Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Нейрофармакологических Манипуляция сдержанным и свободно летающих пчел мед,

9.4K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/54695

⸱

26 ноября 2016 г.

 ,  ,  , 
1Department of Science and Mathematics, Volda University College, 2Department of Biology, Washington University in St. Louis, 3Department of Biological Sciences, Macquarie University, 4Department of Biology, University of Konstanz, 5Research Center on Animal Cognition, CNRS, Universite de Toulouse

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Эта рукопись описывает несколько протоколов для введения фармакологических агентов для медоносных пчел, в том числе простых неинвазивных методов для свободно летающих пчел, а также более инвазивных вариантов, которые позволяют точно локализованную обработку сдержанных пчел.

Аннотация

Медоносные пчелы демонстрируют удивительные способности обучения и передовые социального поведения и общения. Кроме того, их мозг мал, легко визуализировать и изучать. Таким образом, пчелы уже давно Одобренный модель среди нейробиологов и neuroethologists для изучения нейронной основы социального и естественного поведения. Важно, однако, что экспериментальные методы, используемые для изучения пчел не мешают поведения изучается. Из-за этого, было необходимо разработать ряд методов фармакологической манипуляции медоносных пчел. В этой статье мы покажем способы лечения сдержанные или свободно летающих пчел меда с широким спектром фармакологических агентов. К ним относятся как неинвазивные методы, такие как устные и актуальные лечения, а также более инвазивных методов, которые позволяют для точной доставки лекарственных средств в любом системном или локализованной моды. И, наконец, мы рассмотрим преимущества и недостатки каждого метода и описатьобщие препятствия и как наилучшим образом преодолеть их. В заключение дискуссии о важности адаптации экспериментального метода к биологическим вопросам, а не наоборот.

Введение

Так как Карл фон Фриш выяснены их танец язык 1, мед пчелы остаются популярным видом исследования для исследователей в поведении животных и нейробиологии. В последние годы множество новых дисциплин появились на пересечении этих двух полей, а также ряд других дисциплин (например, молекулярной биологии, геномики и информатики) возникли рядом с ними. Это привело к быстрому развитию новых теорий и моделей для понимания того, как результаты поведения от деятельности в пределах нервной системы. Из-за уникального образа жизни, богатый поведенческий репертуар и простота экспериментальной и фармакологической манипуляции, пчелы остаются на переднем крае этой революции.

Медоносные пчелы используются для изучения основных нейробиологических такие вопросы, как те , лежащих в основе обучения и памяти 2,3, принятия решений 4, 5, обонятельной или визуальной обработки 6. В последние годы, хонEY пчелы даже был использован в качестве модели для изучения темы , как правило , отведенные для медицинских исследований, таких как последствия привыкание наркотики 7 - 11, 12 сон, старение 13, или механизмы , лежащие в основе анестезии 14.

В отличие от классических генетической модели организмов (например, дрозофилы, С. Элеганс, М. Musculus), существует очень мало генетических инструментов , доступных для манипулирования нейронные функции в медоносных пчел, хотя это в настоящее время меняется 15. Вместо этого, мед пчелы исследования в основном опирались на фармакологических манипуляций. Это было очень успешным; Тем не менее, разнообразие исследований пчелиного таково, что целый ряд методов для фармакологического управления необходимы. Исследования с медоносных пчел обращается к весьма разнообразные вопросы, изучается исследователями из различных дисциплин и фонов, а также использует различные экспериментальные подходы. Многие ResEарочные вопросы требуют пчел либо свободный полет, свободно взаимодействуя в своей колонии, или обоих. Это может сделать это трудно отслеживать отдельные экспериментальных животных, и делает сдержанность или катетеризацию неосуществимой.

Для размещения разнообразие исследований медоносной пчелы, различные методы доставки лекарственных средств необходимы, что обеспечивает надежную и гибкую администрирования, обеспечивая при этом, что фармакокинетические и фармакодинамические профили, инвазивность метода, и его надежность, подходит парадигму о котором идет речь. Из-за этих разнообразных потребностей, большинство исследовательских групп разработали свои собственные уникальные методы введения лекарственных средств. До сих пор это было сила пчелиного научного сообщества; это привело к разработке массивов методов, позволяющих для введения одного и того же препарата в разных обстоятельствах. Наша цель здесь не разработать единый стандартизованный метод фармакологических манипуляций пчел, а скорее, чтобы подчеркнуть, что методыоказались особенно успешными, и помогает исследователям принять их. Мы обсудим основные принципы того, как они работают, а также их преимущества и недостатки.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Администрация Препарат для запряг Пчелы

