Методическая статья

Высокое разрешение оптического Картирование мыши китайско-предсердного узла

16K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/54773

⸱

2 декабря 2016 г.

 , 
1Department of Medicine, University of Wisconsin-Madison School of Medicine and Public Health

В этой статье

Краткое содержание

Здесь мы приводим протокол для оптического картирования электрической активности от мыши правое предсердие и особенно синоатриального узла, при высокой пространственным и временным разрешением.

Аннотация

Дисфункции сино-предсердных узлов (SAN) и связанные с ними осложнения являются важными причинами заболеваемости у пациентов с сердечными заболеваниями. Разработка новых фармакологических методов лечения для лечения этих пациентов опирается на глубокое понимание как нормальной физиологии, так и патофизиологии САН. Среди исследований кардиостимуляции мышиный SAN широко используется из-за его возможности модификации экспрессии различных генов, которые кодируют ионные каналы SAN или белки, обрабатывающие кальций. Новые данные электрофизиологических и гистологических исследований также доказали репрезентативность и сходство структуры и функций САН у мышей с более крупными млекопитающими, включая наличие специализированных путей проводимости от САН к предсердиям и сложную иерархию кардиостимуляторов в САН. В последнее время метод оптического картирования значительно облегчил изучение и исследование происхождения возбуждения и проводимости внутри и из САН мыши, что, в свою очередь, расширило понимание САН и принесло пользу клиническим методам лечения заболеваний, связанных с дисфункцией САН. В данной рукописи мы подробно описали, как выполнить оптическое картирование мышиной САН из интактного сердца, перфузируемого по Лангендорфу, и из изолированного предсердного препарата. Этот протокол является полезным инструментом для улучшения понимания физиологии и патофизиологии САН у мышей.

Введение

Новым научным прорывам, которые приводят к скачкам в понимании физиологии человека, часто предшествуют технологические достижения. Флуоресцентное оптическое картирование, например, позволяет исследовать множество физиологических параметров как в клетках, так и в тканях. 1,2 Это значительно улучшило наше понимание того, как анатомическая структура связана с электрофизиологическими функциями и дисфункциями. В сердце естественные кардиостимуляторы и проводящие системы, такие как синоатриальный узел (SAN) и атриовентрикулярное соединение, состоят из узловых миоцитов, которые изолированы окружающими предсердными миоцитами. 3-5 Такая организация создает сложные трехмерные структуры со специализированными электрическими свойствами. Было признано, что как структурное, так и функциональное ремоделирование этих структур кардиостимулятора образует значительные электрофизиологические гетерогенности. 6,7 Понимание механизма, лежащего в основе того, как такие гетерогенности приводят к дисфункциям САН и аритмогенезу предсердий, значительно улучшит клиническое лечение этих заболеваний. Для этого требуется метод визуализации распространения электрических сигналов на тканевом уровне, такой как оптическое картирование.

В последнее время накопление доказательств доказало прогресс оптического картирования в исследованиях электрофизиологии и патологии предсердий. 2 Тем не менее, новые и тщательные исследования зависят от точной интерпретации экспериментальных данных, достоверность и стабильность которых зависят от тщательных протоколов экспериментов. Генетически модифицированные мыши широко используются для исследований в качестве животных моделей заболеваний человека, включая синдром больного синуса, аномалии кардиостимулятора и предсердные аритмии. 6,8-11 Таким образом, комбинация флуоресцентного оптического картирования с трансгенными мышиными моделями дает мощный инструмент для изучения сердечных электрических аномалий, связанных с различными патологиями. В этой статье мы представляем протокол для оптического картирования высокого разрешения мыши SAN и атриума. В частности, мы обсуждаем и сравниваем различные подходы к загрузке красителя, временные эффекты на обесцвечивание красителя и стабильность сердечного ритма во время эксперимента.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все эксперименты проводились в соответствии с национальными институтами здравоохранения Руководство по уходу и использованию лабораторных животных (NIH Pub. No. 80-23). Все методы и протоколы, используемые в этих исследованиях были одобрены в Университете штата Висконсин уходу и использованию животных комитета Протокол соответствии с рекомендациями по уходу и использованию лабораторных животных, опубликованных NIH (публикация № 85-23, пересмотренная в 1996 году). Все животные, используемые в данном исследовании, получали гуманного ухода в соответствии с Руководством по уходу и использованию лабораторных животных.

