Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Мышиные сгибателя Травмы и ремонт хирургии

13K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/54433

⸱

19 сентября 2016 г.

 , 

В этой статье

Краткое содержание

Сгибательных сухожилий в руке, как правило, получили ранения, что приводит к нарушению функции руки. Тем не менее, рубцовой ткани заживление ответ не очень хорошо характеризуется. Мышиной модели сухожилия сгибателей исцеление здесь продемонстрировано. Эта модель может повысить общее понимание процесса заживления и оценить терапевтические подходы для улучшения заживления.

Аннотация

Сухожилие соединяет скелетные мышцы и кости, облегчая перемещение почти всего тела. В руке, сгибательных сухожилий (FTS) позволяют сгибание пальцев и общей функции руки. Травмы FTS являются общими, и удовлетворительное заживление часто нарушается из-за избытка рубцовой ткани и спаек между сухожилием и окружающими тканями. Тем не менее, мало известно о молекулярных и клеточных компонентов ремонта FT. С этой целью, на мышиной модели ремонта FT, который повторяет многие аспекты заживления в организме человека, в том числе ослабленным диапазон движения и снижение механических свойств, было разработано и описано ранее. Здесь углубленное демонстрация этой хирургической процедуры обеспечивается, включая рассечение и последующий ремонт сгибателя пальцев (FDL) сухожилие в мышиной заднюю лапу. Этот метод может быть использован для проведения анализа клонов различных типов клеток, оценить эффекты усиления гена или с потерей функции, а также для проверки Эффитивность фармакологических вмешательств в процессе заживления. Тем не менее, существует два основных ограничения для этой модели: I) сухожилие FDL в средней части мышиного заднюю лапу, где происходит рассечение и ремонт, не окружен синовиальной оболочкой. Поэтому данная модель не учитывает потенциальный вклад оболочки в процессе формирования рубца. б) Для защиты целостности сайта ремонта, FT выпущен на myotendinous переходе, уменьшая механические силы сухожилия, вероятно, способствует повышенному образованию рубцов. Выделение достаточных клеток из грануляционной ткани FT во время процесса заживления для проточной цитометрии анализа оказалось сложной задачей; цитологическое центрифугирование, чтобы сконцентрировать эти клетки альтернативный метод, используемый, и позволяет для генерации клеточных препаратов, на которых может быть выполнена иммунофлуоресцентного маркировка. С помощью этого метода, определение количества клеток или интерес белков во время FT заживления становится возможным.

Введение

Сгибательных сухожилий в руке работают совместно с сгибателей предплечья и цифровых ножен, чтобы позволить сгибание цифр и схватив функции руки. Сгибательных сухожилий бежать вдоль ладонной аспекту стороны; это относительно поверхностное расположение часто приводит к травмам сухожилий сгибателей во время травмы руки. Сухожилия заживают через ответ рубцовой ткани , а не регенерации нормальной ткани сухожилия 1. В то время как это рубцовая ткань обеспечивает непрерывность сухожилия, функция резко снизился относительно здорового сухожилия. Композиты сухожилие-рубцовой ткани характеризуются обесцененным механическими свойствами 1, что делает восстан....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Комитет по научным исследованиям университета животных в Университете Рочестера одобрил все эксперименты на животных. / Были использованы десять-12 недельных самок C57BL 6J мышей.

1. Подготовка животных для сгибателя хирургии (~ 15 мин)

