Методическая статья

Легким и эффективным подходом к производству Реверсивный дисульфид поперечно-сшитого мицелл

8.4K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/54722

⸱

23 декабря 2016 г.

 ,  , 
1Department of Biochemistry & Molecular Medicine, University of California, Davis, 2UC Davis Comprehensive Cancer Center, University of California, Davis, 3Department of Internal Medicine, Division of Hematology and Oncology, University of California, Davis

В этой статье

Краткое содержание

Для доставки лекарств от рака к опухолевым участкам с высокой специфичностью и сниженными побочными эффектами требуются новые методы на основе наночастиц. Здесь мы описываем дисульфидные сшитые мицеллы, которые могут быть легко получены путем окисления, опосредованного перекисью водорода, и способны эффективно диссоциировать в редуцирующей опухолевой среде для высвобождения полезной нагрузки.

Аннотация

Наномедицина является новой формой терапии, которая использует уникальные свойства частиц, которые нанометров в масштабе для биомедицинского применения. Улучшение доставки лекарственных средств, чтобы максимизировать результаты лечения и уменьшить связанный с наркотиками побочные эффекты являются одними из краеугольных камней современного наномедицины. Наночастицы, в частности, нашли широкое применение в лечении рака. Наночастицы, которые предлагают высокую степень гибкости при проектировании, применении и производстве на основе микросреды опухоли, по прогнозам, будет более эффективным с быстрым переводом в клиническую практику. Полимерный мицеллярной нано-носитель является популярным выбором для приложений доставки лекарственных средств.

В этой статье мы опишем простой и эффективный протокол для синтеза наркотиков загруженным, дисульфид сшитых мицеллы на основе самосборки хорошо определенной амфифильного линейно-дендритных сополимера (telodendrimer, TD). ТД состоит из полиэтилена ГЛycol (ПЭГ) в качестве гидрофильного сегмента и тиолированным кластера холевой кислоты в качестве основного образующего гидрофобного фрагмента, присоединенного к ступенчато с концевыми аминогруппами ПЭГ с использованием раствора на основе пептидной химии. Химиотерапевтических средств, таких как паклитаксел (PTX), может быть загружен с помощью стандартного метода выпаривания растворителя. -опосредованного Окисления O 2 была ранее использована для формирования внутри мицеллярных дисульфидные поперечные связи из свободных тиоловых групп на TDs. Тем не менее, реакция была медленной, и не представляется возможным для крупномасштабного производства. В последнее время метод окисления H 2 O 2 -опосредованного была изучена в качестве более приемлемого и эффективного подхода, и это было в 96 раз быстрее , чем сообщалось ранее способом. Используя этот подход, 50 г PTX-нагруженных, дисульфид сшитых наночастицы были успешно получены с узким распределением частиц по размерам и эффективности погрузки высокого лекарственного средства. Стабильность полученного раствора мицелл анализировались с использованием разрушающие условий, таких как в случае совместной инкубации шIth в додецилсульфата моющее средство, натрия, с добавлением или без восстанавливающего агента. Препарат загруженным, дисульфид сшитые мицеллы продемонстрировали менее гемолитической активностью по сравнению с их не сшитый коллегами.

Введение

Нанотехнологии является быстро развивающейся области , которая выиграла ряд медико - биологических областях 1. Наночастицы предоставляют возможности для проектирования и настройки свойств, которые не представляется возможным с другими типами обычных терапевтических средств. Нано-носители повышения стабильности лекарств против биодеградации, увеличивать время оборота наркотиков, преодолеть проблемы растворимости лекарства, и могут быть доработаны для адресной доставки лекарств и сопутствующих доставки агентов визуализации 1,2. Наночастиц на основе систем доставки перспективны в визуализации и лечения рака. Опухолевые vasculatures являются негерметичных макромолекул и может привести к преимущественному накоплению циркулирующих наночастиц в опухолевых участках через повышенной проницаемости и удерживания (EPR) эффект 3. Среди нескольких нано-носителей (например, липосомы, гидрогели, и полимерные мицеллы), которые активно преследуемых в качестве носителей для противораковых препаратов, полимерные мицеллы получили широкую популярность в течение гое последнее десятилетие 4,5.

