Методическая статья

Флуоресценция активированных сортировки клеток для очистки плазмоцитов дендритных клеток из костного мозга мыши

DOI:

10.3791/54641

⸱

4 ноября 2016 г.

 ,  , 
1Department of Biomedical Sciences and Pathobiology, Virginia-Maryland College of Veterinary Medicine, Virginia Polytechnic Institute and State University, 2Flow Cytometry Laboratory, Virginia-Maryland College of Veterinary Medicine, Virginia Polytechnic Institute and State University

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы сообщаем протокол с помощью флуоресцентной-Активированный сортировки клеток, чтобы изолировать плазмоцитов дендритные клетки (PDC) с высокой степенью чистоты из костного мозга волчаночного склонной мышей для функциональных исследований Pdc.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Флуоресцентно-активируемая сортировка клеток (FACS) — это метод очистки определенных клеточных популяций на основе фенотипов, обнаруженных с помощью проточной цитометрии. Этот метод позволяет исследователям лучше понять характеристики популяции отдельных клеток без влияния других клеток. По сравнению с другими методами обогащения клеток, такими как магнитно-активируемая сортировка клеток (MCS), FACS является более гибким и точным для разделения клеток благодаря возможности определения фенотипа с помощью проточной цитометрии. Кроме того, FACS обычно способен разделять несколько клеточных популяций одновременно, что повышает эффективность и разнообразие экспериментов. Несмотря на то, что FACS имеет некоторые ограничения, он широко используется для очистки клеток для функциональных исследований как in vitro, так и in vivo. В данной статье мы сообщаем о протоколе с использованием сортировки клеток, активируемых флуоресценцией, для выделения очень редкой популяции иммунных клеток, плазмоцитоидных дендритных клеток (pDC), с высокой чистотой из костного мозга мышей, склонных к волчанке, для функциональных исследований pDC in vitro.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эффективное отделение выбранной популяции клеток от других клеток позволяет изучать популяцию, что в противном случае было бы невозможно. Флуоресцентно-активируемая сортировка клеток (FACS) — это метод обогащения интересной клеточной популяции высокой чистотой. 1,2 Различные типы клеток обычно экспрессируют уникальные молекулы или уникальную комбинацию нескольких молекул на плазматической мембране, которые могут отличать одну популяцию клеток от другой. После связывания этих молекул клеточной поверхности специфическими флуоресцентно-конъюгированными антителами, детектирующая машина, называемая проточным цитометром/сортировщиком, способна возбуждать и обнаруживать световые сигналы различных флуоресцентных красителей, которые представляют собой различные молекулярные маркеры на клетках на уровне одной клетки. Совокупная информация, состоящая либо из наличия светового сигнала (представляющего собой положительную экспрессию соответствующей поверхностной молекулы), либо из отсутствия светового сигнала (представляющего собой негативную экспрессию молекулы), определяет фенотип клетки. После прохождения через детектор клетки с одинаковым фенотипом направляются в сторону специальной собирательной трубки на основе электрического заряда.

FACS широко применяется в различных исследованиях, при условии, что популяция, которую нужно обогащать, помечена флуоресценцией. 3-7 Он был использован для отделения бактерий, покрытых иммуноглобулином (Ig)А, от бактерий, не покрытых IgA, в микробиоте кишечника8 и сортировки генетически модифицированных клеточных популяций, экспрессирующих флуоресцентные белки. 9 Важно отметить, что он обладает способностью разделять более одной популяции одновременно, что не только экономит время и реагенты, но и позволяет проводить более сложные исследования. 10 Однако у СУИМ есть и свои ограничения. Если интересующая популяция очень редка (менее 1%), эффективность сортировки может быть снижена, что приведет к значительным потерям клеток. Кроме того, связывание некоторых антител может активировать внутриклеточную передачу сигнала, которая вызывает функциональные изменения отсортированной клеточной популяции. 11 Поэтому фенотип, используемый для сортировки, должен быть тщательно выбран.

Существуют и другие методы, помимо FACS, которые также основаны на маркерах клеточной поверхности для обогащения конкретных клеточных популяций, таких как магнитно-активируемая сортировка клеток (MCS). 12 Подобно FACS, антитела, конъюгированные с магнитными шариками, могут нацеливаться на определенные молекулы клеточной поверхности. При взаимодействии антител с антигеном клетки, покрытые магнитными шариками, могут быть отделены от клеток без оболочки после прохождения через магнитное поле. Тем не менее, только ограниченное количество молекул может быть нацелено в MCS, так как магнитные шарики, в отличие от различных флуоресцентных цветов в FACS, неразличимы. Таким образом, для MCS трудно определить фенотип клетки с помощью сложной комбинации поверхностных маркеров. 13,14 Кроме того, MCS также способен вызывать непреднамеренную активацию клеток-мишеней.

В наших исследованиях мышиной модели системной красной волчанки (СКВ) 15 мы намеревались очистить плазмоцитоидные дендритные клетки (pDC), чтобы изучить их функциональные изменения с прогрессированием заболевания. Впервые мы использовали MCS для обогащения pDC из костного мозга путем нацеливания на PDCA-1, молекулу, которая высоко и уникально экспрессируется на мышином pDC в равновесном состоянии. 16 Тем не менее, чистота клеток оказалась неожиданно низкой, вероятно, из-за повышения регуляции PDCA-1 на других клеточных популяциях в воспалительной среде, такой как СКВ. 16 В конечном счете, мы использовали FACS с комбинацией четырех поверхностных маркеров (CD11c, CD11b, B220 и PDCA-1) для выделения pDC высокой чистоты как популяции CD11c+CD11b-B220+PDCA-1+. У мышиного pDC есть еще один специфический поверхностный маркер Siglec-H. Мы решили не использовать Siglec-H, так как связывание антител этой молекулы подавляет функцию pDC для производства IFNα. 11

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Примечание: MRL / Мр-Fas LPR (MRL / LPR) волчанка склонной мышей разводили и поддерживали в определенном патогена объекта следующим требованиям институциональной уходу и использованию животных комитета (IACUC) под номером Virginia Tech (обеспечение защиты животных: A3208-01). Это исследование было проведено в строгом соответствии с рекомендациями, приведенными в Руководстве по уходу и использованию лабораторных животных Национальных институтов здравоохранения. Все эксперименты на животных были проведены в соответствии с протоколом IACUC # 12-062.

1. среда для культивирования клеток и сортировка буфера

  1. Подготовить всю среду для культивирования клеток (С10) с использованием среды RPMI 1640 с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки, 1 мМ пирувата натрия, 1% 100 MEM заменимых аминокислот, 10 мМ HEPES, 55 мкМ 2-меркаптоэтанола, 2 мМ L-глутамина и 100 ед / мл пенициллина-стрептомицина.
  2. Подготовка сортировки буфера (HBSS-полный) с помощью 1x Хэнкса сбалансированный солевой раствор (HBSS) с добавлением 10 мМ HEPES, 2,5 мг / мл бычьего сывороточного альбумина,0,05 мМ MgCl 2 и 0,2 Ед / мл ДНКазы I.

2. Мышь Вскрытие

  1. Приготовьте два блюда диаметром 6 см, содержащих 4 мл С10. Поместите посуду на лед.
  2. Эвтаназии мыши по CO 2 ингаляции.
  3. Урожай селезенку и держать его в блюдо с С10 на льду.
    1. Pin мышь вниз с животом вверх на вскрытии пластины. Стерилизацию тело путем распыления 70% этанола.
    2. Разрежьте кожу и отделить кожу от мышечной стенки внизу вдоль вентральной средней линии от лобкового симфиза до шеи.
    3. Разрежьте кожу вдоль задней конечности от первого разреза до лодыжки.
    4. Зафиксируйте кожу обратно по бокам и сократить мышечную стенку по бокам от первого места разреза к диафрагме.
    5. Pin мышечной стенки назад на правой стороне головы.
    6. Расположить селезенке на правой стороне мыши под тонкой кишки и рядом с желудком. Возьмите один конец йе селезенке и отделить его от желудка.
  4. Обрежьте обе задние конечности из, в том числе бедренной и большеберцовой костей, а также удалить все мышцы в максимально возможной степени.
    1. Нарезать мышцы вдоль задней конечности от тазовой / тазобедренного сустава до лодыжки с острым ножницами, пытаясь избежать кровеносных сосудов.
    2. Отделите заднюю конечность путем разрезания на тазовой / тазобедренного сустава и лодыжки / ног сустава без воздействия содержимого костного мозга.
    3. Чистые оставшиеся мышцы на кости, царапая с лезвием бритвы и несколько раз сокращая мышцы на совместных пунктах.
  5. Держите кости в 6 см чашку, содержащую 4 мл С10 на льду. Перейдите к рассечения следующей мыши.

3. Выделение спленоцитов

  1. Однородный селезенку осторожно плунжерный шприц с сетчатым фильтром клетки 70 мкм на верхней части тарелки, содержащей 4 мл С10, пока не красные части не видны.
  2. Добавить дополнительные 6 мл С10 в чашку через ситечко ае затем передать общую клеточную суспензию 10 мл до 15 мл коническую пробирку.
  3. Центрифуга коническую трубку со скоростью 800 мкг в течение 5 мин, 4 ° С.
  4. После центрифугирования, аспирация супернатант и ресуспендируют осадок клеток в 2 мл 1 х красных кровяных телец (эритроцитов) буфера для лизиса. Инкубируют при комнатной температуре в течение 5 мин.
  5. После инкубации в течение центрифугировать коническую трубку со скоростью 800 мкг в течение 5 мин, 4 ° С.
  6. После центрифугирования аспирата супернатант и ресуспендируют осадок клеток в 1 мл С10. Откажитесь от любых больших комков (мертвые клетки) и держать трубку на льду для последующего использования.
    Примечание: Если есть много мелких комков, используют клеточный фильтр 70 мкм для фильтрации суспензии клеток один раз.
  7. Подсчитайте число клеток с трипановым синим с использованием автоматического счетчика клеток.

4. костного мозга Выделение клеток

  1. Перенесите кости с С10 по 4 мл в ступке и добавить 6 мл С10, чтобы сделать объем 10 мл С10 в общей сложности.
  2. Трещина кости аккуратно в ступке с помощью арestle.
  3. Слегка помешивая с пестиком, чтобы освободить костный мозг в С10.
  4. Передача С10 по 10 мл, содержащих костный мозг в коническую пробирку емкостью 50 мл, на льду через клеточный фильтр 70 мкм. Добавьте 10 мл свежего С10 в раствор, содержащий все еще кости.
    Примечание: Пипетка раствор, содержащий костного мозга вверх и вниз несколько раз до прохождения через сито, если красные сгустки видны.
  5. Повторите шаги от 4,2 до 4,4 раза. После последней промывки, кости должны казаться белым.
  6. Центрифуга 50 мл коническую трубку со скоростью 800 мкг в течение 5 мин, 4 ° С. В то же время, подготовить 5 мл готовой к использованию в градиенте плотности среды, в 15 мл коническую центрифужную пробирку при комнатной температуре.
  7. После центрифугирования аспирата супернатант и ресуспендируют осадок клеток в 10 мл С10.
  8. Медленно слой приостановку 10 мл клеток на верхней части 5 мл в градиенте плотности среды, поддерживая четкий интерфейс между двумя фазами. Затем центрифугировать 15 мл коническую трубку в 1363 г в течение 30 мин приRT (20 ° C) с множеством ускорения, как 9 и замедления, установленного в 0 (или OFF) тормоза.
  9. После центрифугирования, удалить верхний 8 мл этого раствора осторожно и собирают 2 мл поглощающее покрытие на границе раздела (слой мононуклеарных клеток) в новый 15 мл коническую трубку.
  10. Добавить 12 мл охлажденной на льду С10 в 15 мл коническую пробирку, содержащую мононуклеарных клеток костного мозга, колпачок и инвертировать несколько раз, чтобы хорошо перемешать, а затем отцентрифугировать пробирку при 800 х г в течение 10 мин, 4 ° С.

5. поверхности клеток Окрашивание для FACS

  1. Пример окрашивания
    1. Подготовка анти-мыши CD16 / 32 раствор антитела (от 1 до 100 разбавления в HBSS-полной, 5 мкг / мл, конечная концентрация).
    2. После центрифугирования в шаге 4.10, аспирата супернатант и ресуспендируют осадок клеток в 100 мкл раствора антител против мышиного CD16 / 32, чтобы блокировать рецептор Fc на мононуклеарных клетках. Инкубируют на льду в течение 10 мин.
    3. Приготовьте смесь флуоресцентной-конъюгированного антитела (муравейя-мышь CD11c-PE 1:40 разбавление, анти-мышь CD11b-APC-CY7 1:80 разбавление, анти-мышь PDCA-1-FITC 1:40 разбавление и анти-мышиного В220-В500 1:40 разведение в HBSS- полный, как рекомендовано производителем в количестве 100 мкл конечного объема на образец).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Важно титрование антител перед использованием.
    4. После 10-минутной инкубации на стадии 5.1.2, добавляют 4 мл охлажденного льдом HBSS, набитый и центрифуге при 800 мкг в течение 5 мин, 4 ° С для удаления несвязанного против мышиного CD16 / 32.
    5. После центрифугирования аспирата супернатант и ресуспендируют осадок клеток в 100 мкл смеси флуоресцентно-конъюгированных антител. Инкубируют на льду в течение 15 мин в темноте.
    6. После 15-минутной инкубации, добавляют 4 мл охлажденного льдом HBSS, набитый и центрифуге при 800 мкг в течение 5 мин, 4 ° С для удаления несвязанных флуоресцентно-конъюгированные антитела.
    7. Приготовьте раствор загрузки FACS (500 нг / мл DAPI в HBSS-полной).
    8. После центрифугирования на этапе 5.1.6, аспирация супернатант и ресуспендируют осадок клеток в 500 ц; Л FACS загрузки раствора. Передача клеточной суспензии в 12 х 75 мм с круглым дном трубки (FACS трубки) а и не держать трубку на льду в темноте до сортировки в течение 1 часа.
  2. Окрашивание для компенсации
    1. Этикетка 6 FACS труб, как PE, APC-CY7, FITC, V500, DAPI или неокрашенными. Алиготе спленоцитов на 1 × 10 6 клеток / пробирку в пробирки FACS и промывают 4 мл HBSS набитый при 800 мкг в течение 5 мин, 4 ° С.
      Примечание: Использование ДНК-связывающим флуоресценции красителя, DAPI, чтобы отличить живые клетки от мертвых клеток. DAPI, может проходить через плазматическую мембрану мертвых клеток (но не живые клетки), и связывают хромосомной ДНК.
    2. Аспирируйте супернатант и ресуспендируют осадок клеток в 100 мкл HBSS-полной.
    3. В каждой соответствующей FACS трубки, добавьте один из следующих антител: анти-мышиного CD19-PE разбавлении 1:40, анти-CD11b-мышь-АРС-CY7 1:80 разведение, анти-мышь ПВПД-1-FITC, 1:40 разбавление или анти-мышиного В220-В500 1:40 разбавления в соответствии с рекомендациями производcturer. Оставьте 5 - й (DAPI) и 6 - е (FACS) безупречной трубки , как они. Хорошо перемешать встряхиванием и инкубировать все FACS пробирки на лед в темноте в течение 15 мин.
    4. После инкубации добавляют 4 мл охлажденного на льду HBSS, набитый в каждую пробирку и центрифугировать пробирки FACS при 800 х г в течение 5 мин, 4 ° С.
    5. После центрифугирования, аспирация супернатант и ресуспендируют осадок клеток в 500 мкл охлажденного льдом HBSS-полной для гранул в трубе с надписью DAPI, который ресуспендировали в 500 мкл FACS загрузки раствора исключением. держа все 6 трубок на льду в темноте до сортировки.

6. Сортировка по Клеточный сортер

Примечание: Операция сортировки процедуры на цитометр и программного обеспечения стандартизирована с подробной инструкцией, предоставленной компанией. Если коротко, то мы используем 100 мкм сопла при 20 фунтов на квадратный дюйм, установить концентрацию клеток - мишеней между 5 - 10 миллионов на мл, и регулировать КПД до 70% или выше (то есть, конфликты держали до 30 лет%).

  1. Приготовьте сбор FACS труб с 500 мкл FBS / пробирку, содержащую 100 ед / мл пенициллина-стрептомицина.
  2. Настройка параметров компенсации из ячейки сортировщик с использованием компенсации трубок одной пятен с шага 5.2.
    1. Запись 10000 клеток в неокрашенной трубе, чтобы установить отрицательную ворота для каждой интенсивности флуоресценции.
    2. Запись 10000 клеток в других трубах компенсации одного пятна, чтобы установить положительные ворота для каждой интенсивности флуоресценции.
      Примечание: Программа автоматически рассчитывает параметры компенсации.
  3. Используйте один образец с шага 5.1, чтобы установить ворота популяций отсортированных клеток путем записи 3000 клеток. Использование интенсивности флуоресценции в качестве параметров X и Y-оси графика, целевой популяции клеток ворот вручную, как группа точек, по-видимому, отделенных от других точек.
    Примечание: Этот набор стробирования является гибким и произвольно на основе требований исследователей. Если исследователи ожидают более высокой чистоты на основе одного или более маркеров, перемещать воротавыше, на основании соответствующей интенсивности флуоресценции.
  4. Загрузите пробирку для сбора и начинают сортировать популяцию клеток-мишеней.
  5. Держите пробирку для сбора на льду после сортировки, пока все пробирки с образцами не выполняются.
  6. Добавьте ледяную С10 в пробирку до 4 мл, кепке и инвертировать перемешать.
  7. Центрифуга отборная труба при 800 х г в течение 5 мин, 4 ° С, а затем аспирата супернатант, в результате чего около 200 мкл с помощью клеточного осадка нетронутым.
  8. Добавляют 1 мл охлажденного льдом С10 ресуспендируют осадок клеток и передать всю клеточную суспензию в 1,5 мл центрифужную пробирку.
  9. Центрифуга 1,5 мл трубки при 800 х г в течение 5 мин, 4 ° С и аспирата супернатант, оставляя по 100 мкл с клеточному осадку нетронутым.
  10. Храните отсортированных клеточных популяций на льду до использования.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы стремились обогатить костного мозга Pdc с высокой степенью чистоты, и без влияния других типов клеток, из MRL / LPR волчанка склонными мышей обоих молодых и старости для изучения функциональных изменений Pdc относительно их способности производить IFN &. Первая стратегия очистки была использована MCS, которая, как показано на рисунке 1, привела к только 7,75% чистоты после обогащения. По сравнению с MCS, FACS, обогащенный Pdc с чистотой, достигающ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Протокол, описанный в данной рукописи, предназначен для обогащения высокой чистотой живых pDC, которые сохраняют способность продуцировать ИФНα. Применение данного протокола включает, помимо прочего, очистку pDC и/или любых других мононуклеарных клеток из костного мозга от MRL/lpr и любых других линий мышей для изучения клеточных и молекулярных функций. Несколько важнейших этапов в этом протоколе заключаются в обеспечении высокой жизнеспособности и чистоты отсортированного pDC. Первым ключевым этапом является освобождени...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов в связи с публикацией данной статьи.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы благодарим лабораторию проточной цитометрии в Колледже ветеринарной медицины Вирджинии-Мэриленда за использование основного оборудования проточной цитометрии. Эта работа была поддержана стартовыми фондами XML. XL является стипендиатом Stamps в рамках магистерской программы по биомедицинским и ветеринарным наукам.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
RPMI 1640gibco by life technologies11875-093
Фетальная бычья сывороткаHyCloneSH30396.03
Пируват натрияgibco by life technologies11360-070
MEM заменимые аминокислотыgibco by life technologies11140-050
HEPESgibco by life technologies15630-080
2-меркаптоэтанолGIBCO by Life Technologies21985-023
L-глутаминgibco by life technologies25030-164
Пенициллин-стрептомицинgibco by Life technologies15140-122
1x Hank' s Сбалансированный солевой раствор gibco by life technologies14175-079
MACS BSA Stock SolutionMiltenyi Biotec130-091-376
MgCl2SIGMAM8266
DNase ISIGMAD4527
Буфер для лизиса эритроцитов (RBC) eBioscience00-4300-54
Градиентная средаGE Healthcare17-1440-02Ficoll-Paque Plus 
антимышиный CD19-PEBD Pharmingen553786
антимышиный CD11c-PEeBioscience12-0114-82
антимышиный CD11b-APC-CY7BD Pharmingen557657
антимышиный PDCA-1-FITCeBioscience11-3172-81
антимышиный B220-V500 BD Pharmingen561226
DAPIinvitrogenD3571
Plasmacytoid Dendritic Cell Isolation Kit II, мышьMiltenyi Biotec130-092-786
BD FACSAria I проточный цитометр BD Biosciences643178
BD FACS Diva версия 6BD Biosciences

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Bonner, W. A., Hulett, H. R., Sweet, R. G., Herzenberg, L. A. Fluorescence activated cell sorting. Rev Sci Instrum. 43 (3), 404-409 (1972).
  2. Herzenberg, L. A., et al. The history and future of the fluorescence activated cell sorter and flow cytometry: a view from Stanford. Clin Chem. 48 (10), 1819-1827 (2002).
  3. Brown, M., Wittwer, C. Flow cytometry: principles and clinical applications in hematology. Clin Chem. 46 (8 Pt 2), 1221-1229 (2000).
  4. Laerum, O. D., Farsund, T. Clinical application of flow cytometry: a review. Cytometry. 2 (1), 1-13 (1981).
  5. Alvarez-Barrientos, A., Arroyo, J., Canton, R., Nombela, C., Sanchez-Perez, M. Applications of flow cytometry to clinical microbiology. Clin Microbiol Rev. 13 (2), 167-195 (2000).
  6. Mattanovich, D., Borth, N. Applications of cell sorting in biotechnology. Microb Cell Fact. 5 (12), (2006).
  7. Aldahlawi, A. M., Elshal, M. F., Damiaiti, L. A., Damanhori, L. H., Bahlas, S. M. Analysis of CD95 and CCR7 expression on circulating CD4(+) lymphocytes revealed disparate immunoregulatory potentials in systemic lupus erythematosus. Saudi J Biol Sci. 23 (1), 101-107 (2016).
  8. Cullender, T. C., et al. Innate and adaptive immunity interact to quench microbiome flagellar motility in the gut. Cell Host Microbe. 14 (5), 571-581 (2013).
  9. Fernandez, A. G., et al. High-throughput fluorescence-based isolation of live C. elegans larvae. Nat Protoc. 7 (8), 1502-1510 (2012).
  10. Cai, M., et al. DC-SIGN expression on podocytes and its role in inflammatory immune response of lupus nephritis. Clin Exp Immunol. 183 (3), 317-325 (2016).
  11. Blasius, A., et al. A cell-surface molecule selectively expressed on murine natural interferon-producing cells that blocks secretion of interferon-alpha. Blood. 103 (11), 4201-4206 (2004).
  12. Welzel, G., Seitz, D., Schuster, S. Magnetic-activated cell sorting (MCS) can be used as a large-scale method for establishing zebrafish neuronal cell cultures. Sci Rep. 5, 7959(2015).
  13. Valli, H., et al. Fluorescence- and magnetic-activated cell sorting strategies to isolate and enrich human spermatogonial stem cells. Fertil Steril. 102 (2), 566-580 (2014).
  14. Yamashiro, S., et al. Phenotypic and functional change of cytokine-activated neutrophils: inflammatory neutrophils are heterogeneous and enhance adaptive immune responses. J Leukoc Biol. 69 (5), 698-704 (2001).
  15. Apostolidis, S. A., Lieberman, L. A., Kis-Toth, K., Crispin, J. C., Tsokos, G. C. The dysregulation of cytokine networks in systemic lupus erythematosus. J Interferon Cytokine Res. 31 (10), 769-779 (2011).
  16. Asselin-Paturel, C., Brizard, G., Pin, J. J., Briere, F., Trinchieri, G. Mouse strain differences in plasmacytoid dendritic cell frequency and function revealed by a novel monoclonal antibody. J Immunol. 171 (12), 6466-6477 (2003).
  17. Liao, R., et al. Tacrolimus Protects Podocytes from Injury in Lupus Nephritis Partly by Stabilizing the Cytoskeleton and Inhibiting Podocyte Apoptosis. PLoS One. 10 (7), e0132724(2015).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Fluorescence activated Cell SortingPlasmacytoid Dendritic CellsBone Marrow IsolationCell Surface StainingForward Scatter AnalysisSide Scatter AnalysisMagnetic Activated Cell SortingLupus prone MiceIFNalpha ProductionCell Purity Analysis

Похожие статьи