "управления прибором", выберите "тарелку в" функции. Выберите «читать сейчас» на вкладке пластины. Повторите прочитать каждые 24 ч до 96 ч после засева.
  3. Анализ клеток графа ИспользованиеCell Imager Программное обеспечение.
    1. Для анализа изображения, нажмите на вкладку "данные" на распечатанных пластине, выберите "картинка [469 GFP, 525 + Светлое поле] '. Двойной щелчок по снятое хорошо.
    2. Нажмите на загруженном изображении. Выберите 'анализ' и выберите одно изображение монтажа для анализа. Нажмите 'OK'.Check на' 'GFP канала только, и установить параметры , как указано в таблице 3. Нажмите кнопку "Start" , чтобы применить параметры к изображаемых клеток.
    3. Обратите внимание на маску подсчета клеток помещается над изображаемых клеток, который используется для определения количества клеток для каждого изображения. Нажмите кнопку "Применить изменения" и сохранить эти настройки для каждой пластины изображаемого на протяжении всего эксперимента.
    4. Однажды в распечатанных пластине, нажмите на падение "данные" вниз меню и выберите "количество клеток". Это будет генерировать общее число клеток на лунку.
    5. Экспорт всех данных в электронную таблицу, нажав на вкладку "Экспорт" для дальнейшего анализа состояне количества клеток на лунку.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Изучить различные методы измерения пролиферации культивируемых клеток, пролиферацию клеток в клетках MCF-7-Δ40p53 приемными клетками сравнивали с не-трансдуцированных клеток MCF-7-Лего клеток рака молочной железы линии. Эти три метода , которые сравнивали - обычный метод гемоцитометр, анализ люминесценции жизнеспособность клеток и клеток визуализации analysis- описаны на схеме (рис 1). Каждый метод имеет свои преимущества и недостатки для точного измерения подсчета клето...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В этом протоколе были рассмотрены три различных метода измерения пролиферации клеток в культуре клеток. Каждый метод был способен воспроизводимые и точные измерения пролиферации клеток в течение 96 часов, а результаты были сравнимы между каждым из методов тестируемых (рис 2 и 3). Оба анализа люминесценции на основе и способ формирования изображения клеток получены наиболее надежные результаты, показывающий линейные увеличение пролиферации клеток после 96 ч (рис 2, б). К...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы хотели бы поблагодарить доктора Хэмиша Кэмпбелла и профессора Энтони Брейтуэйта за их помощь в разработке трансдуцированных клеточных линий MCF-7-LeGO. Мы хотели бы выразить признательность за нашу финансовую поддержку со стороны Фонда Bloomfield Group через Институт медицинских исследований Хантера. B.C.M поддерживается стипендией APA от Университета Ньюкасла и стипендией MM Sawyer от Hunter Medical Research Institute.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Модифицированная среда Dulbecco's Eagle, без фенол-красногоцвета ThermoFisher Scientific21063-045С добавлением 10% FBS, 200 мМ L-глутамина, 2 и микро; г/мл инсулина и 1&микро; г/мл раствор пуромицина
L-глютамина (100x)ThermoFisher Scientific25030-081
Раствор инсулина человеческийSigma-AldrichI9278-5ML
Фетальная бычья сыворотка (FBS)Bovogen BiologicalsSFBS-F-500мл
Пуромицина дигидрохлоридSigma-AldrichP9620-10ML
0,5% раствор трипсина-ЭДТА (10x)ThermoFisher Scientific15400-054Разбавить в 2 раза в DPBS
Фосфатный буферный солевой раствор Dulbecco (DPBS) (1x)ThermoFisher Scientific30028-02
Колба для культуры тканей, 75 см<суп>2 зона ростаGreiner Bio-One658175
Scepter 2.0 Счетчик клетокMerck MilliporeAutomated Cell
Counter 96 лунок многолуночный планшет, плоское дноNunc167008
Улучшенный гемоцитометр NeubauerBOECO ГерманияBOE 01
Olympus IX51 инвертированный микроскопOlympusIX51
CellTiter-Glo 2.0 АнализPromegaG9242Люминесцентный анализ
Цитирование 3 Многорежимный считыватель для визуализации клетокBioTekПланшетный считыватель для люминесценции, флуоресценции и программное обеспечение для анализа данных светлых клеток
Gen5BioTekGEN5

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lane, D. P. Cancer. p53, guardian of the genome. Nature. 358 (6381), 15-16 (1992).