Полимерное мицеллы представляют собой термодинамическую систему, которая, при внутривенном введении, потенциально могут быть ослаблены ниже критической концентрации мицелл (CMC), что приводит к их диссоциации в unimers. стратегии Поперечное сшивание были использованы для минимизации мицеллярный диссоциации на unimers. Тем не менее, чрезмерно Стабилизированные мицеллы могут предотвратить лекарство от высвобождения в целевых местах, тем самым уменьшая общую терапевтическую эффективность. Несколько химических подходов были изучены , чтобы сшивающий разлагаемые в ответ на окислительно - восстановительными или на внешние раздражители, такие как восстанавливаемых дисульфидных связей 6,7 и рН расщепл 8 или Гидролизуемый облигации 9,10.

Ранее мы уже сообщали конструкцию и синтез мицеллярных наночастиц , состоящих из дендритных холевой кислоты (СА) блока и линейный полиэтиленгликоль (ПЭГ) , сополимеры называют telodendrimers (TD) 11-15 . Эти TDs представлены как PEG нК -CAy (где п = молекулярная масса в килодальтон (К), у = количество холевой кислоты (CA) единиц). Они характеризуются малыми размерами, длительным сроком хранения, а также высокую эффективность в заключающих лекарственных средств, таких как паклитаксел (PTX) и доксорубицина (DOX) в гидрофобного ядра. Строительные блоки ТД, такие как PEG, лизин, и СА, являются биологически совместимыми, и наличие короны ПЭГ может придать "невидимости" наночастицами характер, предотвращая неспецифическую поглощение мицеллярных наночастиц ретикулоэндотелиальной системы.

Тиолированный линейно-дендритных полимеры могут быть легко сгенерирована путем введения цистеина в дендритных олиго-лизина основой нашего стандартного TDs. Данная статья представляет собой протокол для легкое производства мицеллярной системы обратимо сшитый доставки лекарственных средств путем введения дисульфидных поперечных связей в гидрофобную сердцевину TDs (Рисунок 1).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Этика заявление: Женский бестимусных голых мышей (Nu / Nu штамм), 6-8 недель, были приобретены и затем держали под патогена условиях в соответствии с рекомендациями AAALAC и позволили акклиматизироваться в течение по крайней мере 4 дней до начала каких-либо экспериментов. Все эксперименты на животных были проведены в соответствии с ведомственным руководящим принципам и в соответствии с Протоколом № 07-13119 и № 09-15584, утвержденного использования животных и Консультативного комитета по уходу административным вопросам в Университете Калифорнии, Дэвис.

