Оценка эффективности и токсичности РНК Ориентация ВИЧ-1 Производство для использования в генной или терапии наркотиками

Robert J. Scarborough; Kelsey L. Adams; Olivier Del Corpo; Aïcha Daher; Anne Gatignol

doi:10.3791/54486

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Оценка эффективности и токсичности РНК Ориентация ВИЧ-1 Производство для использования в генной или терапии наркотиками

7.2K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/54486

⸱

5 сентября 2016 г.

Robert J. Scarborough¹^,² , Kelsey L. Adams¹^,² , Olivier Del Corpo¹^,² , Aïcha Daher¹ , Anne Gatignol¹^,²^,³

¹Virus-Cell Interactions Laboratory, Lady Davis Institute for Medical Research, ²Department of Microbiology & Immunology, McGill University, ³Department of Medicine, McGill University

В этой статье

Краткое содержание

Описаны методы оценки эффективности и токсичности молекул РНК, нацеленных на постинтеграционные этапы цикла репликации ВИЧ-1. Эти методы полезны для скрининга новых молекул и оптимизации формата существующих.

Аннотация

Терапия малыми РНК, нацеленная на постинтеграционные этапы цикла репликации ВИЧ-1, является одним из лучших кандидатов на генную терапию и имеет потенциал для использования в качестве лекарственной терапии инфекции ВИЧ-1. К ингибиторам постинтеграции относятся рибозимы, короткие РНК шпильки (sh), малые интерферирующие (si) РНК, интерференционные РНК U1 (U1i) и аптамеры РНК. Многие из них были выявлены с помощью анализов на транзиторную котрансфекцию с экспрессирующей плазмидой ВИЧ-1, а некоторые из них дошли до клинических испытаний. В дополнение к показателям эффективности, малые РНК были оценены на предмет их способности влиять на экспрессию РНК человека, изменять рост и/или дифференцировку клеток, а также вызывать врожденные иммунные реакции. В описанных здесь протоколах описан набор анализов транзиентной трансфекции, предназначенных для оценки эффективности и токсичности молекул РНК, нацеленных на постинтеграционные этапы цикла репликации ВИЧ-1. Мы использовали эти анализы для идентификации новых рибозимов и оптимизации формата шРНК и миРНК, нацеленных на РНК ВИЧ-1. Эти методы обеспечивают быстрый набор анализов, которые полезны для скрининга новых РНК против ВИЧ-1 и могут быть адаптированы для скрининга других постинтеграционных ингибиторов репликации ВИЧ-1.

Введение

Ограничение текущего лечения ВИЧ-1 является то, что они должны быть хронически введены, чтобы предотвратить прогрессирование заболевания. Пересадка ВИЧ-1 , резистентных Т - лимфоцит или гемопоэтических стволовых клеток, имеет потенциал для обеспечения долгосрочного контроля репликации ВИЧ-1 в отсутствие лекарственной терапии ^1,2 , а также может быть эффективным подходом к достижению ВИЧ-1 - лекарство ^3. Один из способов визуализации клеток , устойчивых к репликации ВИЧ-1, чтобы вставить один или несколько генов , кодирующих анти-ВИЧ-1 РНК или пептидов в клетки зараженного человека во время аутогенной трансплантации ^4. Гены Несколько к....