Method Article

Визуализация и Количественное бесклеточной слоя в артериол мышцы крысы Кремастер

DOI:

10.3791/54550

⸱

October 19th, 2016

 ,  ,  ,  , 
1NUS Graduate School for Integrative Sciences and Engineering, National University of Singapore, 2Department of Biomedical Engineering, National University of Singapore, 3Department of Surgery, National University of Singapore

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Это исследование демонстрирует хирургическую подготовку кремастерной мышцы крысы для визуализации бесклеточного слоя in vivo. В данном исследовании обсуждаются существенные факторы, влияющие на точность измерения ширины бесклеточного слоя.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Бесклеточный слой определяется как париетальный слой плазмы в потоке микрососудов, который лишен эритроцитов. Измерение ширины бесклеточного слоя in vivo и его пространственно-временных вариаций может обеспечить всестороннее понимание гемодинамики в микроциркуляции. В этом исследовании мы использовали прижизненную микроскопическую систему в сочетании с высокоскоростной видеокамерой для количественной оценки ширины бесклеточного слоя в артериолах in vivo. Кремастерная мышца крыс Спрэг-Доули была хирургически экстериоризирована для визуализации кровотока. Также был разработан специально созданный скрипт визуализации для автоматизации обработки изображений и анализа ширины слоя без клеток. Такой подход позволяет более последовательно количественно оценивать пространственно-временные вариации по сравнению с предыдущими ручными измерениями. Точность измерения, однако, отчасти зависит от использования синего фильтра и выбора соответствующего алгоритма порогового значения. В частности, мы оценивали контрастность и качество изображений, полученных с использованием синего фильтра и без него. Кроме того, мы сравнили пять различных алгоритмов порогового значения на основе гистограммы изображения (Оцу, минимум, межмодовый, итеративный выбор и нечеткий энтропийный порог) и проиллюстрировали различия в определении ширины слоя без клеток.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Исследования на животных in vivo играют важную роль в фундаментальной науке для понимания физиологии и патологии человека. В частности, микрогемодинамические исследования in vivo могут пролить свет на потенциальное нарушение микроциркуляторных функций, измененных аномальными реологическими условиями крови. В ряде предыдущих исследований микрогемодинамики1 использовалась модель кремастерной мышцы крысы для визуализации микрососудистого кровотока. Кремастерная мышца представляет собой тонкий слой поперечно-полосатой мышцы, окружающий яички. Таким образом, кровоток в мышце можно визуализировать с помощью трансиллюминационного микроскопа с помощью хирургического воздействия. Это позволяет нам получать изображения кровотока in vivo без использования каких-либо флуоресцентных или контрастных веществ. Кроме того, можно контролировать всю перфузию мышечной сети путем уменьшения восходящего кровотока при окклюзии брюшной аорты2. Благодаря этим преимуществам модель кремастерной мышцы получила широкое применение для исследования формирования бесклеточного слоя (КЛЛ) в микрососудах1,3.

Ширина КЛЛ является важным гемодинамическим параметром в микроциркуляции, который представляет большой интерес из-за его важной роли в регулировании функций микроциркуляции. КЛЛ образуется в результате вызванной сдвигом поперечной миграции эритроцитов (эритроцитов) внутрь к центру потока4. Следовательно, эта миграция приводит к истощению эритроцитов вблизи стенок сосудов, что в конечном итоге приводит к образованию бесклеточного плазменного слоя. Соответственно, теменная КЛЛ естественным образом становится диффузионным барьером для доставки кислорода (O2) из ядра эритроцитов к тканям, а также для поглощения оксида азота (NO) эритроцитами5,6. Кроме того, производство оксида азота также может быть модулировано динамическими вариациями ширины компактной люминесцентной люминесцентной люминесцентии7,8. Таким образом, роль КЛЛ как в транспорте газов, так и в регуляции гомеостаза в микроциркуляции должна быть полностью выяснена, чтобы лучше понять кровоток в микроциркуляции. Последние исследования были сосредоточены на связывании гемодинамики и газотранспортных функций КЛЛ в микроциркуляции9-12. Кроме того, в отдельной серии исследований изучалось, как патологическое повышение агрегации эритроцитов модулирует образование ЦМЛ и его влияние на биодоступностьO2 и NO в тканях13,14.

Роль КЛЛ становится более значимой в микроциркуляции, где относительный размер ширины КЛЛ к диаметру сосуда является заметным. Это обуславливает необходимость эффективного подхода к количественной оценке КЛЛ в кровотоке in vivo. В частности, получение изображений и их анализ являются двумя ключевыми компонентами, определяющими точность измерения ширины компактной люминесцентной лампы. Успешной визуализации тканевого кровотока должна предшествовать соответствующая хирургическая подготовка животной модели. Кроме того, необходим надлежащий метод анализа изображений, чтобы преодолеть ограничения обычных ручных измерений, которые в основном вызваны человеческими ошибками15,16. Благодаря достижениям в области оптических приборов и вычислительных мощностей для цифровой обработки изображений теперь стало возможным добиться более точного и стабильного измерения ширины компактной люминесцентной люминесцентии17-19. Тем не менее, точность этих измерений, основанных на изображениях, по-прежнему в конечном итоге зависит от качества изображений.

Следовательно, в этом исследовании исследуются факторы, влияющие на измерение ширины компактной люминесцентной лампы in vivo. Особое внимание мы уделили демонстрации хирургической подготовки и анализа цифровых изображений для измерения ширины КЛЛ в артериолах кремастерной мышцы крысы.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Это исследование в соответствии с Национальным университетом Сингапура Институциональные уходу и использованию животных комитета (утвержденным протоколом нет. R15-0225).

1. Хирургическая Подготовка модели животных

  1. судно cannulations
    1. Обезболить мужского пола крыс Sprague-Dawley (6 - 7 недель) весом (203 ± 20) г с кетамина (37,5 мг / мл) и ксилазина (5 мг / мл) коктейля через внутрибрюшинного (ф) инъекции (2 мл / кг) , Не используйте иглу или удалить его из шприца после инъекции.
    2. После того, как животное было под наркозом (подтверждается пят щипать), поместите его на грелку, чтобы поддерживать температуру тела при температуре 37 ° С. Осторожно брить волосы на лопатками, передняя шейке, нижней части живота, медиальная задней ноги и мошонку. Аккуратно сдерживаться ноги с помощью клейкой ленты бумаги.
    3. Выполнение всех хирургических процедур с использованием микродиссекции ножницы и пинцет под углом при просмотре черезВысококласнный стереоскопический. Поместите все острые хирургические инструменты на устойчивых к проколу лотка для предотвращения травм во время операции.
    4. Скраб все хирургические участки 3 раза с чередованием йода и 70% спирта перед выполнением надрез. Сбрасывают все катетеры с 30 МЕ / мл гепарин-физиологический раствор.
    5. Сделать 1 - 1,5 см разрез по средней линии кожи на лопатками с использованием пары хирургических ножниц над правой яремной вены. Разделить лицевой панели тупым, чтобы выставить яремную вену и иглу она с полиэтиленовой трубки (PE-50), заполненную гепарин-физиологический раствор с использованием 5-0 шелковыми швами. Настаивать дополнительной анестезии при необходимости (от 1/3 до 1/2 от первоначальной дозы, внутривенное (IV)) в течение всего курса хирургии и эксперимента.
    6. Выполните трахеотомию для поддержания проходимости дыхательных путей. Сделать 1 - см разрез 1,5 в передней шейной области. Трахею иглу с помощью полиэтиленовой трубки (PE-205) с 2-0 шелковыми швами, чтобы закрепить катетер на месте.
    7. Монитор артериального давлениячерез канюлю в бедренной артерии. Сделать 1 - см разрез 1.5 на левой медиальной поверхности задней ноги. Отделить бедренной артерии тупым. Вводить иглу в бедренную артерию с полиэтиленовой трубы (ПЭ-10), заполненную гепарин-физиологический раствор, используя 5-0 шелковыми швами.
  2. Кремастер Мышцы Подготовка и Flow Visualization
    1. Вставьте 5-0 шелковой нитью через вершину мошонку, чтобы продлить его. Сделайте надрез вдоль вентральной поверхности мошонку. Регулярно применять теплый изотонический раствор (37 ° С, рН 7,4), к открытой мышцы.
    2. Удалить окружающих соединительные ткани тщательно и тщательно с использованием ватным аппликатором.
    3. Вставьте 5-0 шелковой нити через вершину кремастер мышцы. Вырезать шов на две части равной длины и завяжите узел на каждой стороне. Разрежьте мышцу между двумя узлами и растянуть его на индивидуальные прозрачные плексигласа платформы, осторожно потянув за нить. исправлятьконец шовного материала на платформу с синим клейкости.
      Примечание: Тщательное удаление окружающих соединительных тканей имеет решающее значение для получения оптимального контраста изображения.
    4. Повторите шаг 1.2.3 до 5 до 6 фиксаций не сделаны. Осторожно удалите кремастер мышцы от придатка с использованием высоких температур прижигания. Переливать теплого изотонического раствора к открытой мышцы, чтобы предотвратить обезвоживание ткани.
      1. Окружите кремастер мышцы со сложенными кусками марли. Накройте подвергаются мышцы с поливинилового пленкой. Марлю кусочки с пленкой образуют неглубокий резервуар для хранения теплый изотонический раствор для объектива водно-иммерсионного (рис 1А).
    5. Передача животных на сцену животном с прижизненной микроскопом (рис 1C). Подключите артериальную катетеризацию к физиологической системы сбора данных для непрерывного мониторинга давления (рис 1E).
    6. Поддержание мышечной TEMPERATЮр при температуре 35 ° C с нагревательного элемента , соединенного под животной платформы (Фиг.1В). Поместите датчик температуры рядом с мышцей , чтобы обеспечить отрицательную обратную связь с регулятором мощности нагревательного элемента (рис 1D).
    7. Оставьте животное на сцене в течение 15 мин для уравновешивания с окружающей средой.
    8. Визуализируйте поток крови под микроскопом прижизненной с целью погружения в воде 40х и долгого рабочего конденсатора.
    9. Выберите неразветвленную артериолу (<60 мкм) на основе четкого фокуса изображения и контраст между ядром RBC, CFL и стенках сосудов, для того, чтобы сфокусировать микроскоп на диаметральной плоскости кровеносного сосуда. Поворачиваем камеру, установленную на микроскоп, чтобы выровнять стенки сосуда по вертикали.
    10. Записывают поток крови с помощью камеры высокоскоростного видео с частотой кадров 3000 / с в течение 1 сек. Сохранение записанного видео в несжатом 8-битный формат AVI в оттенках серого, чтобы сохранить качество изображения.
      ЗАМЕТКА: Минимальная частота кадров записи 3000 кадров / сек рекомендуется убедиться, что измерение CFL может быть выполнена по меньшей мере, один раз в РБК в физиологических условиях артериол потока.
    11. Используйте синий фильтр с пика пропускания при длине волны 394 нм и спектральной полосой пропускания при 310 - 510 нм, чтобы увеличить контраст между эритроцитами и плазмой.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Убедитесь в том, что спектр света, проходящий через синий фильтр из микроскопической источника света (100 Вт галогенной лампы) является низкой интенсивности света, чтобы предотвратить любое возможное повреждение тканей.
    12. В конце эксперимента, усыпить животное с передозировкой пентобарбитала натрия.

Анализ 2. Изображение

  1. Предварительная обработка для измерения ширины CFL
    1. Откройте MATLAB и запустите файл 'CFL_pre.m'. (Это и другие файлы MATLAB можно найти вф "> Справочная MATLAB архив.)
    2. Нажмите на кнопку "Открыть файл", чтобы выбрать видеофайл для анализа.
    3. Отрегулируйте ползунок в 'вращения' для выравнивания стенок сосудов в вертикальном положении.
      Примечание: Пользователи могут отображать оказывающее помощь линии сетки для выравнивания судна, выбрав переключатель "сетки на", а также настроить уровень масштабирования изображения, перемещая ползунок "ZOOM".
    4. Нажмите кнопку "Подтвердить Редактирование", чтобы подтвердить выравнивание судна.
    5. Нажмите кнопку "Установить ROI для урожая", чтобы определить область интереса (ROI). Выровнен изображение будет отображаться в всплывающем окне. Отрегулируйте прямоугольную цель на изображении, а затем дважды щелкните, чтобы подтвердить ROI. Пропустить этот шаг, если обрезка изображения не требуется.
      Примечание: включают в себя только один сосуд, в ROI для анализа ширины CFL от судна. Нажмите кнопку "Сброс" изображения, чтобы восстановить изображение к своей первоначальной форме, если это необходимо.
    6. Нажмите9; Extract "кнопку, чтобы извлечь все отредактированные видеокадры в последовательных изображений битовой карты (оттенки серого 8-бит 'изображения в формате BMP'). Извлеченные изображения можно найти в папке с тем же именем, выбранного видеофайла.
  2. Измерение ширины CFL
    1. Откройте MATLAB и запустите файл 'CFL_measure.m'.
    2. Нажмите на кнопку "Выбрать папку", чтобы выбрать папку, содержащую извлеченные изображения.
    3. Нажмите на папку, содержащую изображения и нажмите кнопку "Выбрать папку". Первый кадр изображения в папке будут загружены и показаны в «черно-белое изображение" панели, наряду с серой интенсивности гистограммы в панели '' гистограмму изображения.
    4. Выберите нужный кадр изображения из списка для выполнения анализа, в противном случае первый кадр изображения будет выбран.
    5. Нажмите кнопку "Найти стенки сосудов ', чтобы определить внутреннюю стенку сосуда в изображении, которое определяется в том месте, гдесвет профиль интенсивности пика переходит от темноты к свету более двух пикселей.
    6. Проверить "медианный фильтр", чтобы применить медианный фильтр к изображению, чтобы уменьшить "соль и перец" шум.
    7. Проверьте "АВТОКОНТРАСТ" для регулировки интенсивности изображения в цифровом виде для повышения контрастности изображения.
    8. Выберите алгоритм пороговой в окне списка, который автоматически определяет значение порога (т), которая делит уровни серого на два класса - белых пикселей с уровнями серого выше т (КЛЛ) и черных пикселей с уровнями серого ниже т (РБК основных).
      Примечание: В качестве альтернативного метода можно использовать ручной пороговую, если ни один из алгоритмов автоматизирован-не обеспечивает выбора порога выбор подходящего пороговую изображения. Нажмите на кнопку "Manual" радио и отрегулируйте ползунок, чтобы определить вручную значение пороговой.
    9. Для измерения пространственного изменения ширины CFL, введите разрешение пикселей в поле "разрешение пиксела" (разрешениес этой экспериментальной установки составляла 0,42 мкм / пиксель).
    10. Нажмите кнопку "Рассчитать", чтобы получить пространственное изменение ширины CFL. Нажмите кнопку "Экспорт" .csv для экспорта данных ширины CFL в табличном формате.
    11. Для измерения временного изменения ширины CFL в определенном анализе линии вдоль судна, нажмите на переключатель "временные вариации" и введите информацию о частоте кадров (частоту кадров, используемую в этой экспериментальной установки было 3000 кадров / сек).
    12. Введите первый кадр и последний кадр изображения для анализа в 'Start Frame' и 'коробки Последний кадр', соответственно.
    13. Выберите позицию анализа линии вдоль судна, сдвинув бегунок в «Анализе линии». Подтвердите положение линии анализа, который показан как на "черно-белое изображение" и "бинарное изображение".
    14. Нажмите на кнопку "Рассчитать", чтобы получить временную изменение ширины CFL. Cliск 'Экспорт CSV для экспорта данных ширины CFL в табличном формате.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Визуализация CFL в естественных условиях во многом зависит от хирургических препаратов животного. Чрезмерная потеря крови или продолжительности операции могут подвергнуть животное к ударам и аберраций кровотока. Поддержание температуры тканей с использованием грелку, а также настроенную платформу во время хирургического вмешательства и эксперимента также имеет решающее значение для поддержания физиологического состояния крыс. С помощью 100 Вт галогеновую лампу в системе микроскопа, не наблюдалось никаких повреж...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Измерение ширины CFL имеет важное значение для лучшего понимания гемодинамики в микроциркуляции. В частности, измерение ширины CFL было выполнены в брыжеечных 6, spinotrapezius 24 и церебральных 25 микроциркуляций. Традиционное измерение в естественных условиях ширины CFL была ограничена по оценкам ручной проверки записанных видеокадров. В ручных измерений требуется усреднение нескольких последовательных видеокадров , прежде чем визуально идентифицировать границы ядра и стенках ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих финансовых интересов.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была поддержана Национальным советом по медицинским исследованиям (NMRC)/Cooperative Basic Research Grant (CBRG)/0078/2014.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Прижизненный микроскопOlympusBX51WIОборудование
Высокоскоростная камераPhotron1024PCIОборудование
Синий фильтрHOYAB390Оборудование
Датчик давления и биопак системаBiopac система TSD104A, MP100Оборудование
Регулятор температурыShimadenSR 1Оборудование
Плазменный лит ABaxterNDC:0338-0221Теплый в 37 градусов; C водяная баня перед применением
физиологического раствора 0,9%Braun
Heparin (5,000 МЕ/мл)LEO
PE-10 полиэтиленовая трубкаBecton Dickinson427400.024" OD x .011" ID 
PE-50 полиэтиленовая трубкаBecton Dickinson427411.038" OD x .023" ID
PE-205 полиэтиленовая трубкаBecton Dickinson427446.082" OD x .062" ID
2-0 нерассасывающаяся шелковая шовная тканьDeknatel113-S
5-0 нерассасывающаяся шелковая шовная нитьDeknatel106-S
Водоциркуляционная грелкаGaymar
Водяная баняFisher ScientificIsotemp 205оборудование
стерильная ватная марля Fisher Scientific22-415-468
Аппликаторы с ватным наконечникомFisher Scientific23-400-124
Щипцы DumontKent ScientificINS14188Хирургический инструмент
Микродиссекционные щипцыKent ScientificINS15915Хирургический инструмент
Щипцы для радужной оболочки глаза 1 x 2 зубаKent ScientificINS15917Surgical инструмент
Щипцы для канюляции сосудовKent ScientificINS500377Хирургический инструмент
МикроножницыKent ScientificINS14177Хирургический инструмент
Ножницы для радужной оболочкиглаза Kent ScientificINS14225Хирургический инструмент
Зажим для сосудовKent ScientificINS14120Хирургический инструмент
Система прижигания GeminiBraintree ScientificGEM 5917Хирургический инструмент

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kim, S., Kong, R. L., Popel, A. S., Intaglietta, M., Johnson, P. C. Temporal and spatial variations of cell-free layer width in arterioles. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 293 (3), H1526-H1535 (2007).
  2. Ong, P. K., Namgung, B., Johnson, P. C., Kim, S. Effect of erythrocyte aggregation and flow rate on cell-free layer formation in arterioles. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 298 (6), H1870-H1878 (2010).
  3. Namgung, B., Kim, S. Effect of uneven red cell influx on formation of cell-free layer in small venules. Microvasc Res. 92, 19-24 (2014).
  4. Goldsmith, H. L. The Microcirculatory Society. Eugene M. Landis Award Lecture. The Microrheology of Human-Blood. Microvasc Res. 31 (2), 121-142 (1986).
  5. Buerk, D. G. Can We Model Nitric Oxide Biotransport? A Survey of Mathematical Models for a Simple Diatomic Molecule with Surprisingly Complex Biological Activities. Annu Rev Biomed Eng. 3 (1), 109-143 (2001).
  6. Tateishi, N., Suzuki, Y., Soutani, M., Maeda, N. Flow dynamics of erythrocytes in microvessels of isolated rabbit mesentery: cell-free layer and flow resistance. J Biomech. 27 (9), 1119-1125 (1994).
  7. Ong, P. K., Cho, S., Namgung, B., Kim, S. Effects of cell-free layer formation on NO/O2 bioavailability in small arterioles. Microvasc Res. 83 (2), 168-177 (2012).
  8. Ong, P. K., Jain, S., Kim, S. Modulation of NO bioavailability by temporal variation of the cell-free layer width in small arterioles. Ann Biomed Eng. 39 (3), 1012-1023 (2011).
  9. Park, S. W., Intaglietta, M., Tartakovsky, D. M. Impact of stochastic fluctuations in the cell free layer on nitric oxide bioavailability. Front Comput Neurosci. 9, 131(2015).
  10. Ng, Y. C., Namgung, B., Kim, S. Two-dimensional transient model for prediction of arteriolar NO/O2 modulation by spatiotemporal variations in cell-free layer width. Microvasc Res. 97, 88-97 (2015).
  11. Sriram, K., et al. The effect of small changes in hematocrit on nitric oxide transport in arterioles. Antioxid Redox Sign. 14 (2), 175-185 (2011).
  12. Hightower, C. M., et al. Integration of cardiovascular regulation by the blood/endothelium cell-free layer. Wiley Interdiscip Rev Syst Biol Med. 3 (4), 458-470 (2011).
  13. Ng, Y. C., Namgung, B., Leo, H. L., Kim, S. Erythrocyte aggregation may promote uneven spatial distribution of NO/O in the downstream vessel of arteriolar bifurcations. J Biomech. , (2015).
  14. Ong, P. K., Jain, S., Kim, S. Temporal variations of the cell-free layer width may enhance NO bioavailability in small arterioles: Effects of erythrocyte aggregation. Microvasc Res. 81 (3), 303-312 (2011).
  15. Maeda, N. Erythrocyte rheology in microcirculation. Jpn J Physiol. 46 (1), Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8743714 1-14 (1996).
  16. Soutani, M., Suzuki, Y., Tateishi, N., Maeda, N. Quantitative Evaluation of Flow Dynamics of Erythrocytes in Microvessels - Influence of Erythrocyte Aggregation. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 268 (5), Available from: http://ajpheart.physiology.org/content/268/5/H1959 H1959-H1965 (1995).
  17. Kim, S., Kong, R. L., Popel, A. S., Intaglietta, M., Johnson, P. C. A computer-based method for determination of the cell-free layer width in microcirculation. Microcirculation. 13 (3), 199-207 (2006).
  18. Soutani, M., Suzuki, Y., Tateishi, N., Maeda, N. Quantitative Evaluation of Flow Dynamics of Erythrocytes in Microvessels. Influence of Erythrocyte Aggregation. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 268 (5), H1959-H1965 (1995).
  19. Namgung, B., et al. A comparative study of histogram-based thresholding methods for the determination of cell-free layer width in small blood vessels. Physiol Meas. 31 (9), N61-N70 (2010).
  20. Ong, P. K., et al. An automated method for cell-free layer width determination in small arterioles. Physiol Meas. 32 (3), N1-N12 (2011).
  21. Otsu, N. A Threshold Selection Method from Gray-Level Histograms. IEEE Trans. Syst., Man, Cybern. 9 (1), 62-66 (1979).
  22. Prewitt, J. M., Mendelsohn, M. L. The analysis of cell images. Ann N Y Acad Sci. 128 (3), 1035-1053 (1966).
  23. Ridler, T. W., Calvard, S. Picture Thresholding Using an Iterative Selection Method. IEEE Trans. Syst., Man, Cybern. 8 (8), 630-632 (1978).
  24. Shanbhag, A. G. Utilization of Information Measure as a Means of Image Thresholding. Cvgip-Graph Model Im. 56 (5), 414-419 (1994).
  25. Bishop, J. J., Popel, A. S., Intaglietta, M., Johnson, P. C. Effects of erythrocyte aggregation and venous network geometry on red blood cell axial migration. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 281 (2), H939-H950 (2001).
  26. Yamaguchi, S., Yamakawa, T., Niimi, H. Cell-free plasma layer in cerebral microvessels. Biorheology. 29 (2-3), 251-260 (1992).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cell free LayerArteriolesRat Cremaster MuscleIntravital MicroscopyHigh speed Video CameraImage ThresholdingBlue FilterTemporal VariationSpatial VariationMedian Filter

Related Articles