Эта рукопись описывает подробный протокол, чтобы вызвать острый скелетной регенерации мышц у взрослых мышей и последующих манипуляций мышц, таких как рассечение, замораживание, разделка, рутинного окрашивания и мышечное волокно поперечного сечения анализа площади.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Индукция Острый скелетных мышц регенерации путем инъекций Cardiotoxin
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Скелетная регенерации мышц является физиологическим процессом, который происходит у взрослых скелетных мышц в ответ на повреждение или болезнь. Острая травма индуцированных скелетных мышц регенерации является широко используемым, мощная модель системы для изучения событий, участвующих в регенерации мышц, а также механизмов и различных игроков. Действительно, детальное знание этого процесса имеет важное значение для лучшего понимания патологических состояний, которые приводят к скелетной мышечной дегенерацией, и это помогает в определении новых целевых терапевтических стратегий. Настоящая работа описывает подробную и воспроизводимый протокол, чтобы вызвать острый скелетной регенерации мышц у мышей через одну внутримышечной инъекции cardiotoxin (CTX). CTX принадлежит к семейству змеиного яда токсинов и вызывает миолиза из мышечных волокон, которые в конечном итоге вызывает события регенерации. Динамика скелетной мышечной регенерации оценивали с помощью гистологического анализа срезов мышц. Протокол такжеиллюстрирует экспериментальные процедуры вскрытия, замораживания и сокращения мышц передней большеберцовой, а также рутинное окрашивание Hematoxylin и эозином, который широко используется для последующего морфологического и морфометрического анализа.
Введение
Млекопитающим взрослых скелетных мышц образуются группами fascicules многоядерные мышечные клетки (миофибриллы), которые являются специализированными для сокращения. Каждый мышечное волокно представляет собой продолговатый синцитиально, окруженный сарколеммой (плазматической мембраны) и содержащие миофибрилл, которые состоят из регулярно и многократно организованных сократительных белков (актина и миозина). Во взрослой жизни и в состоянии покоя, скелетные мышцы имеют очень низкий оборот их миоядер 1; В самом деле, миоядер, которые расположены на периферии мышечное волокно, под сарколемму, арестовываются в фазе G0 клеточного цикла и не способны пролифериров....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все эксперименты проводились в строгом соответствии с руководящими принципами для институциональных исследований на животных и одобрены Департаментом здравоохранения, охраны здоровья животных, питания и продовольственной безопасности итальянского Министерства здравоохранения в соответствии с законом о экспериментов на животных. Шейки процедуры дислокационные могут варьироваться в зависимости от одного учреждения к другому на основе IACUC или ее эквивалента требований.
1. Cardiotoxin инъекция в мышцы передней большеберцовой
- Подготовьте 10 мкМ рабочий раствор cardiotoxin (CTX) путем разбавления cardiotoxin маточного раствора в стерильном забуференном....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Н & Е окрашивание позволяет для оценки морфологии процесса регенерации в определенные моменты времени в течение скелетной мышечной регенерации. Рисунок 3 показывает анализ течения времени проводили на поврежденных мышц TA мышей дикого типа. Мышцы были изолированы на 3, 7, 15, и через 30 дней после инъекции CTX, а схематизирована на фигуре 3А. Типичные фотографии H & E-окрашенных поперечных срезов показывают динамику скелетных восстановления мышц .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Здесь мы опишем протокол , чтобы вызвать острое поражение в скелетных мышцах (например, внутримышечной инъекции CTX). Он широко используется в качестве мощного инструмента для изучения динамики скелетной мышечной регенерации в естественных условиях. СТХ инъекция индуцирует дегенерацию мышечных волокон, что вызвано деполяризацию сарколеммы и сжатие волокон 12, и запускает каскад событий , что приводит к мышечной регенерации. Скелетные мышцы рассекают в желаемых временных точках после инъекции.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторам нечего раскрывать.
Благодарности
Мы благодарим Animal House и интегрированные микроскопические установки IGB-CNR. Эта работа финансировалась за счет финансирования исследований в рамках Седьмой рамочной программы Европейского Сообщества в рамках проекта ENDOSTEM (Активация сосудистых ассоциированных стволовых клеток и мышечных стволовых клеток для восстановления и поддержания мышечной ткани, грантовое соглашение No 241440), Министерства образования-университетских исследований Италии (MIUR-PRIN2 010-2011) для G.M. и S.B. и PON Cluster IRMI для G.M., и фонд CARIPLO для G.M. и S.B.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Кардиотоксин из Naja mossambica mossambicaSIGMA | ALDRICH | C9759 | |
| Шприц для инсулина BD Micro-Fine+ игла 30 г x 8 мм - Da 0,3 мл | BD | 324826 | |
| трагакантной камеди | MP BIOMEDICALS,LLC | ||
| 2-метилбутана (изопентан) | SIGMA ALDRICH | 78-78-4. | |
| OCT Killik Solution For Inclusion Cryostat | Bio-optica | 05-9801 | |
| Лезвие для микротома Feather S35 | Bio-optica | 01-S35 | |
| Предметная горка Superfrost Plus | Menzel-Glä ser | 09-OPLUS | |
| Dumon #5 Щипцы с зеркальным покрытием | 2БИОЛОГИЧЕСКИЕ ИНСТРУМЕНТЫ | 11251-23 | |
| Ножницы прямые острые/острые | 2БИОЛОГИЧЕСКИЕ ИНСТРУМЕНТЫ | 15024-10 | |
| Ножницы Noyes прямые | 2БИОЛОГИЧЕСКИЕ ИНСТРУМЕНТЫ | 15012-12 | |
| Ножницы тонкой радужной оболочки глаза прямые острые/острые 10,5 см | 2БИОЛОГИЧЕСКИЕ ИНСТРУМЕНТЫ | 14094-11 | |
| Eukitt | Bio-optica | 09-00100 | |
| Защитное стекло | BIOSIGMA | VBS651 | |
| Ксилол | SIGMA ALDRICH | 214736 | |
| Этанол 100% | sigma-Aldrich | 02860-2,5L | |
| Гематоксилин | J.T. BAKER | 3873 | |
| Эозин | SIGMA ALDRICH | HT110116 | |
| Cryostat | LEICA | CM3050 S |
Ссылки
- Morgan, J. E., Partridge, T. A. Muscle satellite cells. Int J Biochem Cell Biol. 35 (8), 1151-1156 (2003).
- Roca, I., Requena, J., Edel, M. J., Alvarez-Palomo, A. B. Myogenic Precursors from iPS Cells for Skeletal Muscle Cell Replacement Therapy. J Clin Med. 4 (2), 243-259 (201....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Теги