  2. Olivier, M., Hollstein, M., Hainaut, P. TP53 mutations in human cancers: origins, consequences, and clinical use. Cold Spring Harb Perspect Biol. 2 (1), a001008(2010).
  3. Olivier, M., et al. The clinical value of somatic TP53 gene mutations in 1,794 patients with breast cancer. Clin Cancer Res. 12 (4), 1157-1167 (2006).
  4. Bourdon, J. C., et al. p53 isoforms can regulate p53 transcriptional activity. Genes Dev. 19 (18), 2122-2137 (2005).
  5. Avery-Kiejda, K. A., et al. Small molecular weight variants of p53 are expressed in human melanoma cells and are induced by the DNA-damaging agent cisplatin. Clin Cancer Res. 14 (6), 1659-1668 (2008).
  6. Avery-Kiejda, K. A., Morten, B., Wong-Brown, M. W., Mathe, A., Scott, R. J. The relative mRNA expression of p53 isoforms in breast cancer is associated with clinical features and outcome. Carcinogenesis. 35 (3), 586-596 (2014).
  7. Weber, K., Bartsch, U., Stocking, C., Fehse, B. A multicolor panel of novel lentiviral "gene ontology" (LeGO) vectors for functional gene analysis. Mol Ther. 16 (4), 698-706 (2008).
  8. Riss, T. L., Moravec, R. A. Cell Biology. Celis, J. E. , Third Edition, Academic Press. 25-31 (2006).
  9. Ng, K. W., Leong, D. T., Hutmacher, D. W. The challenge to measure cell proliferation in two and three dimensions. Tissue Eng. 11 (1-2), 182-191 (2005).
  10. Riss, T. L., Moravec, R. A. Use of multiple assay endpoints to investigate the effects of incubation time, dose of toxin, and plating density in cell-based cytotoxicity assays. Assay Drug Dev Technol. 2 (1), 51-62 (2004).
  11. Butzler, M., Worzella, T., Hungriano, M., Osorio, F., Hanegraaff, I., Cowan, C. Automated cytotoxicity profiling using the CyBi-FeliX instrument, cell health assays and thaw-and-use cells. , http://au.promega.com/resources/pubhub/automated-profiling-using-the-cybi-felix-instrument-cell-health-assays-and-thaw-and-use-cells (2014).
  12. CellTiter-Glo 2.0 Assay Technical Manual #403. , http://www.promega.com/~/media/files/resources/protocols/technical%20manuals/101/celltiterglo%202%200%20assay%20protocol.pdf (2015).
  13. Banks, P., Brescia, P. J. Application Guide: Automated Digital Microscopy. , http://www.biotek.com/resources/articles/automated-digital-microscopy.html (2015).
  14. Bastidas, O. Cell Counting with Neubauer Chamber: Basic Hemocytometer Usage. , http://www.celeromics.com/en/resources/Technical%20Notes/cell-article-chamber.php (2016).
  15. Bastidas, O. Technical Note: Cell Count for Low Concentration Samples . , http://www.celeromics.com/en/resources/docs/Articles/Low-concentration-cell-counting.pdf (2012).
  16. Riss, T. L., Moravec, R., Niles, A. L., et al. Cell Viability Assays. Assay Guidance Manual[Internet]. Sittampalam, G. S., Coussens, N. P., Nelson, H., et al. , (2013 May 1 [Updated 2015 Jun 29]) http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK144065/ (2013).
  17. Quent, V. M., Loessner, D., Friis, T., Reichert, J. C., Hutmacher, D. W. Discrepancies between metabolic activity and DNA content as tool to assess cell proliferation in cancer research. J Cell Mol Med. 14 (4), 1003-1013 (2010).
  18. Crane, J., Mittar, D., Soni, D., McIntyre, C. Cell Cycle Analysis Using the BD BrdU FITC Assay on the BD FACSVerse System. , (2013 May 1 [Updated 2015 Jun 29]) https://www.bdbiosciences.com/documents/BD_FACSVerse_CellCycleAnalysis_AppNote.pdf 1-12 (2011).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cell ProliferationHemocytometer CountingLuminescence AssayCell ImagerMCF 7 Cell LinesAutomated Cell CounterMulti Mode Plate ReaderTrypsinization Protocol96 Well PlateGFP Imaging

Related Articles