1. Сердце Снятие и Langendorff Перфузия

  1. До изоляции сердца, теплого Тироде раствора до 37 ° С с использованием водяной бани и водяную рубашку.
  2. Обезболить мышь с 5% изофлуран / 95% O 2.
  3. Обеспечить надлежащий уровень анестезии, проверяя потерю болевой рефлекс.
  4. Выполнение торакотомии. Откройте сундук с помощью криволинейных 5.5 "Майо ножницы и 5,5" Келли кровоостанавливающим дляCEPS, чтобы сделать 1 см разрезать на передней части грудной клетки.
    1. Быстро извлечь сердце из груди (в течение 30 секунд). Используйте 4 "изогнутые щипцы Iris, чтобы захватить легочные ткани и вырезать легких, вилочковой железы и сердца вместе с перикарда с использованием 4,3" Iris ножницы. Не хватайте сердце напрямую.
    2. Промойте его в насыщенной кислородом (95% O 2/5% CO 2), с постоянной температурой (36,8 ± 0,4 ° С) модифицированного раствора Тирода. Используйте следующий состав раствора (в мМ): NaCl 128,2, 4,7 KCl, 1,19 NaH 2 PO 4, 1,05 MgCl 2, 1,3 CaCl 2, 20,0 NaHCO 3 и 11,1 глюкозы (рН 7,35 ± 0,05).
  5. В то время как купались в том же растворе, идентификации легких, вилочковой железы и жировой ткани. Осторожно рассекают их от сердца. Используйте изогнутые 3 "Vannas-Тюбинген ножницы и 4,3" # 5 пинцетом.
  6. Затем определить аорту и иглу его на заказ 21 G канюлю. Используйте две изогнутые 4,3 "# 5B силыпс.
  7. После пункции, одновременно заливать (через канюлю при скорости потока ~ 5 мл / мин, это должно быть отрегулировано на основании давления в аорте, смотри ниже) и переливать (в бане при скорости потока ~ 50 мл / мин) сердце с подогреваемой и отфильтрованного раствора Тироде в течение всего эксперимента. Пропускают перфузионный раствор через нейлоновый фильтр 11 мкм в линию, чтобы предотвратить засорение коронарного кровообращения.
  8. С помощью датчика давления (или манометр), соединенный через 3-ходовым запорным краном Luer замок к перфузионной линии, мониторинг давления в аорте и поддерживать его от 60 до 80 мм ртутного столба. Регулировка скорости перфузии при необходимости для поддержания давления в аорте в пределах этого диапазона.

