Мы описываем здесь воспроизводимый протокол для изоляции мышиного круга Виллиса.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Протокол Выделяя мыши Круг Уиллис
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Церебральный артериальный круг (circulus артериальный Cerebri) или круг Уиллис (КПС) является кровеносной анастомоза окружающих зрительных нервов и гипоталамус, который поставляет кровь к мозгу и окружающих структур. Он был вовлечен в несколько цереброваскулярных расстройств, в том числе церебральной амилоидной ангиопатии (ВГА) -associated васкулопатии, внутричерепного атеросклероза и внутричерепных аневризм. Изучение молекулярных механизмов, лежащих в основе этих заболеваний для идентификации новых мишеней для лекарственных средств для их профилактики требуют животных моделей. Некоторые из этих моделей может быть трансгенными, в то время как другие будут включать в себя изоляцию спинно-сосудистую систему, в том числе метод CoW.The, описанный здесь, пригоден для изоляции коровой в любой линии мыши и обладает значительным потенциалом для скрининга (экспрессию генов, продуцирования белка, посттрансляционные модификации белков, secretome анализ и т.д.) исследования на крупных сосудах cerebro- мышиваскулатура. Он также может быть использован для исследований бывших естественных условиях, путем адаптации системы органов ванны , разработанной для изолированных мыши обонятельных артерий.
Введение
Церебральный артериальный круг (circulus артериальный Cerebri), также известный как круг Уиллис (КПС), петля Willisor Уиллис полигона) впервые был описан Томас Уиллис в 1664 Это кровеносная анастомоза, расположенных вокруг зрительных нервов и гипоталамус, который может рассматриваться в качестве центрального узла подачи крови в мозг и окружающих структур. Кровь входит в эту структуру через внутреннюю сонных и позвоночных артерий и она течет из круга с помощью внутренней средней и задней мозговых артерий. Каждая из этих артерий имеет левую и правую ветви по обе стороны круга. Базилярная, пост проходная и переднего общения артерии полный круг (рисунок 1
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все процедуры были выполнены в соответствии со стандартами Европейского Сообщества по уходу и использованию лабораторных животных, с одобрения местным комитетом по этике для экспериментов на животных (Иль-де-Франс-Париж-комитета, выдача разрешений 4270).
1. Анестезия
- Настаивать смертельную дозу фенобарбитала (до 1 мг / 10 г веса тела) внутрибрюшинно (27-го калибра иглы и 1 мл шприц) в взрослых мышей до операции.
2. Судно Перфузия
ПРИМЕЧАНИЕ: Там нет необходимости применять ветеринара мазь для глаз во время перфузии сосудов. Эта процедура является быстрой (5-10 минут)....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
PBS-перфузии мыши был убит, а корове выделен, как описано в разделе 3.2 протокола. Когда рассечение выполняется правильно, то КПС должен выйти из одного куска и должен быть слегка прозрачным из-за отсутствия остаточной крови в сосудистой системе.
Рисунок 2: корове мышь после выделения. (A) Обзор корове в блюдо 10 см .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Мы опишем здесь воспроизводимый протокол для выделения круга Уиллис. Наиболее распространенными цереброваскулярные нарушения, вовлекающие коровой являются CAA-ассоциированной васкулопатии, внутричерепное Атеросклероз и внутричерепных аневризм, все из которых влияют на стенки артериальных сосудов. Факторы риска хорошо известны, но молекулярный патогенез этих нарушений мозгового остается плохо изученным и специфические биологические маркеры для прогнозирования их возникновения отсутствуют. Существует значительный интерес .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторам нечего раскрывать.
Благодарности
Эта работа была поддержана Париж VI университета и грант Pierre Fabre Innovation.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Дульбекко s Фосфатный буферный физиологический раствор | Sigma-Aldrich | D8537 | |
| Dumont #55 Щипцы | Fine Science Tools | 11295-51 | |
| Закаленные ножницы для тонкой ирисы | Fine Science Tools | 14090-11 | |
| Ножницы - прямые / острые / острые 16,5 см | Инструменты для тонкой науки | 14002-16 | |
| Дюмон #7b Щипцы | Fine Science Tools | 11270-20 | |
| Стереоскопический зум-микроскоп | Nikon | SMZ745T | |
| CellBIND Surface 60 мм Чашка для культуры | Corning | #3295 | |
| Перистальтический насос - MINIPULS 3 | Gilson | M312 | |
| Pentobarbital Sodique | Ceva Santé Animale | FR/V/2770465 3/1992 |
Ссылки
- Beckmann, N., et al. Age-dependent cerebrovascular abnormalities and blood flow disturbances in APP23 mice modeling Alzheimer's disease. J Neurosci. 23 (24), 8453-8459 (2003).
- Sadasivan, C., Fiorella, D. J., Woo, H. H., Lieber, B. B.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Теги