  1. пероральное лечение
    1. Готовят раствор 1,5 М сахарозы путем смешивания 257 г сахарозы с 500 мл воды (это легче растворить такое количество сахарозы в кипящей воде). Хранить раствор сахарозы при 4 ° С до использования.
      Примечание: Сахароза решение обеспечивает очень благоприятную среду для определенных микроорганизмов, и, таким образом, легко загрязняется и неприятны для пчел. Основной объем раствора сахарозы может быть аликвоты и хранили при -20 ° С до использования.
    2. Принятие решения о соответствующей дозы препарата (как достигнуть этого, рассматривается в разделе обсуждения ниже), и подготовить решение , такое , что предпочтительная доза препарата растворяют в 20 мкл раствора сахарозы (например, поставить 20 мкг, развести препарат в соотношение 1 мг / мл). Осваивать пчел согласно Felsenberg и др. (2011) 16. Сделайте этот шаг по крайней мере, 12 ч до лечения препаратом, чтобы гарантировать, что пчелы не больше не подчеркнул оут из обуздывать, когда представлен лекарственный раствор.
      Примечание: Для получения более стабильных результатов, то лучше голодать пчел (размещая запряженных пчел в термостате при 34 ° С и 70% влажности) O / N.
    3. Использование микропипетки, нажмите каплю 1,5 М сахарозы воды к антенне запряженной пчелы. Когда хоботок удлиняется, сенсорный 20 мкл капли 1,5 М сахарозы, содержащей лекарственное средство непосредственно к хоботок пчелы в. Убедитесь, что пчела потребляет все. В качестве контроля транспортного средства используют 1,5 М раствор сахарозы без добавления препаратов.
      Примечание: Количество раствора сахарозы, возможно, должны быть скорректированы на основе экспериментальных планов. Если аппетитивная кондиционирования предназначен, кормление пчел только до тренировки будут мешать отзывчивость пчел.
    4. Выбросить или отставить пчел, которые не потребляют все сахарозы.
      Примечание: Если большое количество пчел не пить раствор сахарозы, график кормления, возможно, потребуется скорректировать.
  2. Инъекция в грудной клетке
    1. Готовят препарат в медоносной пчелы Ringer 17 следующим образом :
      1. Смешать и автоклав 7,45 г NaCl, 0,448 г KCl, 0,812 г MgCl 2, 0,735 г CaCl 2, 54,72 г сахарозы, 4,95 г D-глюкозы, и 2,48 г HEPES в 1000 мл воды. Будьте осторожны при хранении Ringer, как она легко загрязняется. Алиготе и хранить Рингера при -20 ° С до использования.
      2. Растворить препарат в растворе Рингера, а затем разбавленную таким образом, чтобы желаемое количество присутствует в 5 мкл. В качестве примера, если пчелы должны быть обработаны с помощью 5 мкг препарата, 1 г может сначала быть растворено в 1 мл в Ringer, перед тем, как разбавленный 1: 1000 в Рингера для окончательного решения 1 мкг / мкл.
        Примечание: В качестве альтернативы, коммерчески доступный PBS (фосфатно-буферном Salin) может быть использован вместо раствора Рингера.
    2. Сделать microscalpel разрывая угол обоюдоострым лезвием бритвы сдержатель лезвия. Приложить фрагмент лезвия для держателя лезвий таким образом, что он делает хорошее лезвие с острым концом точки.
    3. Под стереомикроскопа, аккуратно использовать microscalpel отрезать 2 мм отверстие чуть выше щитка, рядом с задним процессом грудной клетки пчелы крыла. Избегайте резки слишком глубоко, так как это может повредить мышцы полета, и быть осторожными, чтобы избежать петли крыла. В идеале, только вырезать три стороны, так что лоскут кутикулы позже можно сложить, чтобы закрыть сайт травмы.
    4. Использование микропипетки, депозит 5 μlL Ringer (или PBS), содержащую лекарственное средство поверх отверстия в грудной клетке. Тщательно контролировать под микроскопом, чтобы убедиться, что весь капля всасывается в гемолимфе. С помощью звукового сигнала вызова (или PBS) в качестве управления транспортным средством.
    5. Если это возможно, переместите кутикулы лоскут над отверстием. Через 5-10 ч, он будет снова прикрепить и запечатать.
      Примечание: В качестве альтернативы этому способу, вводят 1 мкл непосредственно в грудную клетку с помощью стеклянного шприца, после открытия СМАЛ.Л. отверстие в середине уздечки (поперечной линии в задней области щитком) с помощью шприца с иглой (диаметр: 0,6 мм, G: 23). Это избежать необходимости сначала разрезать грудную клетку с помощью скальпеля и месте инъекции меньше, но этот метод будет оставить место инъекции подвергаются.
  3. Глазок инъекции
    Примечание: Этот метод пригоден для доставки молекул в течение всего головной капсулы, в гемолимфе.
    1. Готовят наркотики, как в 1.2.1, но регулировать концентрации лекарственного средства таким образом, что требуемая доза будет содержаться в 1 мкл Ringer или PBS (меньше объем может всасываться через отверстие глазка, чем через грудную клетку).
    2. Приготовьте microscalpel как в пункте 1.2.2. Под стереомикроскопа, зафиксировать голову запряженной пчелы на месте путем заполнения расщелину шеи с воском. С помощью низкотемпературного плавления воска (например, зубной воск), чтобы избежать повреждения антенальный обонятельные рецепторы или другие клетки , которые могут быть , яmportant для оценки поведения (например, обонятельные обучения). Затем осторожно снимите объектив срединного глазка, вставив кончик microscalpel под объективом и аккуратно Освободиться от головной капсулы объектив.
      Примечание: Кроме того, можно аккуратно поместить воск над антеннах, чтобы предотвратить движение.
    3. Тщательно пипеткой препарат на глазка отверстие. Подождите, пока все не будет принято в головной капсулы. Удалить зубной воск из усиков и позволяют пчелиный отдохнуть некоторое время, прежде чем продолжить экспериментальную процедуру. С помощью звукового сигнала вызова (или PBS) в качестве управления транспортным средством.
  4. Инъекции в глазковый тракта
    ПРИМЕЧАНИЕ: глазковый тракт содержит крупные волокна, соединяясь большинстве регионов центрального мозга 18. Этот метод лечения позволяет применять соединения только мозга, но не ориентированные на конкретные субрегионы мозга.
    1. Подготовка пчел, как в 1.3.2. и снимите объектив срединного глазка с тф из microscalpel, как в 1.3.3.
      Примечание: Это может быть сделано до 2 часов до инъекции. Основываясь на нашем опыте, кормят пчел лучше способны справиться с этой операцией, чем изголодавшимися пчел
    2. Наполните стеклянный шприц 10 мкл оснащен небольшим датчиком (например, 33, диаметр: 210 мкм) игольчатые с раствором лекарственного средства получали , как в версии 1.3.1.
    3. С помощью ручного микроманипулятор, вставьте кончик шприца через глазковый сетчатки в головной капсулы на глубину 50 мкм и впрыснуть 250 нл раствора.
    4. После использования промыть шприц 3 раза дистиллированной водой, а затем 3 раза 75% -ным этанолом.
  5. Микроинъекции в частности структур мозга
    Примечание: В дополнение к систематическим лечения указанных выше, можно выполнять микроинъекций в конкретных структурах мозга. Это позволяет фармакологической манипуляции одной или нескольких областях головного мозга, в то время как оставляя другие без изменения. Это работаетлучше всего с областями мозга, которые легко распознать от передней поверхности головного мозга (например, усиков долей, грибных чашечек тела или вертикальными лопастями, или зрительных долей), но и другие регионы были направлены. Обратите внимание , что ориентация (передний / задний, спинной / вентральный) относится к оси тела, скорее, чем к нейрооси 19.
    1. Готовят препарат в Ringer или PBS таким же образом , как в 1.2.1, при добавлении флуоресцентной (например, 0,5 мг / мл декстрана, Alexa 546 или 568 Fluor) или нефлуоресцентный краситель (например, 1 мМ метиленового синего).
      Примечание: Добавление флуоресцентного красителя позволит верификацию места впрыска после моего опыта (с использованием конфокальной микроскопии, после рассечения мозга), в то время как нефлуоресцирующих красители позволяют осуществлять прямое наблюдение в ходе эксперимента.
    2. Для того, чтобы стеклянные пипетки для инъекций, вставьте стеклянные капилляры правильного диаметра в держатель зажимов электрода съемник (1,0 мм для стандартного удержанияэр включены для microinjector, упомянутых в списке материалов). Отрегулируйте тянуть и тепловые параметры, чтобы произвести приблизительно длиной 0,5 см наконечник (настройки будет отличаться для каждого съемника, даже если та же модель используется).
      Примечание: В идеале, два пипеток вытащили из одного стекла должны иметь одинаковую длину и форму, так, что оба они могут быть использованы.
    3. Под стереомикроскопа, перерыв кончики, чтобы получить наружный диаметр около 10-15 мкм, на основе визуальной оценки с использованием шкалы на координатной сетке, вставленного в окуляр. Шаги по шкале определяются изготовителем, и может быть скорректировано для увеличения используемого.
    4. Затем заполняют стеклянные пипетки с раствором, чтобы впрыснуть. Если стеклянные капилляры нитей используются, заполнить пипетку, помещая заднюю сторону в раствор лекарственного средства, в противном случае заполнить наконечник с помощью microloader советы.
    5. Вставьте заполненный стеклянной пипетки в держатель капилляра в microinjector, который управляется вручную или электронным миcromanipulator.
    6. Откалибруйте microinjector впрыснуть нужного объема (0,5-2 NL, в зависимости от размера структуры мозга целевого). Для этого вводят непосредственно в небольшую чашку Петри, содержащую минеральное масло, и измерить диаметр капли с координатной сеткой. Изменение настроек до тех пор, пока не будет достигнут желаемый объем.
    7. Зафиксируйте голову запряженной пчелы с помощью мягкой зубной воск, как в 1.3.2, перед нарезкой отверстие в передней части головной капсулы, используя microscalpel, с тремя разрезами: один чуть ниже срединного глазка (брюшного), по одному граница правого или левого глаза и один над антенной стеблями (спинные). Используйте кусок зубной воска, чтобы держать открытую створку на месте.
    8. Осторожно придвинуть железы и трахеи лежит на верхней части головного мозга в сторону с помощью тонких щипцов, а затем сделать небольшой разрыв в neurilemma (очень тонкая мембрана вокруг мозга) превышает целевой структуры мозга.
      Примечание: Если много пчел лечиться сразу, эту процедуруможет быть выполнена раньше; Однако, будьте осторожны, чтобы не оставить пчел в таком состоянии слишком долго (не более 30 мин), так как их мозг может высыхать.
    9. Вставьте наконечник в нужном участке мозга, и регулировать глубину перпендикулярно к поверхности головного мозга (например, 60 мкм для чашечек грибной тела). Вводят заданный объем. Для боковых областей головного мозга, впрыснуть на двусторонней основе (т.е. делать одну инъекцию в каждом полушарии). Если нефлуоресцентный краситель используется, обеспечивает инъекции произошло в правой области при наблюдении при нагнетании. Если используется флуоресцентный краситель сделать то же самое при флуоресцентном освещении с использованием стереомикроскопа с системой просмотра флуоресценции.
    10. Затем поместите открытую створку над головой пчелы. Melt кристалл эйкозана, что примерно на 1 мм в диаметре, с помощью тонкой проволоки, свернутой вокруг кончика микро паяльника (температура плавления 35-37 ° С) и запечатать сокращений. Это позволит значительно снизить смертность.
    11. Выпуститьпчелы от жгута проводов для поведенческого анализа (но обсуждение см), или держать в жгуте для экспериментов по сдержанных пчел - например, расширение хоботок рефлекс (PER) тестирование 20.
    12. Если флуоресцентный краситель использовали, убедитесь , что инъекции попал в сферу интересов после того, как эксперимент по сравнению с использованием конфокальной лазерной сканирующей микроскопии (рис. 1).
      Примечание: Это особенно полезно при ориентации более глубокие области мозга (там, где это было бы трудно увидеть нефлуоресцирующих красителя во время фазы впрыска).

2. Методы введения лекарственных средств для свободно летающих пчел

  1. пероральное лечение
    1. Готовят препарат таким же образом, как на этапах 1.1.1-1.1.2. Добавьте лекарственный раствор в фидере и поместить в холодильник для хранения.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Любой фидера будет делать, например, перевернутой крышки бутылки или баночки перевернутой на папиросную бумагу.
    2. Поезд пчел гравитационный фидер, содержащим 1 М или 0,5М раствор сахарозы путем размещения устройства подачи близко к улья. После того, как пчелы начинают нагула на фидер, постепенно переместить его дальше, пока не будет на удобном расстоянии, чтобы избежать ужалила (минимум 5 м).
    3. Краска-знак пчелы для того, чтобы следить за отдельными пчелами меда. Составьте список всех цветовых комбинаций, которые будут использоваться. Когда пчела земли на фидер, тщательно отметьте его живот с двумя цветами, и сделать отметку в списке, который берется комбинация.
    4. Поменять местами подачи самотеком для питателя, содержащего лекарственный раствор / сахарозы. Обратите внимание на отмеченных пчел, которые посещают кормушку. Уловить без опознавательных знаков пчелы во время посещения фидер, как пчелы плодовитыми рекрутеры, а количество пчел, посещающих наркотическое фидер может быстро выйти из-под контроля. Это особенно проблематично, если тот же самый эксперимент должен быть выполнен в последующие дни, так как наивные пчелы может больше не быть наивными.
      Примечание: В качестве альтернативы к обучению отдельных пчел с фидером, предыдущий авторs успешно кормили сахарозы воду наркотиков кружевной ко всему улье 21 - 23.
  2. Местное лечение
    Примечание: Цель состоит в том, чтобы растворить интерес соединения в растворителе, который может проникать через кутикулу восковой насекомых. Различные растворители могут быть использованы для этой цели. Наиболее часто используемые включают в себя ацетон, диметилформамид (ДМФ) и диметилсульфоксид (ДМСО).
    1. Оценка, которая работает растворитель лучше всего подходит для соединения под рукой. При сильном фенотип , как ожидается , от передозировки (например, паралич или смерть), лечат пчел (этап 2.2.2) с высокой дозой (например, 20 мкг кокаина 7) , растворенного в каждой из различных растворителей и тщательно следить за время до паралича или смерть.
    2. С помощью 1 мкл микрокапилл (или микрошприца, которые могут быть установлены на соответствующем повторяющемся дозатором) и держатель микрокапиллярной, рисовать 1 мкл лекарственного раствора (например, 381 г / мкл кокаина) в капилляр. Выгнать капли, и осторожно покрасить его на грудную клетку заметному пчелы. Накройте, как большой из области относительно возможного с раствором, а не оставляя твердый капли, как пчела, то, скорее всего, жениху его. Будьте осторожны, чтобы не допустить соединение в контакт крыло петли, или это может сделать его грудную клетку и вдоль крыльев, где она будет испаряться, не будучи поглощены в гемолимфе.
      Примечание: В зависимости от цели исследования, этот метод может быть также использован для введения лекарств в брюшной полости пчелы. Тем не менее, наркотики достигают ЦНС быстрее и в больших количествах , когда применяется к грудной клетке 24 .Это метод работает одинаково хорошо с запрягали , как со свободно летающих пчел.
  3. улетучивается лечение
    1. Растворите наркотики (ранее этот метод был использован для доставки кокаина пчелам 10) в 100% этаноле. Для того, чтобы обеспечить растворимость, не используют гидрохлорид или другие солевые формынаркотиков, если это возможно. При изготовлении разбавление подготовить его таким образом, чтобы сумма будет доставлен пчела присутствует в 100 мкл. Используйте чистый этанол в качестве управления транспортным средством.
    2. Чтобы создать нить, используйте ту же процедуру , как и Мак - Кланга Хирш 25.
      1. Кратко объяснил: ветер нихромовой проволоки плотно вокруг ногтя и прикрепить к двум электрическим проводам (по одному на каждом конце нити). Удалите гвоздь. Оставшийся нихром катушки упоминается как нити.
      2. Пропустите два провода через тщательно просверленные отверстия в крышке центрифуги трубки 50 мл, который должен быть устойчивым по отношению к выбранной температуры. Клей провода в месте с жидким силиконом.
        Примечание: Это сделает герметичную трубку. Это очень важно, чтобы избежать вторичного воздействия экспериментатора и гарантировать, что пчелы обрабатывают соответствующие дозы.
    3. Приложить провода, ведущие к нити к источнику питания. С помощью термопары для измерения температурынить, эксперимент с различным напряжением / током комбинации, пока один, что приводит к соответствующему профилю температуры для лекарственного средства в вопросе, в идеале, один, что позволяет в течение 10 секунд нагрева или меньше. Это очень важно, обратитесь к соответствующей литературе (например, для того , чтобы кокаина испаряться он должен быть нагрет до по меньшей мере 200 ° С, но при температуре выше 350 ° С она разбивается на вторичных соединений 26).
    4. Тщательно пипетку 100 мкл лекарственного раствора, содержащего этанол на нити. Спред жидкость на столько же поверхности нити накала, как это возможно, так как это позволит повысить эффективность испарения. Оставьте нить подвергается при комнатной температуре, пока весь этанол не испарится.
      Примечание: Если этанол не достаточно испарилась, пчелы будут лечить как препарат выбора и этанола. Пчелы чрезвычайно чувствительны к этанолу, и некоторые препараты имеют синергетические взаимодействия с этанолом, который будет смещения ехриментальные результаты.
    5. После того, как этанол полностью испарится (осадок препарат обычно можно увидеть на сухой нити под микроскопом), поймать свободно летящая пчела в 50 мл трубки. Осторожно закройте крышку, содержащую нити.
    6. Включите питание в течение 10 секунд, выключите питание и подождите еще 50 секунд (чтобы позволить улетучивается соединение для охлаждения и тем самым уплотнить или депозит). Отпустите пчел.
      Примечание: В то время как этот метод лечения прекрасно работает для свободно летающих пчел, он может быть использован так же, как эффективно с обузданные пчел. Просто прикрепите запряженных пчел внутри 50 мл трубки. Обновить нить, как описано в разделе 2.3.4 между пчелами. Для получения более высокой пропускной способностью, несколько нитей могут быть использованы параллельно.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Выбор репрезентативных результатов для методов, описанных выше, показаны, в основном, чтобы продемонстрировать, что методы позволяют фармакологические средства, чтобы достичь мозга и влияют на поведение мед пчелы.

Конкретные эффекты на мозговые процессы могут быть легко получены после инъекции грудной клетке.

Так как фармакологические средства впрыскивают через грудную...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Методы, описанные выше, позволяют простое, эффективное и надежное лечение любого свободного полета или запряженных медоносных пчел. Эти методы совместимы со многими экспериментальными парадигмами и биологических вопросов (таблица 1). Все методы свободно летающих можно легко применить к запряженных пчел. Обратное менее успешным, однако, так как временная сдержанность и инвазивные методы лечения часто могут поставить под угрозу способность летающий пчел.

Эти методы были предст...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Этот проект был профинансирован грантом ARC DP0986021 и грантом NHMRC 585442. ABB получает стипендию ARC Future Fellowship (FT140100452). JAP поддерживается стипендией iMQRES, присуждаемой Университетом Маккуори, и стипендией DAAD-Doktorandenstipendium, присуждаемой Немецкой службой академических обменов. JMD поддерживается CNRS и Университетом Поля Сабатье.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
СахарозаSigma-AldrichS8501Любой поставщик сделает
Хлорид натрияSigma-AldrichS7653
Хлорид калияSigma-AldrichP9333 
Гексагидрат хлорида магнияSigma-AldrichM2670
Дигидрат хлорида кальцияSigma-AldrichC8106
Моногидрат декстрозыSigma-Aldrich49159
Фосфатный буфер физиологического раствора (PBS)Sigma-AldrichP4417
Защитный воскDentaurum124-305-00
HEPESSigma-AldrichH3375
диметилформамидSigma-AldrichD4551
95% этанолSigma-Aldrich493511
Стеклянный капиллярWPI1B100F-3
23 G Игла NanoFilWPINF33BV-2
Очень мелкие форскептыDumont0208-55-PO
Электрод пуллерSRI2001
FemtoJet микроинъекторEppendorf5247 000.01
EicosaneSigma-Aldrich219274
ручной микроманипуляторBrinkmann InstrumentenbauMM-33
электронный микроманипуляторLuigs & Neumann Feinmechanik + ElektortechnikJunior unit XYZ
стереомикроскопLeicaM80
паяльникWellerWESD51
Dextran, Alexa Fluor 546, 10 000 МВтThermoFisher ScientificD-22911
Dextran, Alexa Fluor 568, 10 000 МВтThermoFisher ScientificD-22912
малая чашка ПетриSigma-AldrichP5481
минеральное маслоSigma-AldrichM5904
50 мл Центрифужная пробиркаThermoFisher Scientific339652
щипцыАвстралийские энтомологические принадлежности
Держатель лезвия и прерывательАвстралийские энтомологические принадлежностиE130
Feather обоюдоострое бритвенное лезвиеThermoFisher Scientific50-949-135
Нихромовый проводЛюбой поставщик сделает
Электрические проводаЛюбой поставщик сделает
Модель краскиTamiya СШАВ зависимости от цвета
Повторяющийся дозаторкомпании HamiltonPB-600-1
Стеклянный шприцWPINANOFIL
флуоресцентная смотровая системаNightseaSFR-GR
градусная сеткаProSciTechS8014-24
микрокапиллярная с держателемDrummond1-000-0010
Жидкий силиконЛюбой поставщик сделает
ТермопараDigitechQM-1324
МикропипеткаEppendorf

Ссылки

  1. Frisch, K. . von B. ees Their Vision, Chemical Senses, and Language. , Cornell University Press. Itacha, NY. (1971).
  2. Giurfa, M. The amazing mini-brain: lessons from a honey bee. Bee World. 84 (1), 5-18 (2003).
  3. Giurfa, M. Behavioral and neural analysis of associative learning in the honeybee: a taste from the magic well. J. Comp. Physiol. 193 (8), 801-824 (2007).
  4. Perry, C. J., Barron, A. B. Honey bees selectively avoid difficult choices. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 110 (47), 19155-19159 (2013).
  5. Giurfa, M., Sandoz, J. -C. Invertebrate learning and memory: Fifty years of olfactory conditioning of the proboscis extension response in honeybees. Learn. Mem. 19 (2), 54-66 (2012).
  6. Srinivasan, M. V. Honey bees as a model for vision, perception, and cognition. Annu. Rev. Entomol. 55, 267-284 (2010).
  7. Søvik, E., Cornish, J. L., Barron, A. B. Cocaine tolerance in honey bees. PLoS One. 8 (5), e64920(2013).
  8. Søvik, E., Barron, A. B. Invertebrate models in addiction research. Brain. Behav. Evol. 82 (3), 153-165 (2013).
  9. Søvik, E. Reward processing and responses to drugs of abuse in the honey bee, Apis mellifera. , Macquarie University. Australia. November (2013).
  10. Søvik, E., Even, N., Radford, C. W., Barron, A. B. Cocaine affects foraging behaviour and biogenic amine modulated behavioural reflexes in honey bees. Peer J. 2, e662(2014).
  11. Abramson, C. I., Stone, S. M., et al. The development of an ethanol model using social insects I: behavior studies of the honey bee (Apis mellifera L.). Alcohol. Clin. Exp. Res. 24, 1153-1166 (2000).
  12. Sauer, S., Kinkelin, M., Herrmann, E., Kaiser, W. The dynamics of sleep-like behaviour in honey bees. J. Comp. Physiol. A Neuroethol. Sensory, Neural, Behav. Physiol. 189 (8), 599-607 (2003).
  13. Münch, D., Kreibich, C. D., Amdam, G. V. Aging and its modulation in a long-lived worker caste of the honey bee. J. Exp. Biol. 216 (Pt 9), 1638-1649 (2013).
  14. Cheeseman, J. F., Winnebeck, E. C., et al. General anesthesia alters time perception by phase shifting the circadian clock. Proc. Natl. Acad. Sci. , (2012).
  15. Schulte, C., Theilenberg, E., Müller-Borg, M., Gempe, T., Beye, M. Highly efficient integration and expression of piggyBac-derived cassettes in the honeybee (Apis mellifera). Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 111 (24), 9003-9008 (2014).
  16. Felsenberg, J., Gehring, K. B., Antemann, V., Eisenhardt, D. Behavioural pharmacology in classical conditioning of the proboscis extension response in honeybees (Apis mellifera). J. Vis. Exp. (47), e2282(2011).
  17. Burger, H., Ayasse, M., Dötterl, S., Kreissl, S., Galizia, C. G. Perception of floral volatiles involved in host-plant finding behaviour: Comparison of a bee specialist and generalist. J. Comp. Physiol. A Neuroethol. Sensory, Neural, Behav. Physiol. 199 (9), 751-761 (2013).
  18. Pan, K. C., Goodman, L. J. Ocellar projections within the central nervous system of the worker honey bee, Apis mellifera. Cell Tissue Res. 176 (4), 505-527 (1977).
  19. Ito, K., Shinomiya, K., et al. A systematic nomenclature for the insect brain. Neuron. 81, 755-765 (2014).
  20. Bitterman, M. E., Menzel, R., Fietz, A., Schäfer, S. Classical conditioning of proboscis extension in honeybees (Apis mellifera). J. Comp. Psychol. 97 (2), 107-119 (1983).
  21. Barron, A. B., Robinson, G. E. Selective modulation of task performance by octopamine in honey bee (Apis mellifera) division of labour. J. Comp. Physiol. A Neuroethol. Sens. Neural. Behav. Physiol. 191 (7), 659-668 (2005).
  22. Schulz, D. J., Sullivan, J. P., Robinson, G. E. Juvenile Hormone and Octopamine in the Regulation of Division of Labor in Honey Bee Colonies. Horm. Behav. 42 (2), 222-231 (2002).
  23. Schulz, D. J., Elekonich, M. M., Robinson, G. E. Biogenic amines in the antennal lobes and the initiation and maintenance of foraging behavior in honey bees. J. Neurobiol. 54 (2), 406-416 (2003).
  24. Barron, A. B., Vander Meer, R. K., Maleszka, J., Robinson, G. E., Maleszka, R. Comparing injection, feeding and topical application methods for treatment of honeybees with octopamine. J. Insect Physiol. 53 (2), 187-194 (2007).
  25. McClung, C., Hirsh, J. Stereotypic behavioral responses to free-base cocaine and the development of behavioral sensitization in Drosophila. Curr. Biol. 8 (2), 109-112 (1998).
  26. Martin, B. R., Lue, L. P., Boni, J. P. Pyrolysis and volatilization of cocaine. J. Anal. Toxicol. 13 (3), 158-162 (1989).
  27. Lefer, D., Perisse, E., Hourcade, B., Sandoz, J. -C., Devaud, J. -M. Two waves of transcription are required for long-term memory in the honeybee. Learn. Mem. 20 (1), 29-33 (2012).
  28. Urlacher, E., Soustelle, L., et al. Honey Bee Allatostatins Target Galanin/Somatostatin-Like Receptors and Modulate Learning: A Conserved Function? PLoS One. 11 (1), e0146248(2016).
  29. Stollhoff, N., Menzel, R., Eisenhardt, D. Spontaneous recovery from extinction depends on the reconsolidation of the acquisition memory in an appetitive learning paradigm in the honeybee (Apis mellifera). J. Neurosci. 25 (18), 4485-4492 (2005).
  30. Barron, A. B., Maleszka, R., Helliwell, P. G., Robinson, G. E. Effects of cocaine on honey bee dance behaviour. J. Exp. Biol. 212 (2), 163-168 (2009).
  31. Devaud, J. -M., Papouin, T., Carcaud, J., Sandoz, J. -C., Grünewald, B., Giurfa, M. Neural substrate for higher-order learning in an insect: Mushroom bodies are necessary for configural discriminations. Proc. Natl. Acad. Sci. , 1-9 (2015).
  32. Vergoz, V., Roussel, E., Sandoz, J. -C., Giurfa, M. Aversive learning in honeybees revealed by the olfactory conditioning of the sting extension reflex. PLoS One. 2 (3), e288(2007).
  33. Henry, M., Béguin, M., et al. A common pesticide decreases foraging success and survival in honey bees. Science. 336 (6079), 348-350 (2012).
  34. Søvik, E., Perry, C. J., LaMora, A., Barron, A. B., Ben-Shahar, Y. Negative impact of manganese on honeybee foraging. Biol. Lett. 11 (3), 20140989(2015).
  35. Farooqui, T., Vaessin, H., Smith, B. H. Octopamine receptors in the honeybee (Apis mellifera) brain and their disruption by RNA-mediated interference. J. Insect Physiol. 50 (8), 701-713 (2004).
  36. Guo, X., Su, S., et al. Recipe for a Busy Bee: MicroRNAs in Honey Bee Caste Determination. PLoS One. 8 (12), e81661(2013).
  37. Cristino, A. S., Barchuk, A. R., et al. Neuroligin-associated microRNA-932 targets actin and regulates memory in the honeybee. Nat. Commun. 5, 5529(2014).
  38. Vargaftig, B. B., Coignet, J. L., de Vos, C. J., Grijsen, H., Bonta, I. L. Mianserin hydrochloride: Peripheral and central effects in relation to antagonism against 5-hydroxytryptamine and tryptamine. Eur. J. Pharmacol. 16 (3), 336-346 (1971).
  39. Beggs, K. T., Tyndall, J. D. A., Mercer, A. R. Honey bee dopamine and octopamine receptors linked to intracellular calcium signaling have a close phylogenetic and pharmacological relationship. PLoS One. 6 (11), (2011).
  40. Matsumoto, Y., Menzel, R., Sandoz, J. -C., Giurfa, M. Revisiting olfactory classical conditioning of the proboscis extension response in honey bees: a step toward standardized procedures. J. Neurosci. Methods. 211 (1), 159-167 (2012).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Фармакология медоносных пчелметоды введения препаратовторакальная инъекцияинъекция в оцеллярный органинъекция в оцеллярный трактметод волатилизацииподготовка микроскальпеляфиксация с помощью стоматологического воскаконфокальная микроскопиянейроэтологические методы
Нейрофармакологических Манипуляция сдержанным и свободно летающих пчел мед,
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.