  1. Автоклавы хирургические инструменты для стерилизации, носить стерильные перчатки повсюду, и поддерживать стерильную операционное поле.
  2. Обезболить мышь через внутрибрюшинной инъекции (IP) с объемом кетамина (80 мг / кг) и ксилазина (10 мг / кг), соответствующего веса тела. Подтвердить глубину седации через отсутствие ног-пинча рефлекс.
  3. Администрирование упреждающего анальгезию....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Сгибателя пальцев (FDL) мышца, расположенная в икре, действует сгибать цифры мыши заднюю лапу через сгибателя (выделены синим цветом на рисунке 1А, и показано гистологически на рисунке 2А), которая проходит в проксимальном направлении от myotendinous узел и оканчивается в дистальных фаланг. В этой модели сухожилия сгибателей исцеления, сухожилие FDL перерезают и отремонтировано в середине стопы, проксимальнее бифуркации к цифрам задней лапы (красные стре.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Хирургическая процедура для мышиной модели полного рассечения и ремонта сгибателя пальцев сухожилие представлен в данном исследовании. Кроме того роман применение концентрируясь небольших клеточных популяций с цитологии центрифуге демонстрируется, что позволяет для количественного анализа Иммуноцитохимическую клеточной среды во время заживления сухожилия сгибателей. Эта модель ремонта сухожилия сгибателя демонстрирует воспроизводимое целебный ответ, который может быть использован для оценки изменений в процессе заживлен.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов

Благодарности

Эта работа была частично поддержана Американским обществом по хирургии Pilot премии Hand и NIH / NIAMS 1K01AR068386-01 (до AEL) и NIAMS / NIH P30AR061307.

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Surgical preparation
C57BL/6J мыши Jackson Laboratories000664
KetamineHospiraNDC# 0409-2051-05
XylazineLloyd Inc.NDC# 61311-482-10
БупренорфинПар Фармасьютикал Инк.NDC# 42023-179-10
0,9% натрия хлорид орошениеHospiraNDC# 0409-6138-03Для приготовления растворов кетамина/ксилазина и бупренорфина
1 мл шприцBD309659
30 г иглаBD305106
раствор повидона-йодаAplicare82-226
70% этанол
Ветеринарная офтальмологическая мазь PuralubeDechra Veterinary ProductsNDC# 17033-211-38
НазваниеCompanyНомер в каталогеКомментарии
Хирургические инструменты
Портативные весы 200 гOhausSP202
Пружинные ножницыFine Science Tools15124-12
Щипцы Dumont #5Fine Science Tools11251-30
ИглодержателиFine Science Tools91201-13
Микропружинные ножницыFine Science Tools15003-08
МикроиглодержателиFine Science Tools12061-02
5-0 нейлоновые шовные материалыEthicon668G
8-0 микрохирургические нейлоновые шовные материалыEthicon2808G
Lab-Line гистологический грелка для слайдовBarnstead International26025
NameCompanyНомер в каталогеКомментарии
<метод стронг>Цитоспин
коллагеназа I типа, лиофилизированнаяLife Technologies 1700-017
Сыворотка крупного рогатого скота АльбуминКлеточные сигнальные технологии9998S
1x PBSThermo Fisher10010-023
Цитологические воронкиFisher HealthCare10-354
Предметные стекла микроскопа HistoBond+VWR16005-110
Центрифуга Cytospin 2ShandonSH-CYTO2
Name<strong>Company>Номер в каталогеКомментарии
Иммуноцитохимия
Слайдовый лоток для окрашивания с черной крышкойIHC WorldM920-2
Click-iT Plus EdU Imaging KitLife Technologies C10639включает в себя EdU и  Hoeschst 33342
Immedge гидрофобная барьерная ручкаVector LaboratoriesH-4000
ProLong Diamond монтажная средаThermo FisherP36970
Стеклянные покровные стекла 24 x 50 мм #1.5
Прозрачный лак
для ногтей

Ссылки

  1. Lin, T. Biomechanics of tendon inury and repair. J Biomech. 37, 865-877 (2004).
  2. Strickland, J. W. Development of flexor tendon surgery: twenty-five years of progress. J Hand Surg [Am]. 25, 214-235 (2000).
  3. Bunnell, S.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Хирургическое восстановление сухожилиязадняя стопа мышидлинный сгибатель пальцевперерезка сухожилияшов по Кесслерурасщепление коллагеназойпроточная цитометрияиммунофлуоресцентное маркированиефлуоресцентная микроскопия