2. Оптический Картирование SAN от Лангендорфа-перфузировались всего сердца

  1. измерительные приборы
    1. Поместите сердце горизонтально и пин-код желудочковой конька до дна кремния покрытием камеры с помощью штифта диаметром 0,1 мм до рРевент поток индуцированного движения во время эксперимента. 12
    2. Вставьте небольшую (.012 "ID х .005") силиконовую трубку в левый желудочек (ЛЖ) через легочную вену, левые предсердия (LA) и митральный клапан (MV). Закрепить трубку шелковым швом (4-0) к звучащей соединительной ткани.
    3. Расположите сердце его задней стороной вверх (рис 1А, левая панель).
    4. Pin края придатка РА (RAA) к кремнию нижней части камеры с использованием 0,1 мм Диаметр minutien штифтов. Настройте свой уровень, чтобы сделать заднюю поверхность плоского RA и позволяют ему быть расположены фокальной плоскости камеры. Это позволит оптические измерения от максимальной площади поверхности предсердия.
    5. Петля превосходит (SVC) и низший (IVC) полая шелковым швом (4-0), растягивать и прикрепить другой конец шовного материала в нижней части камеры кремния покрытием (смотри рисунок 3 , а ). Убедитесь, что швы не блокируютоптическое поле зрения.
    6. Поместите заказные кардиостимуляции электрод на краю УПП. Для того, чтобы электроды, использование кремния с покрытием 0,25 мм Диаметр серебряные провода, с помощью 0,5 мм межэлектродного расстояния и лишенная кремния на длине 1 мм в конце стимуляцией. Затем поместите два ЭКГ 12 мм иглы (29 калибра) монополярных электродов вблизи основания правого и левого желудочков. Поместите заземляющий электрод ЭКГ вблизи вершины желудочков.
  2. Окрашивание
    1. Так как флуоресцентные красители и электромеханическое разобщитель blebbistatin являются светочувствительные, выполнять все процедуры, описанные ниже в темной комнате. Во-первых подготовить краситель напряжения чувствительных RH-237 или ди-4-ANNEPS в качестве исходного раствора, 1,25 мг / мл в диметилсульфоксиде (2,5 мМ), аликвоты его (30 мкл каждый) и хранить аликвоты при -20 ° С.
    2. Развести 5-10 мкл исходного раствора красителя в 1 мл подогретого раствора Тироде (37 ° C), а затем вводят его в коронарной перфузии линиив течение 5-7 мин с использованием Luer инъекционный порт в режиме реального времени.
    3. Подготовка blebbistatin в качестве исходного раствора (2 мг / мл в диметилсульфоксиде, 6,8 мМ) в заранее и хранить его при температуре 4 ° С.
    4. Через 20 мин стабилизации, добавляют 0,5 мл подогретого (37 ° С) blebbistatin в перфузату и разбавить 0,1 мл blebbistatin в 1 мл подогретого (37 ° С) раствором Тироде. Затем вводят в коронарную перфузионной линии в течение периода 5-7 мин с использованием Luer инъекционный порт в режиме реального времени.

3. Оптическое отображение SAN с изолированной мерцательной Подготовка

  1. измерительные приборы
    1. Для изолированного предсердия препарата, изолировать и вводить иглу сердце, как описано выше, на этапах 1.1-1.5 для приготовления целого сердца.
    2. Рассеките желудочки от передней стороны. Смотрите рисунок 1А, правая панель, вырезать # 1 для деталей.
    3. Откройте RA путем разрезания через трехстворчатый ваLVE (TV) вдоль оси TV-SVC. Смотрите рисунок 1А, правая панель, вырезать # 2 для деталей.
    4. Обрежьте медиальной конечности гребешка, чтобы открыть терминальной САР. Смотрите рисунок 1А, правая панель, вырезать # 3.
    5. Открыть переднюю предсердная свободной стенки, выполняя разрез от средней линии предыдущего разреза № 3 к краю правого нижнего угла УПП, сплющить и прикрепить предсердии свободной стенки в нижней части камеры, силиконовой оболочкой. См направлении , обозначенном стрелкой полой на фиг.1А, вырезать # 4. Сохранение ободок желудочковой ткани для закрепления препарат, чтобы предотвратить повреждение предсердия.
    6. Кроме того, открытая LA разрезанием через MV вдоль MV-верхнем углу придаток LA (LAA).
    7. Чтобы открыть LAA, вырезанный из середины раскрытой LAA, через переднюю стенку предсердия свободной до тех пор, вблизи средней ободу LAA.
    8. Откройте переднюю предсердная свободной стенки ALOнг в том же направлении, а затем сплющить и прикрепить ее к нижней части камеры с Sylgard покрытием.
    9. Частично удалить межпредсердной перегородки ткани. Это позволит уменьшить рассеяние оптического сигнала от ткани, которая не находится в фокусе. Поэтому, как LA и RA, а также SAN и предсердно-желудочковой узел (AVJ) доступны в данном препарате (Рисунок 1В).
    10. Подними окончательную подготовку примерно на 0,5 мм от дна камеры кремния покрытием, с тем чтобы суперфузии от обоих эпикарда и эндокарда поверхностей.
    11. Переливать препарат с подогреваемой (37 ° С) раствор Тироде при постоянной скорости ~ 12 мл / мин для целенаправленного потока, расположенного вблизи ВПВ и ~ 30 мл / мин для ванны суперфузии.
    12. Поместите на заказ расхаживая Ag / AgCl 2 электрода (0,25 мм диаметр) на краю рассеченной RAA. Затем поместите два ЭКГ 12 мм иглы (29G) электроды (монополярных) вблизи RAA и LAA, соответственно. Поместите землю ЭКГ избранныйехал рядом с ÀVj.
  2. Окрашивание
    1. Выполните непосредственное применение напряжения чувствительного красителя (RH-237 или ди-4-ANNEPS). Для этого, разбавленные 1-2 мкл исходного раствора красителя в 1 мм подогретой Тироде раствора (37 ° C) и медленно высвобождают разбавленную краску на поверхность препарата с использованием 1 мм пипетку.
    2. В качестве альтернативы, выполнять предсердии окрашивание с напряжением чувствительных красителя через коронарную перфузию Лангендорфа-перфузионного сердца, подобным описанному выше для получения целого сердца (шаги 2.2.1-2.2.2).
      1. После коронарной перфузии окрашивания, изолировать предсердии препарат, как описано. Выполните дополнительное поверхностное окрашивание, когда это необходимо для достижения удовлетворительного уровня флуоресценции. Быстрый предсердия изоляция не отбеливать краситель и не влияет на качество окрашивания.
    3. Зафиксировать препарат с электромеханическим разобщитель, blebbistatin. Развести 3-5 мкл BLEbbistatin маточного раствора в утепленной Тироде растворе (37 ° C) и медленно высвобождают разбавленный blebbistatin на поверхности препарата и окружающего раствора. Так как blebbistatin было показано , чтобы быть чувствительной к свету, 13,14 избегать длительного воздействия света во время подготовки и окрашивания.
    4. Выполните дополнительное приложение blebbistatin столько, сколько необходимо для подавления сокращения. Обычно до 3 дополнительных приложений (3-5 мкл на каждое приложение) может быть использовано для подавления артефактов движения достаточно для того, чтобы точно реконструировать SAN и предсердной активации.
    5. Добавить дополнительные 0,5 мл подогретой blebbistatin в перфузату. Во время этой процедуры приостановки суперфузии в течение 30 секунд, чтобы краситель / blebbistatin для окрашивания мерцательной ткани.

4. Оптическая Mapping Set Up

Примечание:. Подробное описание оптической системы отображения обеспечивается в другом месте 12

  1. Используйте камеру с помощью ТЭМменную разрешение 2000 кадров / сек или выше, а также ряд конденсаторных линз для достижения пространственного разрешения 100 мкм / пиксель или выше. Это необходимо для восстановления активации SAN и intranodal распространения.
  2. Для уменьшения артефактов движения от вибрационного раствора, фиксируют небольшое стеклянное покрытие на поверхности раствора над сердцем / изолированном предсердии препарата.
  3. С помощью возбуждения света (520 ± 45 нм) обеспечивается постоянным током, низким уровнем шума галогенной лампой. Прямой отфильтрованный светового луча на подготовку с помощью гибкого раздвоенный световод.
  4. Фильтр излучаемый флуоресценции длиннофокусной фильтром (> 715 нм). Сбор, оцифровать и сохранить полученные флуоресцентного сигнала на программном обеспечении компьютера с помощью предоставленного производителем камеры.

5. Обработка данных

Примечание: Оптическое отображение данных собирается и хранится в виде последовательности матриц интенсивности флуоресценции в различные моменты времени. Каждый пиксель represeNTS меру интенсивности флуоресценции, полученной от конкретного местоположения на приготовление препарата ткани в определенный момент времени. Фон флуоресценции автоматически удаляется на пиксель для обеспечения лучшей визуализации изменений флуоресценции, полученных изменений мембранного напряжения и перевернутых, чтобы соответствовать потенциалов действия (AP), измеренных с помощью систем микроэлектродов. Подробная информация о различных этапах обработки данных оптических изображений, в том числе сегментации изображений, пространственной фильтрации, временной фильтрации и удаления исходных условий дрейфа, приводятся в сфокусированного обзоре. 15

  1. Вручную или с помощью специального алгоритма (например, пороговая или края обнаружения) 15 , чтобы определить границы ткани, создать двоичную маску 1 (входит пикселей) и 0 (исключенных пикселей) и примените маску к каждому кадру в последовательности. Этот процесс создает бинарное изображение, которое выдвигает на первый план области, представляющие интерес для дальнейшей обработки.
  2. Для улучшения отношения сигнал-шум оптческие данные, фильтрации сигналов в отдельных областях, представляющих интерес. Для этого используют пространственные (т.е. усреднение соседних флуоресцентных пикселей , как это определено желательном бен свертка или ядра, например 3 х 3 , или, для зашумленных данных, размером 5 х 5) и / или временной фильтрации (например, Баттерворта, типа Чебышева 1, Чебышева типа 2, Эллиптические и т.д.) (Рисунок 2). Имейте в виду возможность отфильтрованных индуцированных артефактов при интерпретации данных. Для получения более подробной информации см обзор. 15
  3. Удалить дрейф базовой линии в оптических записей, когда это необходимо (с помощью фильтров верхних частот или полиномиальная подгонка к исходному сигналу), а затем нормализовать каждый сигнал пикселя от 0 (минимальная флуоресценция) до 1 (максимум флуоресценции).
  4. Выберите окно времени, который охватывает время активации всех пикселей для одного распространения AP. Назначают каждого пикселя свое время активации в момент максимума производной хода вверх (дР / DT макс, где F является fluorescenИнтенсивность в.п.). Используя все время активации пикселей, восстановить изохронном карту активации. Каждый изохрона будет, таким образом, показывают пиксели, активированные в то же время.
  5. Для восстановления карты распределения длительности АР (APD), для каждого пикселя вычислить длительность между временем активации и времени на определенном уровне реполяризации (например, при 80% реполяризации, APD 80). Используя все значения пикселов APD, реконструировать APD распределения изохронном карту. Каждый изохрона будет, таким образом, показывают пиксели с одинаковыми ЛФД.
  6. Для расчета скорости проводимости для распространения AP, соответствовать поверхности подготовки к данным времени активации, рассчитанных в 5.4. Для этого используйте полиномиальное поверхности фитинга или локальную поверхность ядра сглаживания, а затем рассчитать локальные векторы скорости проводимости от градиента подогнанной поверхности.
  7. Чтобы создать карту реполяризации, назначить каждого пикселя свое время реполяризации, определяется как максимальное второй производной (d 2 F / DT2) оптического сигнала на конце OAP, или во время 90% реполяризации.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Оптический Картирование неповрежденном SAN от Лангендорфа-перфузию сердца
Типичный пример контура карты активации РА реконструированного для спонтанного синусового ритма показана на рисунке 3 для Langendorff-перфузируемом сердце мыши. Ранняя точка активации находится в пределах intercaval области вблизи SVC где САН анатомически определена. 3,16 активации карты контура Два RA , полученные при 1,0 и 0,5 мс с частотой дискретизации показан...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Здесь мы представили два типа препаратов мыши SAN: 1) неповрежденными SAN в Лангендорфа-перфузионного целого сердца, и 2) САН в изолированном, открыт предсердный препарат. Эти два вида подготовки служат различным экспериментальных целей. В Лангендорфа-перфузионного препарата все сердце, интактный предсердный структура сохраняется , которая позволяет исследовать сложные предсердные аритмии , такие как фибрилляция предсердий, а также взаимодействие между SAN и предсердия во время возвратных тахиаритмий. 6 В отл...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Конфликты интересов не декларируются.

Благодарности

Нас поддерживает стартап Медицинской школы Университета Висконсин-Мэдисон (A.V.G.).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
водяная рубашкаRadnoti1660 Series Тканевая ванна для больших органов или отдельных клеток Процедуры
водяной бани / циркуляционного насосаFisher Scientific1016S
Усилитель давленияAD InstrumentsMLT0670
EMD Нейлоновые сетчатые фильтры Millipore Nylon Net ФильтрыFisher ScientificNY1102500
Датчик давленияAD ИнструментыMLT0670
нержавеющей стали Мелкие штифты - диаметр 0,1 ммFine Science Tools26002-10 
Перфузионный насосWorld Precision InstrumentsPERIPRO-4LS
Супертермоядерный насосWorld Precision InstrumentsPERIPRO-4HS
Vannas Tubingen ножницы World Precision Instruments503379
щипцы DumontWorld Precision Instruments501201, 500085
ножницы МайоWorld Precision Instruments501750
Гемостатические щипцы КеллиWorld Precision Instruments501241
щипцы с радужной оболочкойглаза World Precision Instruments15917
Iris ножницыWorld Precision Instruments501263
ЭКГ 12 мм игольчатые (29-го калибра) электроды (монополярные)AD InstrumentsMLA1203
встроенный порт впрыска ЛюэраIbidi10820
CMOS-камера Ultima-L SciMediaMiCAM-05 
галогенная лампаMoritex США IncMHAB-150W
NaClFisherScientific S271-1
CaCl2 (2H2O)Fisher ScientificC79-500
KClFisher ScientificS217-500
MgCl2 (6H2O)Fisher ScientificM33-500
2PO4 (H2O)FisherScientific S369-500
NaHCO3Fisher ScientificS233-3
D-глюкозаFisher ScientificD16-1
BlebbistatinTocris Bioscience1760
RH237ThermoFisher ScientificS1109
Диметилсульфоксид (ДМСО)Sigma-AldrichD2650
изоляции

