Методическая статья

Опробование Хищные кормления поведений

10.9K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/54404

⸱

4 сентября 2016 г.

 ,  ,  , 
1Department for Evolutionary Biology, Max-Planck Institute for Developmental Biology

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Поведенческие анализы предоставляют мощные инструменты для понимания функций нейронов. Здесь мы представляем несколько протоколов количественной оценки пищевого поведения хищников, обнаруженных у модельной нематоды Pristionchus pacificus и ее родственников. Кроме того, мы предлагаем методы анализа адаптаций к питанию хищников, включая структуру рта и зубов.

Аннотация

Этот протокол предоставляет множество методов для анализа и количественной оценки хищнического пищевого поведения у нематод. Многие виды нематод, включая Pristionchus pacificus, демонстрируют сложное поведение, наиболее поразительным из которых является хищничество личинок других нематод. Однако, поскольку это поведение отсутствует в модельном организме Caenorhabditis elegans, оно было подробно описано только недавно вместе с разработкой надежных поведенческих анализов. Это хищническое поведение зависит от фенотипически пластичных, но фиксированных морф рта, что делает правильную идентификацию и категоризацию этих животных необходимой. У P. pacificus существует два типа рта: стеностоматозный и эвристоматозный морфы 2, при этом только широротый эвристоматозный имеет дополнительный зуб и способен убивать личинок других нематод. Благодаря выделению большого количества личинок добычи, соответствующих по размеру, и последующему воздействию на хищных нематод, возможны анализы, включающие как «анализы трупа», так и «анализы укусов» правильно идентифицированных нематод ротовой морфы. Эти анализы дают возможность быстро количественно оценить показатели успешности хищничества и обеспечить подробный поведенческий анализ отдельных нематод, занимающихся хищнической пищевой деятельностью. Кроме того, с помощью высокоскоростной камеры также возможна визуализация изменений в активности глотки, включая динамику зубов и насосов.

Введение

Нематоды с их небольшими, но сложными нервной системы оказались мощными инструментами для понимания многих аспектов нейробиологии включая поведение. Значительная часть этих исследований была сосредоточена на модели организма Caenorhabditis Элеганс , в котором огромное количество различных поведения были успешно расчлененный и проанализированы. К ним относятся механосенсорных 3, хемотаксическая 4, относящийся к терморегуляции 5,6 и 7 влияния на чувствительный к магнитному полю спаривание 8,9, обучение 10 и кормления модели поведения 11. Тем не менее, другие более отдаленно родственных видов нематод отображения поведения , которые не наблюдаются в rhabditid C. Элеганс или альтернативно показать дополнительные уровни сложности, что вызывает соответствующие вопросы , касающиеся их развития и регулирования. Одним из таких примеров этого может наблюдаться в отдаленном родстве diplogastrid нематоды Pristionchus Пасификус, который отображает гораздо более сложным кормление будетhaviors и ритмы , чем наблюдаются в С. Элеганс 1. И это несмотря на два вида обмена гомологичных глоточные нейронов 12. Одновременно с этим дополнительным поведением кормления, P. расШсиз также отображает расширенную диетический диапазон, так как они являются заядлыми хищников, способных дополнять их бактериальное диету, также питаются личинками других нематод. К счастью, П. расШсиз была разработана в качестве модели для сравнительной и эволюционной биологии интегративной и поэтому многие молекулярные и генетические инструменты теперь доступны. Они включают в себя полностью виртуализированного и аннотированный геном 13, молекулярные и генетические инструменты , в том числе трансгенов 14 и CRISPR / cas9 15,16, а также подробное и хорошо аннотированный филогении 17 с более чем 25 близкородственных видов , включая его недавно обнаруженных видов сестра. Кроме того, экология многих видов Pristionchus включая P. расШсиз это мыLL определяется многими видами того , в настоящее время описано обмена necromenic ассоциации с жуки - скарабеи, множество они часто делиться с другими видами 18 нематод. П. Поэтому расШсиз обеспечивает прекрасную модельную систему , с помощью которой рассекать эволюцию новых видов поведения и их экологическое значение.

Для того чтобы проанализировать поведение грабительские кормления в видов нематод , таких как P. расШсиз мы разработали несколько новых поведенческих анализов для удобства наблюдения и количественной оценки грабительских действий. Как P. расШсиз отображает диморфной структуру рта, которая сильно влияет на хищническое поведение, идентификация правильного морфотипу имеет важное значение 1,2. Узкая горлышком stenostomatous морфом содержит один тупой спинной зуб и не участвует в какой-либо хищного кормления. С другой стороны, широкий рот eurystomatous морфом включает в себя гораздо большую форму когтя спинной зуб и дополнительный противк югу от вентральной зуба, которые вместе работают эффективно открыть кутикулу своей добычи. Отношение хищного eurystomatous к нехищной stenostomatous форме варьирует у разных видов Pristionchus , а также в пределах P. расШсиз, однако, процент eurystomatous рта трансформироваться в P. расШсиз штамм дикого типа (PS312), как правило , 70 - 90% 2. Кроме того, коэффициенты формы рта могут колебаться в зависимости от различных воздействий окружающей среды (как известно, в том числе голод и некоторые небольшие молекулы сигнализации, а также неизвестных факторов), таким образом правильную идентификацию и изоляцию хищного eurystomatous формы рта имеет важное значение для успешного проведения захватнических анализов.

Наряду с описанием хищного формы рта мы разработали "Bite анализа" для непосредственного наблюдения и количественной оценки грабительских поведения, включая кусает, убивая и подкормки события. Здесь жертва нематоды изолированы через фильтрфлу- вновь голодали культур и подвергаются хищный взрослых P. расШсиз, которые наблюдаются вместе в течение короткого промежутка времени. Кроме того, мы также разработали высокой пропускной способностью "труп анализа" для облегчения быстрого скрининга хищнического поведения путем косвенного наблюдения за хищными событий. Это имеет преимущество при наличии личиночной трупов в качестве инструмента для скрининга хищничества. Оба анализа обеспечивают легкое и очень воспроизводимые методы для наблюдения и измерения хищнического поведения у видов нематод , таких как P. расШсиз.

Протокол

1. Устье форма Фенотипирование

  1. Рот Форма идентификации на агарозном колодки
    Примечание: Для того, чтобы визуализировать морфы рот нематод, иммобилизации червей с мягким анестетика обработки на агарозном колодки и наблюдать следующим образом.
    1. Растут и поддерживать нематод культур , таких как P. расШсиз на 6 см стандарт среды для выращивания нематод (NGM) пластины и питаются бактериальной лужайке E. палочки OP50 19.
    2. Сделайте агарозном колодки сначала добавлением 0,06 г агарозы в 3 мл H 2 O в 15 мл трубки , чтобы сделать 3 мл 2% раствора агарозы. Это может храниться до года при температуре 4 ° С
    3. Смешать и тщательно расплавления агарозы в микроволновой печи или в качестве альтернативы использовать нагревательный блок установлен в> 88 ° С
    4. После того, как полностью растает, добавить 10 мкл 10% -ного раствора азида натрия в агарозы и тщательно перемешать. ВНИМАНИЕ: Сухой азид натрия является реактивным и все формы являются токсичными.
    5. С помощью 1 млмикропипетка, поместите каплю не менее 300 мкл жидкого агарозном азида смеси на середину стандартного стекло микроскопа.
    6. До того, как агар охлаждается, быстро поместить второй микроскопа в верхней части капли для того, чтобы сплющить агарозы, который образует площадку при охлаждении. Повторите эту операцию для прокладок, как требуется.
    7. Непосредственно перед использованием, кожицу обособленно стекла микроскопа, сдвинув их друг к другу. Примечание: Если агарозы колодки готовят слишком далеко вперед, они могут быть чрезмерно сухой и может привести к повреждению нематодами.
    8. Для передачи червей на анестетик агарозы колодки, поместите каплю M9 буфера (2 - 3 мкл) на центр площадки. Pick 2 - 3 молодой П. Пасификус взрослых в каплю M9 перед тщательно размещая крышку скольжения по панели. П. Пасификус нематоды будут иммобилизованы в агарозы и готов к визуализации.
    9. Перенести стекло микроскопа, содержащий наркозом червя соответствующего микроскопомй наблюдать под 63X Nomarski оптики. Классифицировать морфинга идентичности на основе следующих признаков: наличие дополнительного суб-вентральной зуба, увеличенный спинной зуб и широкое открывание рта свидетельствует о eurystomatous во рту Оборотня животного, в то время как наличие одного спинного зуба и узким отверстием рта указывает на stenostomatous животных (рисунок 1).
      Примечание: Для поддержания здоровья животного, червей следует поддерживать на агар площадку в течение не более 5 мин.
    10. После идентификации рта оборотня, либо восстановить eurystomatous или stenostomatous нематод в соответствии с требованиями, сняв покровное осторожно сдвинув агарозном площадку. Тщательно выбрать отобранных животных из агарозы колодки (E.coli OP50 может быть использован на отмычки , чтобы сделать его более липким) на свежие чашки с NGM. Разрешить восстановление после наркоза до нормального подвижны поведение не возобновилась, на которых животные готовы к дальнейшим грабительских анализов.
  2. Rapid Рот Фенотипирование
    Примечание: В качестве альтернативы, с большим опытом, рот тип формы может быть проанализирован без необходимости какого-либо обезболивающего лечения через стереомикроскопа с большим увеличением (150х).
    1. Место нематоды на стандартных пластинах NGM с бактериальным газоном Е. палочка OP50 на область просмотра микроскопа.
    2. Обнаружение различий в размерах рта и ширине. Примечание: При этом увеличении нет зуба подобных структур не наблюдаются, поэтому идентификация рта Morph основан исключительно на широких устьев по сравнению с узкими устьями.

2. Анализ Укус

Примечание: кусаться анализы позволяют подробно хищный поведенческий анализ.

  1. Растут и поддерживать нематод культур на стандартных пластинах NGM (6 см) и питаются бактериальной лужайке E. палочки OP50 19.
  2. Сделать Планшеты выращивая большое количество личинок выбранной нематодами добычи , таких как C. Элеганс или дрternatively соответствующее экологически отношение добычу. Примечание: Взрослый C. Элеганс слишком велики , чтобы быть подходящей добычей , поэтому важно использовать личиночной стадии.
    1. Поддерживать C. Элеганс или другие потенциальные виды охотятся на стандартных пластинах NGM и кормов на бактериальной лужайке Е. палочки OP50 , пока население не свеже от голода, в результате чего обилие молодых личинок L1.
      Примечание: Время голодания зависит от многочисленных экологических и экспериментальных факторов, включая количество нематод , используемых для запуска культуры, количество E. палочки OP50 добавил, и температура окружающей среды.
  3. Вымойте четыре или более свеже голодали копытных пластин с M9 и передать решение червя через два 20 мкм фильтры для удаления всех крупных животных и все оставшиеся яйца перед сбором в 15 мл трубки. Лишь небольшая личинки должны оставаться в растворе.
  4. Для того, чтобы сформировать личиночной осадок центрифуге отфильтрованную добычу на 377 мкг в течение 1 мин.
  5. Пипеток 3 мкл чистого червячного гранул на 6 см NGM пластины, без E. OP50 палочка присутствует и ждать , по крайней мере , 30 минут для личинок , чтобы распространиться достаточно , чтобы генерировать планшет для анализа.
    Примечание: 3 мкл чистого червячного гранул на стандартных аналитических планшетов содержат личинки добычу> 3000. Этого достаточно, чтобы произвести частый контакт между хищниками и добычей.
  6. Экран хищные нематоды для требуемого рта морфом (протокол 1).
  7. С помощью стандартных червячных собирание методы и свет стереомикроскопа 19 передача распознаны хищников на в планшет для анализа. Позаботьтесь, чтобы передать, как маленькие OP50 бактерии, как можно ближе к пластине анализа при передаче хищников в целях сведения к минимуму бактериального загрязнения. Подождите 15 минут, чтобы позволить червю оправиться от стресса, передаваемого и проверить на мотильных поведение дикого типа, чтобы гарантировать черви не были повреждены в результате передачи.
    Примечание: Там нет необходимости голодать P. пакificus, так как они являются высокоэффективными хищники других личинок нематод , даже в то время как хорошо питался бактерий.
  8. После выздоровления, наблюдать хищника с помощью светового стереомикроскопа в течение 10 мин. С помощью этого оборудования, наблюдения и характеризуют различные события , такие как кормление кусаться, характеризуется хищника , ограничивающего движение жертвы, убивая, где путем открытия добычи кутикулы обнаружен; и кормление, с разбивкой по наблюдаемым потребления добычи внутренностей (рис 2A, B и Movie 1).
  9. Повторите анализ с помощью скрининга и наблюдения как минимум 10 отдельных хищных нематод для обеспечения точности.

3. Анализ Труп

Примечание: Corpse анализы способствуют более быстрому квантификацию хищнического поведения.

  1. Растут и поддерживать нематод культур на стандартных пластинах NGM и питаются бактериальной лости Е. палочки OP50 19. Сформировать трехкратном повторе пробирного пластин, упомянутых ранее (протокол 2.1 - 2.5).
  2. Экран хищные нематоды для требуемого рта морфом, как описано в протоколе 1. С помощью стандартных червячных выбора методов и трансфер света Стереомикроскоп 5 грабительские нематод с требуемым рот морфом к каждой пластине для анализа. Оставьте хищников вместе с добычей в течение 2 часов.
  3. Через 2 ч экрана планшета для анализа на наличие опустели трупов (Фигура 2В и С). Выявление трупов отсутствием перистальтики наряду с очевидными морфологическими дефектами, включая утечку внутренностей или отсутствующие фрагменты червя.

4. Анализ глоточной и Tooth движения

  1. Растут и поддерживать нематод культур на стандартных пластинах NGM и питаются бактериальной лужайке E. палочки OP50 19. Сформировать Планшеты, как уже упоминалось ранее (протокол 2.1 - 2.5). Если стандартные 6 смNGM пластины не укладываются между объективом и предметный столик микроскопа, используйте крышку небольшие 35 мм чашки Петри, содержащие 2 мл NGM как подходящую альтернативу.
  2. Экран хищный нематоды для требуемого рта морфом, как описано в протоколе 1. С помощью стандартного червяка собирание методы и легкие стереомикроскопа, передачи одного распознаны хищником в планшет для анализа. Подождите 15 минут, чтобы позволить червю оправиться от стресса передается.
  3. Обратите внимание хищных животных на микроскопом при 40 - 63x Normaski, с высокоскоростным камерой (видео 2 и 3). Запись глоточной накачки и перемещение зубов в течение 15 сек, при 50 Гц, по меньшей мере, 20 животных, чтобы обеспечить точную количественную оценку. Воспроизведение записанных фильмов с требуемой скоростью для подсчета отдельных насосов и событий зуба.
    Примечание: Насосное наблюдается в корпусе, расположенном в середине глотки, в то время как движение зуба обнаруживается в отверстии рта и только О.Б.подается с дорсальной зуба.

Результаты

После успешной идентификации соответствующего рта морфом в P. расШсиз, четкие различия между eurystomatous и stenostomatous животных могут быть обнаружены (рисунок 3) с только eurystomatous животных , участвующих в убийстве поведения. В stenostomatous животных такое поведение, как представляется, подавляется полностью. Кроме того, различия в активности зуба и зева накачке eurystomatous животных на бактерии и их кормовой базы (рисунок 4 и фильмы 2 и 3) также очевидны. В то время как хищного кормления, скорость откачки снижается ниже, что наблюдается при бактериальной кормления и перемещения зуба обнаруживается в один к одному соотношении с глоточной накачки. Это потенциально свидетельствует о ключевых регуляторных механизмов, модулирующих поведенческой реакции на различную диету.

s / ftp_upload / 54404 / 54404fig1.jpg "/>
Рисунок 1. P. расШсиз имеет Mouth диморфизм , который влияет на пищевое поведение. (A) eurystomatous форма рта способна хищничества и имеет широкое отверстие рта с большой форме когтя спинного зуба (ложного цвета красный) и (В) большой противостоящий крюк в форме суб-вентральной зуба (ложно-синего цвета). (C) stenostomatous форма рта только в состоянии питаться бактерии и имеет более узкое входное отверстие с фасонной кремневого спинной зуб (ложного цвета красный) и (D) не суб-вентральной зуба (*). Normaski изображения 63X и Шкалы составляет 10 мкм. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

figure-results-1
Рисунок 2. Хищничество Assays. (A) P. расШсиз кусает и убивает личинок других нематод , таких как C. Элеганс. (B) Для жевательных анализов, количество bitesby хищников (*) можно наблюдать с помощью светового стереомикроскопа и успешное убийство и подкормки события также регистрируются. Трупы также отчетливо видны (кружки). (C) Для трупа анализов, личиночные тушки (стрелки) можно легко определить по сравнению с живых личинок. Шкала бар представляет 1 мм B и 150 мкм в C. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

figure-results-2
Рисунок 3. Результаты прикуса и Corpse тестирований C. Элеганс Prey. (A) Укусы поведение проявляется только в eurystomatous форме рта с таким поведением не отображается в stenostomatous животных. Бар ошибки представляет собой стандартное отклонение 10 повторах. (B) , совпадающую с не кусательной видно из stenostomatous животных, трупные анализы также показывают тушки только на тест - пластин eurystomatous животных. Бар ошибки представляет собой стандартное отклонение 5 повторах. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

figure-results-3
Рисунок 4. Eurystomatous Насосное Rate и Tooth движение во время кормления хищных. Движение зубов наблюдается только тогда eurystomatous животные занимаются хищного кормления. Это также совпадает с уменьшением глоточной накачки. бар ошибки представляет собой стандартное отклонение 10 повторах. HREF = "https://www.jove.com/files/ftp_upload/54404/54404fig4large.jpg" целевых = "_blank"> Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

figure-results-4
Фильм 1. Наблюдение Убийство поведение для прикуса Пробирной с помощью светового стереомикроскопа. (Щелкните правой кнопкой мыши , чтобы скачать).

figure-results-5
Фильм 2. Высокоскоростной Кинокамера П. расШсиз убийство С. Элеганс Личинки. (Нажмите правой кнопкой мыши , чтобы скачать).

Объявление / 54404 / 54404movie3.jpg "/>
Фильм 3. Увеличенный Высокоскоростной камеры Зуба движения во время хищничества. (Нажмите правой кнопкой мыши , чтобы скачать).

Обсуждение

Нематоды обеспечивают мощную систему для понимания нейробиологии и поведения с C. Элеганс до сих пор является основным инструментом. Тем не менее, многочисленные виды нематод , включая P. Пасификус дисплей поведения, которые отсутствуют или изменяются в сложности от модельного организма C. Элеганс и , следовательно , повысить увлекательные вопросы , касающиеся развития и регулирования этих видов поведения. Одним из таких дополнительных поведение во многих других видов нематод , включая P. расШсиз является способность в дополнение к их бактериальное диету, занимаясь хищного кормления 1, 20. Поэтому мы разработали и описали подробный протокол для легкой и быстрой характеристики этих ранее непроанализированных грабительских поведения в нематод.

Во-первых, мы предусмотрели методы скрининга изменений в питании аппарата в пределах нематод рта. Определение правильного типа рта является важным первым sТЭП для успешных анализов хищничества , как, по крайней мере , в пределах рода Pristionchus только eurystomatous животные способны хищного кормления. Лучше всего, чтобы определить рот морфы с протоколом "быстрый рот фенотипирования», описанного в протоколе 1.2, поскольку этот метод является гораздо менее агрессивна и, следовательно, менее вероятно, что хищные поведение может быть возмущенных. Тем не менее, рекомендуется сначала ознакомиться с различными структурами рта путем идентификации с наркотизированных животных на чашках с колодками (протокол 1.1).

После идентификации нужного морфом рта, мы описали два анализы для количественного определения хищный кормления. Это быстрый, высокая пропускная способность "Труп анализа" (протокол 3) и больше времени, но поведенческий анализ более глубокий через "Bite анализа" (протокол 2). Оба эти протокола являются весьма гибкими позволяет для различных модификаций с целью оптимизации анализов в зависимости от экспериментальТребования к ментальные. Для укуса анализов с использованием P. Пасификус хищников на C. Элеганс добычей, наблюдения хищных поведенческих взаимодействий для временного окна 10 мин было достаточно , чтобы количественно оценить значительное количество укусов наряду с другими событиями кормления. Для "трупные анализов" снова с использованием P. Пасификус хищников на C. Элеганс добычей, 5 хищников в течение 2 ч производится легко поддающиеся количественному определению и последовательные номера трупа , позволяющие для быстрого поведенческого анализа. Тем не менее, следует отметить различные виды хищных нематод двигаться с разной скоростью, едят с разной скоростью и в целом демонстрируют большое разнообразие в другие виды поведения 1. Кроме того, различные виды добычи также может быть съеден с разной скоростью по аналогичным причинам. Поэтому рекомендуется, чтобы оптимизировать анализы, основанные на испытанных видов нематод как в качестве хищников и добычи, а также для любых различий в условиях окружающей среды. Во время обоих "Bite" и "корпусе "анализы очень важно, чтобы обе жертвы и хищники здоровы, как подчеркивает или травмированных хищников не будет убивать эффективно. Кроме того, свежие аналитические планшеты имеют важное значение, как более старые пластин могут стать высохли что негативно сказывается на здоровье нематод приводит к ошибочным анализы. Следует также надеяться , что будущие итерации этих грабительских анализов смогут воспользоваться преимуществами последних достижений в области технологий для того , чтобы автоматизировать большую часть анализа , как было сделано для исследования поведения многих наблюдаемых в C. Элеганс 21, 22. в настоящее время проблемы могут возникнуть у нематод , таких как П. расШсиз , как они появляются гораздо более чувствительны к контакту, делая изоляцию и иммобилизации в микрофлюидальных камерах, способных отменяют хищный вскармливание. Преодоление это может оказаться сложной задачей , но будет способствовать отдельных нематод, отбираемые на более тонкие хищная поведения.

Наконец, мы также предоставили методы Foг изучения устройства нематода кормления сам облегчающую сравнения между хищными и бактериальным режимов кормления с помощью количественного анализа кинетики зуба и глоточной накачки с помощью камеры высокоскоростной (протокол 4). Количественное скоростей глоточной накачки в C. Элеганс был использован для мониторинга кормления в течение многих лет 23, тем не менее, С. Элеганс не хватает какой - либо форме рта зубец , а также не хватает грабительские поведения. Через объединение количественной оценки глоточной накачки с этим зубной активности, может также наблюдаться любые иннервации зубов, характерных для хищничества. В связи с увеличением требуемого для наблюдения за перемещением зуба животные часто перемещаются из фокальной плоскости, таким образом, как правило, можно только наблюдать за зуб за коротких временных окон. Кроме того, в отличие от С. Элеганс, глотка Р. расШсиз не непрерывно прокачивать, а он участвует в заклинаниях накачкой и кормления. Поэтому для точного глоточной ГПМставки пинг во время кормления, чтобы определить, необходимо записать 15 с непрерывной подачей.

Таким образом , эти методы , представленные здесь , обеспечивают первую основу для исследования грабительские поведения в системах нематод. Кроме того, они также могут быть адаптированы для использования при изучении других взаимодействий внутри нематод экосистемы , включая влияние дополнительно экологически соответствующих организмов на хищничество включая микроорганизмы, грибы и клещей , Таким образом, они дают возможность препарировать, как эти хищные формы поведения регулируются, как они, возможно, развивались, а также их экологическое значение.

Раскрытие информации

Авторы заявляют об отсутствии финансовых или конкурирующих интересов.

Благодарности

Мы благодарим доктора Даниэля Бамбаргера за картину хищнического поведения. Эта работа финансировалась Обществом Макса Планка.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Фильтры из нейлоновой сетки (20 µ m)Merck Millipore LtdNY2004700Используется для фильтрации червей, просто оставляя личинок для использования в качестве добычи.
PP Воронка для фильтра (54 мм)Duran292215003Используется для фильтрации червей, просто оставляя личинок для использования в качестве добычи.
Маленькая чашка Петри (35/10 мм)Greiner Bio-One 627102Для визуализации на высокоскоростной камере
Zeiss SteREO Discovery V12Для идентификации формы рта
Axio-Imager A1Для идентификации формы рта
Стеклянные слайдыRothH869
Motion Scope M3 Высокоскоростная камераIDTВысокоскоростная камера
Видеозум 44 ENG 1/2" от 0,5X до 2,4XZeis452984-0000-000Высокоскоростной зум камеры
Среда для роста нематоды (NGM) Ингредиенты:
АгарРот5210,2CAS-Nr. 9002-18-0
Хлорид натрия (NaCl)Roth3957CAS-Nr. 7647-14-5
Bacto TryptoneBD211699Lot 4316614
Дигидрат хлорида кальция (CaCl2)Sigma-AldrichC3306CAS-Nr. 10035-04-8
Холестерин из ланолинаSigma-AldrichF 26732 00050CAS-Nr. 57-88-5
Гептагидрат сульфата магния (MgSO4)Merck1,058,861,000CAS-Nr. 10034-99-8
Дигидрофосфат калия (KH2PO4)ACROS organics271080025CAS-Nr. 7778-77-0
6 см чашка ПетриGreiner Bio-One628102
чашка Петри 3,5 смGreiner Bio-One627102
M9 ингредиенты:
Дигидрофосфат калия (KH2PO4)ACROS organics271080025CAS-Nr. 7778-77-0
Гидрофосфат натрия гептагидрат (NaHPO4)Sigma-AldrichS9390-500G-DCAS-NR. 7782-85-6
Sodium chloride (NaCl)Roth3957CAS-Nr. 7647-14-5
Защитные стекла Roth 657

Ссылки

  1. Wilecki, M., Lightfoot, J. W., Susoy, V., Sommer, R. J. Predatory feeding behaviour in Pristionchus nematodes is dependent on phenotypic plasticity and induced by serotonin. J Exp Biol. 218 (Pt 9), 1306-1313 (2015).
  2. Ragsdale, E. J., Muller, M. R., Rodelsperger, C., Sommer, R. J. A Developmental Switch Coupled to the Evolution of Plasticity Acts through a Sulfatase. Cell. 155 (4), 922-933 (2013).
  3. Goodman, M. B. Mechanosensation. WormBook. , 1-14 (2006).
  4. Rankin, C. H. Nematode behavior: the taste of success, the smell of danger! Curr Biol. 16 (3), R89-R91 (2006).
  5. Beverly, M., Anbil, S., Sengupta, P. Degeneracy and neuromodulation among thermosensory neurons contribute to robust thermosensory behaviors in Caenorhabditis elegans. J Neurosci. 31 (32), 11718-11727 (2011).
  6. Kimata, T., Sasakura, H., Ohnishi, N., Nishio, N., Mori, I. Thermotaxis of C. elegans as a model for temperature perception, neural information processing and neural plasticity. Worm. 1 (1), 31-41 (2012).
  7. Vidal-Gadea, A., et al. Magnetosensitive neurons mediate geomagnetic orientation in Caenorhabditis elegans. Elife. 4, (2015).
  8. Chute, C. D., Srinivasan, J. Chemical mating cues in C. elegans. Semin Cell Dev Biol. 33, 18-24 (2014).
  9. Sherlekar, A. L., Lints, R. Nematode Tango Milonguero - the C. elegans male's search for the hermaphrodite vulva. Semin Cell Dev Biol. 33, 34-41 (2014).
  10. Sasakura, H., Mori, I. Behavioral plasticity, learning, and memory in C. elegans. Curr Opin Neurobiol. 23 (1), 92-99 (2013).
  11. Avery, L., You, Y. J. C. elegans feeding. WormBook. , 1-23 (2012).
  12. Bumbarger, D. J., Riebesell, M., Rodelsperger, C., Sommer, R. J. System-wide Rewiring Underlies Behavioral Differences in Predatory and Bacterial-Feeding Nematodes. Cell. 152 (1-2), 109-119 (2013).
  13. Dieterich, C., et al. The Pristionchus pacificus genome provides a unique perspective on nematode lifestyle and parasitism. Nature Genetics. 40 (10), 1193-1198 (2008).
  14. Schlager, B., Wang, X. Y., Braach, G., Sommer, R. J. Molecular Cloning of a Dominant Roller Mutant and Establishment of DNA-Mediated Transformation in the Nematode Pristionchus pacificus. Genesis. 47 (5), 300-304 (2009).
  15. Witte, H., et al. Gene inactivation using the CRISPR/Cas9 system in the nematode Pristionchus pacificus. Dev Genes Evol. 225 (1), 55-62 (2015).
  16. Lo, T. W., et al. Precise and Heritable Genome Editing in Evolutionarily Diverse Nematodes Using TALENs and CRISPR/Cas9 to Engineer Insertions and Deletions. Genetics. 195 (2), 331-348 (2013).
  17. Sommer, R. J., McGaughran, A. The nematode Pristionchus pacificus as a model system for integrative studies in evolutionary biology. Molecular Ecology. 22 (9), 2380-2393 (2013).
  18. Herrmann, M., et al. The nematode Pristionchus pacificus (Nematoda : Diplogastridae) is associated with the oriental beetle Exomala orientalis (Coleoptera:Scarabaeidae) in Japan. Zoological Science. 24 (9), 883-889 (2007).
  19. Chaudhuri, J., Parihar, M., Pires-daSilva, A. An Introduction to Worm Lab: from Culturing Worms to Mutagenesis. J Vis Exp. (47), e2293(2011).
  20. Serobyan, V., Ragsdale, E. J., Sommer, R. J. Adaptive value of a predatory mouth-form in a dimorphic nematode. Proc. R. Soc. B Biol. Sci. 281, 20141334(2014).
  21. Albrecht, D. R., Bargmann, C. I. High-content behavioral analysis of Caenorhabditis elegans in precise spatiotemporal chemical environments. Nat Methods. 8 (7), 599-605 (2011).
  22. Yeminin, E., Jucikas, T., Grundy, L. J., Brown, A. E., Schafer, W. R. A database of Caenorhabditis elegans behavioral phenotypes. Nat Methods. 9 (10), 877-879 (2013).
  23. Raizen, D. M., Lee, R. Y. N., Avery, L. Interacting Genes Required for Pharyngeal Excitation by Motor Neuron MC in Caenorhabditis elegans. Genetics. 141 (4), 1365-1382 (1995).

Перепечатки и разрешения

Теги

Pristionchus pacificusM9OP50
Опробование Хищные кормления поведений
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.