Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Хлорного железа-индуцированной мышиной модели Тромбоз

22.8K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/54479

⸱

5 сентября 2016 г.

 ,  , 

В этой статье

Краткое содержание

Мы сообщаем о изысканную процедуру хлорида железа (FeCl 3) индуцированный моделей тромбоз на сонной и брыжеечной артерии, а также вены, характеризующийся эффективно использовать прижизненной микроскопии для контроля времени окклюзионные тромбообразования.

Аннотация

Артериальный тромбоз (тромб) является распространенным осложнением многих системных заболеваний, связанных с хроническим воспалением, включая атеросклероз, диабет, ожирение, рак и хронические аутоиммунные ревматологические заболевания. Тромбы являются причиной большинства инфарктов, инсультов и потери конечностей, что делает тромбоз чрезвычайно важной проблемой общественного здравоохранения. Поскольку эти тромбы возникают в результате неадекватной активации тромбоцитов и последующей коагуляции, терапевтическое воздействие на эти системы имеет важное клиническое значение для разработки более безопасных методов лечения. Из-за сложностей системы гемостаза эксперименты in vitro не могут воспроизвести взаимодействие крови со стенками сосудов; Таким образом, исследования in vivo имеют решающее значение для понимания патологических механизмов образования тромбов. С этой целью были разработаны различные модели тромбоза у мышей. Среди них повреждение сосудов, вызванное хлоридом железа (FeCl3), является широко используемой моделью окклюзионного тромбоза, которая сообщает об активации и агрегации тромбоцитов в контексте асептической закрытой сосудистой системы. Эта модель основана на редокс-индуцированном повреждении эндотелиальных клеток, которое является простым и чувствительным как к антикоагулянтам, так и к антитромбоцитарным препаратам. Время, необходимое для развития тромба, который блокирует кровоток, дает количественную меру повреждения сосудов, активации и агрегации тромбоцитов, что имеет отношение к тромботическим заболеваниям. Мы значительно усовершенствовали эту модель тромбоза сосудов, индуцированного FeCl3, что делает данные высоковоспроизводимыми с минимальными вариациями. Здесь мы описываем модель и представляем репрезентативные данные из нескольких экспериментальных установок, которые демонстрируют полезность этой модели в исследованиях тромбоза.

Введение

Артериальный тромбоз (сгусток крови) является частым осложнением многих системных заболеваний, связанных с хроническим воспалением, включая атеросклероз, сахарный диабет, ожирение, рак и хронические аутоиммунные ревматологических заболеваний. Тромбы, которые происходят в стволе артериальной циркуляции с несоответствующей активацией тромбоцитов, агрегации и последующих coagulatory механизмов, а также участвуют в сердечных приступов, инсультов и потери конечностей. Стенка сосуд представляет собой сложную систему , которая включает в себя различные типы клеток и зависит от множества внешних факторов , в том числе напряжения сдвига, циркулирующих в крови клеток, гормоны ....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все процедуры и манипуляции животных были одобрены Институциональные уходу и использованию животных комитетов (IACUC) из клиники Кливленда в соответствии с политикой Соединенных Штатов службы общественного здравоохранения на гуманное лечение и использовании животного мира , а также в Руководстве NIH по уходу и Использование лабораторных животных.

1. Подготовка:

  1. Флуоресцентным красителем для нанесения этикеток Тромбоциты
    1. Готовят раствор родамина 6G, 0,5 мг / мл, в физиологическом растворе и стерилизацию раствора с фильтром 0,22 мкм.
  2. FeCl 3 Решение

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Сонная артерия Тромбоз Модель
У мышей с C57BL6 фоне, мы рекомендуем использовать 7,5% FeCl 3 для лечения сосуда в течение 1 мин в качестве отправной точки. Под обработкой 7,5% FeCl 3, границы поврежденной области и нормальной стенки сосуда легко идентифицируются под микроскопом (см онлайн видео 1), предполагая , что эндотелиальные слой был значительно поврежден. Тромбы образуются сразу же после обработки FeCl 3, и .......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

FeCl 3 индуцированную модель является одним из наиболее широко используемых моделей тромбоз, который может не только предоставить ценную информацию о генетических модификаций на функции тромбоцитов и тромбоза 7,8,16,19,31-33, но также может быть ценным инструментом для оценки терапевтических соединений и стратегий для лечения и профилактики заболеваний атеротромботических 11,17,34-37. Здесь мы показали наши изменения и уточнения этой модели и показали дополнительные доказательства полезн.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Эта работа была поддержана Национальным институтом сердца, легких и крови (NHLBI) Национальных институтов здравоохранения под номерами R01 HL121212 (PI: Sen Gupta), R01 HL129179 (PI: Sen Gupta, Co-I: Li) и R01 HL098217 (PI: Nieman). Содержание данной публикации является исключительной ответственностью авторов и не обязательно отражает официальную точку зрения Национальных институтов здравоохранения.

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Хирургические ножницы - карбид вольфрамаFine Science Tools 14502-14Щипцы Micro-Adson для резки и удержания кожи
- зубчатые/прямые/12 смИнструменты для тонкой науки 11018-12and hold skin
Metzenbaum Fino Ножницы - карбид вольфрама/изогнутый/тупой-тупой/14,5 смИнструменты для тонкой науки 14519-14   для рассечения и отделения мягких тканей
Ультратонкий гемостат - гладкий/изогнутый/12,5 смтонкие научные инструменты 13021-12для рассечения и отделения мягких тканей
Щипцы Грефе - зубчатые/прямые/10 смFine Science Tools 11050-10для рассечения и отделения мягких тканей
Тонкие щипцы Dumont #5 - Советы по биологии/Прямой/Inox/11 смИнструменты для тонкой науки 11254-20 Изолировать сосуд от окружающих тканей
Щипцы Dumont #5XL - Стандартные наконечники/Прямые/Inox/15 смИнструменты для тонкой науки 11253-10Изолировать сосуд из окружающей ткани
Тупой крючок - 12 см/0,3 мм Диаметр наконечникаFine Science Tools 10062-12Изолировать сосуд из окружающей ткани
Микроиглодержатели CastroviejoFine Science Tools 12061-02Иглодержатели
шовные нити 4-0Fine Science Tools 18020-40Для фиксации резцов на пластине
Шовная нить 6-0Fine Science Tools 18020-60Для всех операций и лигирования
Калтовые шовные иглыFine Science Tools 12050-03
родамин 6G Sigma83697-1GК тромбоцитам
FeCl3 (безводный)Sigma12321Для индуцирования повреждения сосудов
Папаверина гидрохлоридSigmaP3510Для ингибирования перистальтики кишечника.
Медлайн Хирургический инструмент Стерилизация Паровые автоклавные лентыМедлайн111625Для фиксации мыши к пластине
Fisherbrand™   Фильтры для шприцев - стерильные 0,22 & микро; mFisher09-720-004Для стерилизации растворов, вводимых мышам
Fisherbrand™   Фильтры для шприцев - стерильные 0,45 & микро; mFisher09-719DДля фильтрации раствора FeCl3
Стерильный спирт Prep PadFisher06-669-62Для стерилизации хирургического участка
Agarose BioExpressE-3120-500Для изготовления гелевого столика
флуоресцентный микроскоп Leica DMLFSLeicaIntravital
платформа GIBRALTAR и система X-Y Stage с прилагаемой нагревательной пластиной.npi electronic GmbHhttp://www.npielectronic.de/products/micropositioners/burleigh/gibraltar.html
программное обеспечение Streampix версии 3.17.2NorPixhttps://www.norpix.com/
cut , микроскоп ,

Ссылки

  1. Sachs, U. J., Nieswandt, B. In vivo thrombus formation in murine models. Circ Res. 100, 979-991 (2007).
  2. Libby, P., Lichtman, A. H., Hansson, G. K. Immune effector mechanisms implicated in atherosclerosis: from mice to humans. Immunity. 38, 1092-1104 (2013).
  3. Rugger....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Тромбозиндуцированный хлоридом железа (III)модель сонной артерииintravital микроскопияактивация тромбоцитовформирование тромбаповреждение сосудовантикоагулянтные препаратыантиагрегантымаркировка родамином 6Gантитела к PAR4