1. Синтез ТД PEG 5K -Cys 4 -Ebes 8 -ca 8

  1. В круглодонную колбу, растворяют MeO-ПЭГ 5К -NH 2 (2 г, 0,4 ммоль) в 10-20 мл безводного диметилформамида (ДМФ) и холод на льду.
  2. В стеклянном стакане растворите 3 экв. 1-гидрокси-6-хлор-бензотриазола (HOBt), 3 экв. из N, N 'диизопропилкарбодиимид (DIC), и 3 экв. из (Fmoc) 2 Lys-OH в безводном DМФ (10-15 мл). Смесь перемешивают в течение 15-20 мин на магнитной мешалке.
  3. Добавьте смесь в реакционную колбу , содержащую MeO-ПЭГ 5К -NH 2. Удалите ледяную баню и реакционную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре.
  4. Подтвердить завершение реакции с данным тонкослойной хроматографии (ТСХ) 16 и тест Кайзера 17 (желтый цвет указывает на отсутствие свободного NH 2). Осадить полимерный продукт 1 (MeO ПЭГ-5K -Lys (NH-Fmoc) 2) путем добавления приблизительно 200 мл охлажденного на льду эфира в реакционную колбу. Отделить Осажденный полимер с помощью центрифугирования (6 мин при 6000 XG и 4 ° С).
    1. Для выполнения TLC, пятно образцы на силикагеле, покрытых пластинах ТСХ. С помощью смеси дихлорметан / метанол (9: 1) в качестве подвижной фазы. Обратите внимание пятна под УФ-лампой после разработки пластин ТСХ. Можно также использовать нингидриновая окрашивающий реагент для визуализации аминов пятен на плитке.
    2. Для КайИспытание Ser, место создания немного образца в стеклянной трубке, содержащей реагент Кайзера. Нагревают его при температуре 100 ° С в течение 5 мин и искать изменения цвета (если цвет раствора остается желтым, то реакция завершена).
  5. Повторно растворить продукт в безводном ДМФ (10-20 мл) и повторяют осаждение и центрифугирование (см шаг 1.4).
  6. Повторите шаг 1,5, а затем промывают осадок полимера, трижды ледяным эфиром.
  7. Перенести полимерный осадок 1 в чистую реакционную колбу и соединить колбу с высоким источником вакуума для удаления остаточного эфира.
  8. Подготовка и добавить примерно 20-30 мл 20% (об / об) 4-метилпиперидина в ДМФ к полимеру Промежуточное соединение 1. Перемешать до полного растворения. Запуск реакции в течение 3 ч.
  9. Выполнение TLC 16 и тест Кайзера (синий цвет подтверждает наличие свободного NH 2) 17 (см шаг 1.4) для подтверждения completioп реакции. Если реакция завершена, переходим к эфирному осаждения, как указано дл продукта 1 (шаги 1.4-1.6).
  10. Сушат полимерный продукт 2 (MeO-PEG 5K -Lys (NH 2) 2) под вакуумом.
  11. Проводят еще один раунд (Fmoc) 2 Lys-OH-соединением на промежуточный 2 (шаги 1.1-1.7) для создания продукта 3 (MeO-ПЭГ 5K -Lys (Lys (NH-Fmoc) 2) 2). Де-защиты (шаги 1.8-1.10) в Fmoc группы (4, MeO-ПЭГ 5K -Lys (Lys (NH 2) 2) 2) и пара (шаги 1.1-1.7) в (Fmoc) Lys (BOC) -OH к генерируют третьего поколения дендритных полилизин (5, MeO-ПЭГ 5К -Lys-Lys 2 - ((Fmoc) Lys (БОК)) 4) прекращается с четырьмя Вос- и Fmoc групп на одном конце цепи ПЭГ.
  12. Перенести полученный полимер промежуточного соединения 5 в реакционную колбу. В качествеeparate реакционную колбу, готовят 1: 1 (об / об) трифторуксусной кислоты (TFA) в дихлорметане (ДХМ). Добавить 15-20 мл смеси 1: 1 TFA / ДХМ (об / об) в полимере промежуточного соединения 5. Перемешать смесь, пока полимер полностью не растворится. Перемешивают еще в течение 3 часов.
  13. Выполнение ТСХ 16 и тест Кайзера (синий цвет подтверждает наличие свободного NH 2) 17 (этап 1.4) , чтобы подтвердить завершение реакции. Если реакция завершена, выпарить смесь полимер-в-TFA / DCM с воздухом до тех пор, пока не будет получено вязкий раствор. Переходим к эфирным осаждения, как указано дл продукта 1 (шаги 1.4-1.6). Сушат полимерный продукт 6 (MeO-PEG 5k -Lys-Lys 2 - ((Fmoc) лизином (NH 2)) 4) в вакууме.
  14. Полимерпередаточные промежуточный 6 в реакционную колбу. Используйте приблизительно 40 мл безводного ДМФ, содержащего 8 экв. из N, N -diisopropylethylamiпе (DIEA) для растворения полимера промежуточного 6. В стеклянном стакане растворите 12 экв. из HOBt, 12 экв. ДВС и 12 экв. из (Fmoc) Cys (Trt) -OH в 20-25 мл безводного ДМФ. Встряхивают в течение 10-15 мин, а затем добавляют в реакционную смесь в реакционную колбу , содержащую 6. Запуск реакции в течение ночи.
  15. Подтвердите завершение реакции с TLC 16 и тестом Кайзера (см шаг 1.4; желтый цвет указывает на отсутствие свободного NH 2) 17. Если реакция завершена, переходим к эфирному осаждения, как указано дл продукта 1 (этап 1,4-1,6), чтобы изолировать продукт 7 (MeO-PEG 5K -Lys-Lys - 2 - ((Fmoc) Lys - ((Fmoc) Cys (Trt))) 4.
  16. Выполнение Fmoc снятия защиты 7, как показано на шаге 1.8, для получения продукта 8 (PEG 5K -Lys-Lys , 2 - (Lys (NH 2) - (Cys (NH 2) (ТРТ))) 4). Пара (Fmoc) -PEG 2 -Suc-OН ( "Ebes" линкер, 24 экв.) На полимерную промежуточное с использованием процедуры , описанной выше для HOBt / ДИК-опосредованной связью с получением промежуточного соединения 9 (MeO-PEG 5K -Lys-Lys 2 -Lys 4 - (Cys (Trt) ) 4 (Ebes (NH-Fmoc)) 8).
  17. Выполните еще один раунд Fmoc - де-защиты (шаги 1.6-1.8) , чтобы получить промежуточное соединение 10 (MeO-ПЭГ 5K -Lys-Lys 2 -Lys 4 - (Cys (Trt)) 4 (Ebes (NH 2)) 8).
  18. Перенести полимера промежуточного соединения 10 в реакционную колбу и добавляют безводный ДМФ (примерно 30-40 мл) , чтобы растворить его. В другой реакционной колбе, растворяют 24 эквив. из CAOSu (полученного в соответствии с ранее опубликованным способом) в безводном ДМФ (20-30 мл) 18. Добавить 48 экв. из N, N - диизопропилэтиламин и пусть перемешивают в течение 10-15 мин. Перенести содержимое в реакционную колбу , содержащую 10 , и пусть протекания реакции Overnight.
  19. Подтвердите завершение реакции с TLC 16 и тестом Кайзера (см шаг 1.4; желтый цвет указывает на отсутствие свободного NH 2) 17. Если реакция завершена, переходим к эфирному осаждения, как указано дл продукта 1 (шаги 1.4-1.6) , чтобы изолировать продукт 11 (MeO-PEG 5K -Lys-Lys 2 -Lys 4 - (Cys (Trt)) 4 -Ebes 8 -ca 8). Диализировать его в деионизованной воде и лиофилизации образец с получением белого порошка.
  20. Поместите полимер промежуточного соединения 11 в реакционную колбу. Подготовьте и добавьте 20 мл TFA / 1,2-этандитиола (EDT) / триэтилсилан (TIS) / H 2 O (94 / 2,5 / 1 / 2,5, об / об) смеси в раствор полимера. Размешайте смесь до полного растворения. Запуск реакции в течение 4 часов. Подтверждения завершения реакции по ТСХ 16.
  21. Под вытяжкой, вдувать воздух в полимер-ТФК / EDT / TIS / H 2O смесь, пока раствор становится вязким. Переходим к эфирным осаждения, как указано дл продукта 1 (шаги 1.4-1.6), чтобы изолировать конечный продукт, 12 (ПЭГ 5K -Cys 4 -Ebes 8 -ca 8). Растворите его в ацетонитриле и лиофилизации его с получением белого порошка.