Ссылки

  1. Efimov, I. R., Nikolski, V. P., Salama, G. Optical imaging of the heart. Circ Res. 95 (1), 21-33 (2004).
  2. Herron, T. J., Lee, P., Jalife, J. Optical imaging of voltage and calcium in cardiac cells & tissues. Circ Res. 110 (4), 609-623 (2012).
  3. Fedorov, V. V., Glukhov, A. V., Chang, R. Conduction barriers and pathways of the sino-atrial pacemaker complex: their role in normal rhythm and atrial arrhythmias. Am J Physiol Heart Circ Physiol. , (2012).
  4. Boyett, M. R., Honjo, H., Kodama, I. The sinoatrial node, a heterogeneous pacemaker structure. Cardiovasc Res. 47 (4), 658-687 (2000).
  5. Glukhov, A. V., et al. Sinoatrial Node Reentry in a Canine Chronic Left Ventricular Infarct Model: The Role of Intranodal Fibrosis and Heterogeneity of Refractoriness. Circ Arrhythm Electrophysiol. , (2013).
  6. Glukhov, A. V., et al. Calsequestrin 2 deletion causes sinoatrial node dysfunction and atrial arrhythmias associated with altered sarcoplasmic reticulum calcium cycling and degenerative fibrosis within the mouse atrial pacemaker complex. Eur Heart J. 36 (11), 686-697 (2015).
  7. John, R. M., Kumar, S. Sinus Node and Atrial Arrhythmias. Circulation. 133 (19), 1892-1900 (2016).
  8. Swaminathan, P. D., et al. Oxidized CaMKII causes cardiac sinus node dysfunction in mice. J Clin Invest. 121 (8), 3277-3288 (2011).
  9. Glukhov, A. V., Fedorov, V. V., Anderson, M. E., Mohler, P. J., Efimov, I. R. Functional anatomy of the murine sinus node: high-resolution optical mapping of ankyrin-B heterozygous mice. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 299 (2), H482-H491 (2010).
  10. Egom, E. E., et al. Impaired sinoatrial node function and increased susceptibility to atrial fibrillation in mice lacking natriuretic peptide receptor C. J Physiol. 593 (5), 1127-1146 (2015).
  11. Torrente, A. G., et al. Burst pacemaker activity of the sinoatrial node in sodium-calcium exchanger knockout mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (31), 9769-9774 (2015).
  12. Lang, D., Sulkin, M., Lou, Q., Efimov, I. R. Optical mapping of action potentials and calcium transients in the mouse heart. J Vis Exp. (55), e3275(2011).
  13. Fedorov, V. V., et al. Application of blebbistatin as an excitation-contraction uncoupler for electrophysiologic study of rat and rabbit hearts. Heart Rhythm. 4 (5), 619-626 (2007).
  14. Swift, L. M., et al. Properties of blebbistatin for cardiac optical mapping and other imaging applications. Pflugers Arch. 464 (5), 503-512 (2012).
  15. Laughner, J. I., Ng, F. S., Sulkin, M. S., Arthur, R. M., Efimov, I. R. Processing and analysis of cardiac optical mapping data obtained with potentiometric dyes. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 303 (7), H753-H765 (2012).
  16. Liu, J., Dobrzynski, H., Yanni, J., Boyett, M. R., Lei, M. Organisation of the mouse sinoatrial node: structure and expression of HCN channels. Cardiovasc Res. 73 (4), 729-738 (2007).
  17. Verheijck, E. E., et al. Electrophysiological features of the mouse sinoatrial node in relation to connexin distribution. Cardiovasc Res. 52 (1), 40-50 (2001).
  18. Krishnaswamy, P. S., et al. Altered parasympathetic nervous system regulation of the sinoatrial node in Akita diabetic mice. J Mol Cell Cardiol. 82, 125-135 (2015).
  19. Nygren, A., Lomax, A. E., Giles, W. R. Heterogeneity of action potential durations in isolated mouse left and right atria recorded using voltage-sensitive dye mapping. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 287 (6), H2634-H2643 (2004).
  20. Efimov, I. R., Fedorov, V. V., Joung, B., Lin, S. F. Mapping cardiac pacemaker circuits: methodological puzzles of the sinoatrial node optical mapping. Circ Res. 106 (2), 255-271 (2010).
  21. Aschar-Sobbi, R., et al. Increased atrial arrhythmia susceptibility induced by intense endurance exercise in mice requires TNFalpha. Nat Commun. 6, 6018(2015).
  22. Hansen, B. J., et al. Atrial fibrillation driven by micro-anatomic intramural re-entry revealed by simultaneous sub-epicardial and sub-endocardial optical mapping in explanted human hearts. Eur Heart J. 36 (35), 2390-2401 (2015).
  23. Lang, D., Petrov, V., Lou, Q., Osipov, G., Efimov, I. R. Spatiotemporal control of heart rate in a rabbit heart. J Electrocardiol. 44 (6), 626-634 (2011).
  24. Kanlop, N., Sakai, T. Optical mapping study of blebbistatin-induced chaotic electrical activities in isolated rat atrium preparations. J Physiol Sci. 60 (2), 109-117 (2010).
  25. Glukhov, A. V., Flagg, T. P., Fedorov, V. V., Efimov, I. R., Nichols, C. G. Differential K(ATP) channel pharmacology in intact mouse heart. J Mol Cell Cardiol. 48 (1), 152-160 (2010).
  26. Wu, J., et al. Altered sinoatrial node function and intra-atrial conduction in murine gain-of-function Scn5a+/DeltaKPQ hearts suggest an overlap syndrome. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 302 (7), H1510-H1523 (2012).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи