Мы покажем, как подготовить косые срезы спинного мозга у молодых мышей. Этот препарат позволяет для стимуляции брюшных корней.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Получение Косой спинного мозга Ломтики для вентральных корешков стимуляции
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Электрофизиологические записи из спинного мозга срезов оказались ценным техникой, чтобы исследовать широкий круг вопросов, от сотовой сети к свойствам. Мы покажем, как подготовить жизнеспособные косые срезы спинного мозга молодых мышей (P2 - P11). В этом препарате, мотонейронов сохраняют свои аксоны выходят из вентральных корешков спинного мозга. Стимуляция этих аксонов вызывает обратно распространяющихся потенциалов действия агрессора мотонейроного Somas и захватывающие мотонейроного коллатерали в спинном мозге. Возможность записи Антидромные потенциалов действия является непосредственным, окончательным и элегантный способ охарактеризовать личность мотонейроном, которая превосходит другие методы идентификации. Кроме того, стимулируя мотонейроного коллатерали является простым и надежным способом для возбуждения залога целей мотонейронов в спинном мозге, такие как другие мотонейронов или Renshaw клетки. В этом протоколе, мы представляем антидромным записи с мотонейроного СОСМ, а также клеточного возбуждения Реншоу, в результате чего из вентральных корешков стимуляции.
Введение
Исторически сложилось так , мотонейронов записи с помощью острых электрода сравнения были проведены в естественных условиях на крупных животных , таких как кошки или крысы 1 или на изолированном всего спинного мозга у мышей 2. Появление метода записи патч-зажим в течение 1980-х годов, называемый прямой доступ к мотонейроном СОСМ в качестве герметизирующего необходимо достичь под визуальным руководством. Таким образом, спинной мозг препарат срез был легко достигнут с начала 1990 - х годов 3. Тем не менее, в начале подготовки срез часто не позволяли для стимуляции брюшных корней. Насколько нам известно, только два исследования ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Эксперименты проводились в соответствии с европейскими директивами (86/609 / CEE и 2010-63-UE) и французского законодательства, и были одобрены комитетом по этике университета Париж Декарт.
1. спинного мозга Кусочек Приготовление
- Подготовьте следующие решения ежедневно или за один день. Если выдерживают в течение ночи, пузырь с 95% O 2 и 5% СО 2 и хранить в холодильнике в плотно закрытой посуде.
- Приготовьте низкий Na + искусственную спинномозговую жидкость (ACSF): 3 мМ KCl, 1 мМ NaH 2 PO 4, 230 мМ сахарозы, 26 мМ NaHCO 3, 0,8 мМ CaCl
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Подтверждение идентичности мотонейроном Использование Потенциалы Антидромная действий
Cell нацеливание
Мотонейроны находятся в вентральном роге (видимый в красном цвете на рисунке 2в). Начните с пачкой аксонов, образующих вентральной корень и идти вверх до тех пор, пока пучок полностью рассеивает и один начинает видет.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Косая нарезка спинного мозга имеет важное значение, поскольку она позволяет односторонней стимуляции мотонейронов бассейнов и клеток Реншоу в одном позвоночном сегменте в надежной, всеобъемлющей и определенным образом. Кроме того, она позволяет быстро, элегантной и не двусмысленной идентификации зарегистрированных мотонейронов. Далее, мы будем выделить преимущества этого метода по сравнению с другими способами получения среза, а затем мы подчеркиваем из наиболее распространенных ошибок, которых следует избегать при выпо.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторам нечего раскрывать.
Благодарности
Авторы благодарят Marin Мануэля и Оливия Гольдмана-Szwajkajzer за помощь в принятии фотографии. Авторы также благодарят Arjun Masukar и Tobias Бок за вычитку рукописи. Финансовые опоры были предоставлены Agence Nationale Recherche пур ля (Гипер-БДН, ANR-2010-Blan-1429-01), НИЗ-NINDS (R01NS077863), то Тьерри Latran Foundation (OHEX проекта), французская ассоциация миопатия ( грант номер 16026) и Target ALS Бидани. Феликс Лерой был получателем "Contrat докторских" из Ecole Normale Supérieure, Качан.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Na-kynurenate | ABCAM | ab120256 | растворяется лучше, чем другие бренды |
| KCl | Sigma | P3911 | |
| 2PO4 | Sigma | P5655 | |
| sucrose | Sigma | S9378 | |
| NaHCO3 | Sigma | S6014 | |
| CaCl2 | G Biosciences | R040 | |
| MgCl2 | Качество биологическое | 351-033-721 | |
| глюкоза | Sigma | G5767 | |
| аскорбиновая кислота | Sigma | A5960 | |
| Na-pyruvate | Sigma | P2250 | |
| К-глюконат | Sigma | P1847 | |
| EGTA | Sigma | E3889 | |
| HEPES | Sigma | H4034 | |
| NaCl | Sigma | S9888 | |
| Агар | Sigma | A9799 | |
| QX-314 | Аломон | Q150 | |
| Mg-ATP | Sigma | A9187 | |
| CsOH | Sigma | 232041 | |
| Na-GTP | Sigma | 51120 | |
| глюконовая кислота | Sigma | G1951 | |
| Раствор гидроксида цезия | Sigma | 232041 | |
| KOH | Sigma | P5958 | |
| Весенние ножницы Vannas - 2,5 мм | FST | 15000-08 | использовать только для разрезания твердой мозговой оболочки, может быть поврежден при разрезании костей |
| Стимулятор | A-M Systems | Изолированный импульсный стимулятор Модель 2100 | |
| Вибратом | Campden | Вибрационный микротом 7000 - Модель 7000smz-2 |
Ссылки
- Brooks, C. M., Downman, C. B., Eccles, J. C. After-potentials and excitability of spinal motoneurones following antidromic activation. J Neurophysiol. 13 (1), 9-38 (1950).
- Bories, C., Amendola, J., Lamotte d'Incamps, B., Durand, J.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