2. Получение PTX-нагруженных мицелл

  1. Подготовить PTX загруженным ПЭГ 5К -Cys 4 -Ebes 8 -ca 8 мицеллы с использованием стандартного метода испарения.
    1. Растворяют 20 мг TD с различным количеством PTX (1-9 мг) в 1 мл хлороформа (CHCl 3). Растворитель удаляют с помощью роторного испарителя с получением гомогенной, сухой полимерной пленки. Развести пленку с 1 мл фосфатно-солевым буферным раствором (PBS), вихрем, с последующей обработкой ультразвуком в течение 30 мин при частоте 40 кГц, если это необходимо, чтобы обеспечить образование мицелл наркотиков загруженным.
    2. Добавить 6 мкл 3% (вес / вес) H 2 O 2 (1 экв. На FrЕ.Е. тиоловых групп), чтобы окислить тиол группы на TD. С помощью раствора мицелл для дальнейшей характеристики , как только уровень свободных тиоловых групп остается постоянным при низких значениях, как показано с помощью теста Эллмана 19.
    3. Фильтр решение с использованием фильтра 0,22 мкм для стерилизации образца. Анализ количества лекарственного средства , загруженного в мицеллах на 20 системы ВЭЖХ после высвобождения лекарства из мицелл путем добавления 9 раз ацетонитрила и выполнения 10 мин обработки ультразвуком. С помощью колонки С18 для ВЭЖХ с ацетонитрил / вода в качестве подвижной фазы.
    4. Рассчитывают загрузки лекарственного средства в соответствии с калибровочной кривой между значениями площади ЖХВД и концентрации препарата стандартного 11.
      Примечание: Эффективность нагрузки определяется как отношение лекарственного средства, загруженного в мицеллы к начальному содержанию лекарственного средства.

3. Характеризации мицелл

  1. Измерьте распределение по размерам и размер мicelles с динамического рассеяния света (DLS) прибора 29. Выполнения измерений при комнатной температуре и поддерживать концентрацию мицелл в концентрации 1 мг / мл.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для выполнения анализа размера частиц, используют PBS в качестве заготовки, а затем записать размер частиц для реальных образцов. Возьмите показания в трех экземплярах для образцов, а затем усреднить показания.
  2. Используйте спектры флуоресценции для измерения критическая концентрация мицеллообразования (ККМ) ПЭГ 5K -Cys 4 -Ebes 8 -ca 8 до и после сшивания с пирена в качестве гидрофобного флуоресцентного зонда, как было описано выше 13,21.
    Примечание: Как правило, концентрация мицелл в диапазоне от 5 × 10 -7 до 5 × 10 -4 М.

4. Стабильность мицелл в SDS с или без восстановителей

  1. Подготовка исходных растворов додецилсульфата натрия (SDS) (7,5 мг / мл), и дисульфиды, сшитые мицеллы (1,5 мг / мл) в PBS. Далее, Uпеть Маточные растворы, сделать смесь раствора, в которой конечная концентрация ПБС в дозе 2,5 мг / мл, а концентрация мицелл находится в 1,0 мг / мл.
  2. Измерить распределение по размерам и размер (как указано в шаге 3.1) мицеллы растворов с заранее определенными интервалами времени с использованием или без присутствии 10 мМ глутатиона (GSH).

5. Анализ Гемолиз

  1. Оценка гемолитический потенциал PTX загруженным, не сшитыми мицелл (PTX-НКМ) , приготовленный в соответствии с ранее опубликованным способом 11 и PTX-нагруженных сшитых мицелл (PTX-евроигра) с использованием свежей цитратной крови из голых мышей , собранных из хвост вуаль.
    1. Сбор красных кровяных клеток путем центрифугирования пробы крови (1,0 мл) при 1000 х г в течение 10 мин, промыть их три раза ПБС, а затем вновь приостановить гранул клеток с PBS до конечной концентрации 2%.
  2. Смешайте 200 мкл суспензии эритроцитов с различными концентрациями (0,2 и 1,0мг / мл) PTX-НКМ и PTX-евроигра, соответственно, и инкубируют в течение 4 ч при 37 ° С в инкубаторе шейкере.
  3. Центрифуга мицеллы смесей эритроцитов при 3000 х г в течение 5 мин. Перенести 100 мкл надосадочной жидкости всех проб в 96-луночный планшет. Измеряют поглощение свободного гемоглобина в надосадочной жидкости при 540 нм с помощью ридера микроплиты.
    Примечание: Эритроциты, инкубированные с Тритон-100 (2%) и PBS, должны быть использованы в качестве положительных и отрицательных контролей, соответственно. Процент гемолиза эритроцитов вычисляется по следующей формуле: RBC = гемолиз (OD образца - OD отрицательный контроль) / (OD положительного контроля - О.Д. отрицательный контроль) х 100%.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Получение и определение характеристик наркотиков загруженным, дисульфид Поперечно-сшитый мицелл

Амфифильные полимерные ПЭГ 5K -Cys 4 -Ebes 8 -ca 8 представляет собой дендритный полимер , способный образовывать дисульфидную сшитый систему мицеллярный для доставки лекарств рака. Конструктивно оно определяется как дендритные олигомера желчных кислот (гидрофобный домен) соединен с одним...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Несколько наночастиц были исследованы на предмет их потенциального использования в доставке лекарств. Липосомальных доксорубицин и паклитаксел (PTX) -loaded сывороточного альбумина человека нано-агрегаты относятся к числу nanotherapeutics, одобренных FDA для лечения рака. Тем не менее, несмотря на то клинически эффективен, обе эти nanotherapeutics относительно "больших" размеров, и они имеют тенденцию к накоплению в печени и легких. Полимерные мицеллы с относительно меньшими размерами частиц и высоких мощносте...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Й. Ли и К.С.Л. являются изобретателями находящегося на рассмотрении патента на обратимо сшитые мицеллные системы (заявка на патент США 61/48574). К.С.Л. является ученым-основателем компании LamnoTherapeutics Inc., которая планирует развивать нотерапеутику, описанную в рукописи. Остальные авторы заявляют об отсутствии конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

Авторы благодарят г-жу Алишу Кнудсон за помощь редактора. Они также хотели бы выразить признательность за финансовую поддержку со стороны NIH/NCI (3R01CA115483, K.S.L.), DOD PRMRP Award (W81XWH-13-1-0490, K.S.L.), NIH/NCI (1R01CA199668, к Y.L.) и NIH/NICHD (1R01HD086195, к Y.L.).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
MeO-PEG5K-NH2Rapp Polymere125000-2
Fmoc-Lys(fmoc)-OHAaptecAFK107
Fmoc-Lys(Boc)-OHAnaspecAS-20132
Fmoc-Cys(Trt)-OHAapptecAAC105
ДиметилформамидFisher ScientificBP1160-4
Этиловый эфирFisher ScientificE134-20
N,N-диизопропилэтиламинSigma AldrichD125806
трифторуксусная кислотаSigma AldrichT6508Коррозионный, ручка с осторожностью
4-метилпиперидинAlfa-AesarL-02709
Ebes линкерAnaspecAS-61924
Холевая кислотаSigma AldrichC1129
1,2-этанедитиолSigma Aldrich02390Ручка внутри вытяжного шкафа. Отбеливайте перчатки после использования.
ТриизопропилсиланSigma Aldrich233781
Хлороформ (безводный)Sigma Aldrich288306
Раствор перекиси водорода 30%Aaron IndustriesNA
HoBt-ClAaptecCXZ096
DICSigma AldrichD125407
Самки атимических обнаженных мышей (штамм Nu/Nu), 6– 8 недель Харлан(Ливермор, Калифорния)

Ссылки

  1. Zhang, L., et al. Nanoparticles in medicine: therapeutic applications and developments. Clin. Pharmacol. Ther. 83, 761-769 (2008).
  2. Wang, A. Z., Langer, R., Farokhzad, O. C. Nanoparticle Delivery of Cancer Drugs. Annu. Rev. Med. 63, 185-198 (2012).
  3. Iyer, A. K., Khaled, G., Fang, J., Maeda, H. Exploiting the enhanced permeability and retention effect for tumor targeting. Drug Disc. Today Targets. 11, 812-818 (2006).
  4. Morachis, J. M., Mahmoud, E. A., Almutairi, A. Physical and chemical strategies for therapeutic delivery by using polymeric nanoparticles. Pharmacol. Rev. 64, 505-519 (2012).
  5. Kamaly, N., Xiao, Z., Valencia, P. M., Radovic-Moreno, A. F., Farokhzad, O. C. Targeted polymeric therapeutic nanoparticles: design, development and clinical translation. Chem. Soc. Rev. 41, 2971-3010 (2012).
  6. Li, Y. L., et al. Reversibly stabilized multifunctional dextran nanoparticles efficiently deliver doxorubicin into the nuclei of cancer cells. Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 48, 9914-9918 (2009).
  7. Miyata, K., et al. Block catiomer polyplexes with regulated densities of charge and disulfide cross-linking directed to enhance gene expression. J. Am. Chem. Soc. 126, 2355-2361 (2004).
  8. Chan, Y., Wong, T., Byrne, F., Kavallaris, M., Bulmus, V. Acid-labile core cross-linked micelles for pH-triggered release of antitumor drugs. Biomacromolecules. 9, 1826-1836 (2008).
  9. Rijcken, C. J., Snel, C. J., Schiffelers, R. M., van Nostrum, C. F., Hennink, W. E. Hydrolysable core-crosslinked thermosensitive polymeric micelles: synthesis, characterisation and in vivo studies. Biomaterials. 28, 5581-5593 (2007).
  10. Talelli, M., et al. Core-crosslinked polymeric micelles with controlled release of covalently entrapped doxorubicin. Biomaterials. 31, 7797-7804 (2010).
  11. Xiao, K., et al. A self-assembling nanoparticle for paclitaxel delivery in ovarian cancer. Biomaterials. 30, 6006-6016 (2009).
  12. Li, Y., et al. A novel size-tunable nanocarrier system for targeted anticancer drug delivery. J. Control. Release. 144, 314-323 (2010).
  13. Li, Y., et al. Well-defined, reversible disulfide cross-linked micelles for on-demand paclitaxel delivery. Biomaterials. 32, 6633-6645 (2011).
  14. Li, Y., et al. Well-defined, reversible boronate crosslinked nanocarriers for targeted drug delivery in response to acidic pH values and cis-diols. Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 51, 2864-2869 (2012).
  15. Li, Y., et al. A smart and versatile theranostic nanomedicine platform based on nanoporphyrin. Nat. Commun. 5, (2014).
  16. Belenki, B. G., Gankina, E. S. Thin-Layer chromatography of polymers. J. Chromatogr. A. 141, 13-90 (1977).
  17. Kaiser, E., Colescott, R. L., Bossinger, C. D., Cook, P. I. Color test for detection of free terminal amino groups in the solid-phase synthesis of peptides. Anal. Biochem. 34, 595-598 (1970).
  18. Pandey, P. S., Rai, R., Singh, R. B. Synthesis of cholic acid-based molecular receptors: head-to-head cholaphanes. J. Chem. Soc., Perkin Trans 1. , 918-923 (2002).
  19. Riddles, P. W., Blakeley, R. L., Zerner, B. Reassessment of Ellman's reagent. Methods Enzymol. 91, 49-60 (1983).
  20. Ahuja, S., Rasmussen, H. Overview of HPLC method development for pharmaceuticals. HPLC Method Development for Pharmaceuticals. , Separation Science and Technology; 8. Elsevier Academic Press Inc. 1-11 (2007).
  21. Li, Y., Pan, S., Zhang, W., Du, Z. Novel thermo-sensitive core-shell nanoparticles for targeted paclitaxel delivery. Nanotechnology. 20 (6), 065104(2009).
  22. Kato, J., et al. Disulfide cross-linked micelles for the targeted delivery of vincristine to B-cell lymphoma. Mol. Pharm. 9, 1727-1735 (2012).
  23. Lu, S. C. Regulation of glutathione synthesis. Mol. Aspects Med. 30, 42-59 (2009).
  24. Xiao, K., et al. "OA02" peptide facilitates the precise targeting of paclitaxel-loaded micellar nanoparticles to ovarian cancer in vivo. Cancer Res. 72, 2100-2110 (2012).
  25. Koo, A. N., et al. Disulfide-cross-linked PEG-poly(amino acid)s copolymer micelles for glutathione-mediated intracellular drug delivery. Chem. Commun. 28, 6570-6572 (2008).
  26. McLellan, L. I., Wolf, C. R. Glutathione and glutathione-dependent enzymes in cancer drug resistance. Drug. Resist. Update. 2, 153-164 (1999).
  27. Karala, A. R., Lappi, A. K., Saaranen, M. J., Ruddock, L. W. Efficient peroxide-mediated oxidative refolding of a protein at physiological pH and implications for oxidative folding in the endoplasmic reticulum. Antioxid. Redox Signal. 11, 963-970 (2009).
  28. Gabizon, A., et al. Cancer nanomedicines: closing the translational gap. Lancet. 384, 2175-2176 (2014).
  29. Nanotrac Nanotechnology Particle Size Measurement Solutions. , Available from: http://www.vahitech.com/Assets/Nano(US)Web.pdf (2006).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи