Флуоресценция активированных сортировки клеток для очистки плазмоцитов дендритных клеток из костного мозга мыши

Xiaofeng Liao; Melissa Makris; Xin M. Luo

doi:10.3791/54641

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Флуоресценция активированных сортировки клеток для очистки плазмоцитов дендритных клеток из костного мозга мыши

11.6K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/54641

⸱

4 ноября 2016 г.

Xiaofeng Liao¹ , Melissa Makris² , Xin M. Luo¹

¹Department of Biomedical Sciences and Pathobiology, Virginia-Maryland College of Veterinary Medicine, Virginia Polytechnic Institute and State University, ²Flow Cytometry Laboratory, Virginia-Maryland College of Veterinary Medicine, Virginia Polytechnic Institute and State University

В этой статье

Краткое содержание

Мы сообщаем протокол с помощью флуоресцентной-Активированный сортировки клеток, чтобы изолировать плазмоцитов дендритные клетки (PDC) с высокой степенью чистоты из костного мозга волчаночного склонной мышей для функциональных исследований Pdc.

Аннотация

Флуоресцентно-активируемая сортировка клеток (FACS) — это метод очистки определенных клеточных популяций на основе фенотипов, обнаруженных с помощью проточной цитометрии. Этот метод позволяет исследователям лучше понять характеристики популяции отдельных клеток без влияния других клеток. По сравнению с другими методами обогащения клеток, такими как магнитно-активируемая сортировка клеток (MCS), FACS является более гибким и точным для разделения клеток благодаря возможности определения фенотипа с помощью проточной цитометрии. Кроме того, FACS обычно способен разделять несколько клеточных популяций одновременно, что повышает эффективность и разнообразие экспериментов. Несмотря на то, что FACS имеет некоторые ограничения, он широко используется для очистки клеток для функциональных исследований как in vitro, так и in vivo. В данной статье мы сообщаем о протоколе с использованием сортировки клеток, активируемых флуоресценцией, для выделения очень редкой популяции иммунных клеток, плазмоцитоидных дендритных клеток (pDC), с высокой чистотой из костного мозга мышей, склонных к волчанке, для функциональных исследований pDC in vitro.

Введение

Эффективное отделение выбранной популяции клеток от других клеток позволяет изучать популяцию, что в противном случае было бы невозможно. Флуоресцентно-активируемая сортировка клеток (FACS) — это метод обогащения интересной клеточной популяции высокой чистотой. ^1,2 Различные типы клеток обычно экспрессируют уникальные молекулы или уникальную комбинацию нескольких молекул на плазматической мембране, которые могут отличать одну популяцию клеток от другой. После связывания этих молекул клеточной поверхности специфическими флуоресцентно-конъюгированными антителами, детектирующая машина, называемая проточным цитометром/сортировщиком, способна возбуждать и обнару....