Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Получение первичных смешанных глиальных культур от взрослых спинного мозга мыши ткани

10.4K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/54801

⸱

19 ноября 2016 г.

 , 
1Department of Biomedical Sciences, College of Osteopathic Medicine, University of New England

В этой статье

Краткое содержание

Развитие невропатической боли включает в себя патологические изменения спинного мозга глиальных клеток. Надежная система глиальных культуры происходит от взрослой ткани спинного мозга и предназначен для изучения этих клеток в пробирке отсутствует. Таким образом, мы покажем здесь, как установить первичные смешанные глиальные культуры от взрослых мышей ткани спинного мозга.

Аннотация

Он общепризнан, что спинного мозга глиальные ответы вносят значительный вклад в развитие нейропатической боли. Потрясающая информация о глиальных деятельности на клеточном и молекулярном уровнях было получено с помощью лабораторных систем культивирования клеток в. Системы ин витро , используемые, в основном , включают в себя первичный глии , полученный из головного мозга новорожденных кортикальной ткани и линии иммортализованных клеток. Однако эти системы не могут отражать характеристики спинного мозга глиальных клеток в естественных условиях. Для дальнейшего изучения роли спинного мозга глиальных клеток в развитии периферических нервов травмы , вызванной невропатической боли с использованием системы культуры , которая лучше отражает состояние в естественных условиях, наша лаборатория разработала метод для установления первичного спинного мозга смешанных глиальных культур от взрослых мышей. Вкратце, спинной мозг собраны от взрослых мышей и обрабатываются через папаином с последующим удалением миелина с притонов черезность-градиентной среды. Одноклеточных суспензий культивируют в модифицированной Eagle средах полном Дульбекко (cDMEM) с добавлением 2-меркаптоэтанол (2-ME) при 35,9 о С. Эти условия культивирования были оптимизированы специально для роста смешанных глиальных клеток. В этих условиях, клетки готовы к использованию для проведения экспериментов между 12 - 14 г (клетки, как правило, находятся в лог-фазе в течение этого времени) после установления культуры (D 0) и может быть сохранена в условиях культивирования до D 21. Эта система культуры можно использовать для исследования реакции спинного мозга глиальных клеток при стимуляции различными веществами и агентами. К тому же невропатической боли, эта система может быть использована для изучения ответов глиальные при других заболеваниях, которые включают патологические изменения спинного мозга глиальных клеток.

Введение

Хроническая боль является серьезной проблемой здравоохранения , которая затрагивает около 100 миллионов взрослых в Соединенных Штатах, с предполагаемой годовой стоимостью до $ 635 миллиардов 1. Монтажные доказательства показали значительный вклад спинного мозга глиальных клеток в развитии нейропатической боли, одной из самых разрушительных видов хронической боли 2. Надлежащая в пробирке системы культуры значительно помочь в дальнейшем исследовании роли глиальных клеток на клеточном и молекулярном уровнях.

В настоящее время экстракорпорального системы культуры глиальные в используемых исследователями в основном включают глиальные клетки , полученные из тканей коры головного мозга у новорожденных мыши или крысы мозга и увековечил глиальные клеточные линии , полученные из неонатальной мыши или крысы первичных клеток глии. Неонатальные клетки содержат значительное количество недифференцированных клеток, которые могут быть дополнительно дифференцировались в глиальные клетки (преимущественно астроциты и микроглии), обеспечивая тем самымbundant клетки для экспериментального использования 3. Тем не менее, наше предыдущее исследование показало, что неонатального мозга глиальные клетки отреагировали значительно отличается от взрослого спинного мозга глиальных клеток при липополисахарида (LPS) стимуляции. Например, интерлейкин (IL) -4 отображается усиление ингибирующего эффекта на ЛПС-индуцированную оксида азота (NO) , производство в взрослых крыс спинного мозга нейроглии по сравнению с неонатальной глии мозга 4. Кроме того, профили производства хемокинов при стимуляции нейропептида, кальцитонин ген-родственный пептид (CGRP), являются неоспоримо отличаются между неонатальной мыши глии мозга (методами , описанными в работе. 5) , а также для взрослых спинного мозга мыши глии (Рисунок 1). Признанные клеточные линии просты в использовании и обслуживании, и может обеспечить большое количество клеток в течение короткого периода времени. В общем, иммортализованные клеточные линии генерируются либо с помощью вирусов-опосредованной системы иммортализации (например, широко используемой линии клеток микроглии BV2) 6, 7 или после гое определение спонтанной трансформации (например, астроциты клеточной линии C8-D1A и микроглии клетки линии C8-B4) 8, 9 Клеточные линии превосходны в изучении молекулярных характеристик астроцитов и микроглии в отдельности.; Тем не менее, результаты , полученные из клеточных линий всегда требует дальнейшей проверки в первичных клетках или в условиях in vivo на . Следует также отметить, что не было отчета о глиальной клеточной линии, который является производным от грызуна спинного мозга глии.

Чтобы помочь исследовать роль спинного мозга глиальных клеток в развитии нейропатической боли, системы культуры , который является производным от взрослого спинного мозга мыши была разработана путем адаптации ранее сообщенному метод , используемый для генерации взрослых крыс смешанных глиальных культур 4, 5 . мышь спинного мозга глиальные культуры дополнительно рафинированные в последнее время 10 и описан более подробно в этой статье. Взрослые спинного мозга смешивают глиальные культуры сбыть установлена ​​с помощью мыши из отобранных штаммов, которые соответствуют потребностям конкретного исследования, и клетки могут поддерживаться в культуре до 21 d размещать начало культуры. Этот метод может быть использован при невропатической боли исследований, а также при исследовании различных неврологических заболеваний, которые вовлекают патологические изменения в спинном мозге, таких как боковой амиотрофический склероз (ALS), вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) -associated сенсорной невропатии, а также несколько склероз (РС).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Следующий протокол был одобрен животных по уходу и использованию комитета (Institutional IACUC) в Университете Новой Англии. Следующий протокол для подготовки глиальных культур от 4 взрослых мышей спинного мозга.

1. Приготовление растворов в культуре Гуда в асептических условиях

  1. Подготовка среды для культивирования: модификация полном Дульбекко медиа Игла (cDMEM), содержащий DMEM (с 4,5 г / л глюкозы), 10% фетальной бычьей сыворотки (ФБС), 2 мМ L-глутамина, 100 МЕ / мл пенициллина, 100 мг / мл стрептомицина , 250 нг / мл амфотерицина и 50 мкМ 2-меркаптоэтанола (2-ME; см 1.1.1). Смешайте и фильтр стерилизовать все другие компоненты, а затем добавить FBS. Храните питательные среды при температуре 4 о С.
    1. Готовят 50 мМ 2-МЕ / фосфатно-солевой буфер (PBS) маточного раствора: 100 мкл концентрированного 2-МЕ (14,3 М) в 28,6 мл 1x PBS и фильтр стерилизуют (раствор можно хранить при температуре 4 ° С в течение несколько месяцев). UС. Е. 1 мл 2-МЕ маточного раствора на 1000 мл культуральной среды.
  2. Подготовка градиента плотности сред
    1. Готовят изотонический раствор градиента плотности материала (например, 100% Перколла) с 1 части 10x обычная стерильным PBS и 9 частей стерильной запас градиента плотности носителя (например, перколлом).
    2. Развести 100% градиент плотности среды (сделано в разделе 1.2.1) с регулярными 1x стерильной PBS , чтобы сделать 20% градиент плотности носителей (например, 10 мл 100% градиента плотности среды с 40 мл 1x PBS) и сохранить его в 4 о С. Привести 20% градиент плотности медиа до комнатной температуры (RT) перед получением клеточной культуры.
  3. Приготовление растворов из системы диссоциации папаин
    Примечание: папаин система диссоциации может быть идентифицирована в таблице материалов. Также могут быть использованы и другие подобные наборы диссоциации (в том числе и те, собранные в доме). Все componeNTS должна быть стерильной.
    1. Добавьте 32 мл Эрла сбалансированного солевого раствора (EBSS) к смеси ингибитора овомукоид (порошок).
    2. Добавляют 5 мл EBSS в одном флаконе папаина (порошок). Поместите флакон папаин в водяной бане C 37 O в течение 10 мин или до папаин растворяется.
    3. Добавьте 500 мкл EBSS в одном флаконе ДНКазы (порошок). Осторожно перемешать.
    4. Добавьте 250 мкл раствора ДНКазы (выше) во флакон папаина.
    5. Подсчитайте общую сумму выше папаин / ДНКазы смеси, необходимое (приблизительно 800 мкл папаина / ДНКазы смеси на мышь спинного мозга) и передать необходимую смесь в 50 мл трубки для переваривания ткани (этап 3.2). Хранить остаточному в оригинальном флаконе при температуре 4 ° С в течение не менее двух недель.
    6. Храните все компоненты из наборов на льду, пока не понадобится.
  4. Готовят спинальные приборке шнура: один стерильный 15 мл пробирку с 5 мл Хэнкса сбалансированный солевой раствор (HBSS; из системы папаин диссоциации,0; для сбора спинного мозга) и один стерильный 15 мл пробирку 1x PBS (для заполнения в 5 мл шприц, см шаг 2.4). Кроме того, готовят одну стерильную чашку Петри (35 мм или 60 мм) с 5 мл HBSS и держать его в капот культуре.

2. Спинной мозг Коллекция

ПРИМЕЧАНИЕ: Все оборудование должно быть стерильным. Выполните сбор в обозначенной области, утвержденной IACUC.

  1. Получить следующие инструменты для уборки мыши спинного мозга: прямые острый / тупой 18-см хирургические ножницы, 12 см стандарт скальпель (# 3 в твердом состоянии), из углеродистой стали стерильным скальпелем лезвия # 10, маленькое животное Decapitator, 12 см стандарт изогнутая пинцет, и стерильный 20G игла прилагается к шприцу 5-мл.
  2. Усыпить животное с CO 2 и дезинфицировать головку мыши и заднюю область с 70% этанола (этанол).
  3. Обезглавьте животное с Decapitator. Сделать средний продольный разрез на нижней части спины, чтобы обнажить мышечный слой. Делатьчистый рассечение через колонку позвоночных животных на уровне бедра (также проходящем через мышечный слой, который покрывает столбец позвоночное) со стерильным прямых хирургических ножниц (18 см).
  4. Поместите животное на листе свежей одноразовой салфеткой. Осторожно вставьте 20 G иглу (прилагается к 5 мл шприц, заполненный стерильным 1x PBS (шаг 1.4)) в позвоночном столбе к ростральной стороне. Держите животное вниз плотно и толкать шприц быстро. Весь спинной мозг должен выйти из цервикального конца. Собирают спинного мозга в 15 мл пробирку, содержащую HBSS.
  5. Повторите шаг 2,4 для остальных мышей. Между каждым животным, дезинфицировать все используемые инструменты с 70% этанола.
    Примечание: Как правило, одна пластина 12 также могут быть установлены на каждые 4 мыши спинного мозга (см 4.3).

3. Получение одноклеточной суспензии

Примечание: Выполните шаги 3 и 4 в капот культуре держать все стерильно.

  1. Перенесите все спинного мозга в HBSS, содержащем чашку Петри (шаг 1.4). Разрежьте каждый из спинного мозга на множество мелких, мелкие кусочки с стерильными ножницами и щипцами. Перенести ткани спинного мозга в коническую пробирку объемом 50 мл, содержащей приготовленный папаин / ферментной смеси ДНКазы (этап 1.3.5) с использованием стерильного пинцета или 10 мл пипетки (избегать добавления HBSS к ферментной смеси, так как это будет далее разбавить приготовленный раствор фермента и может привести к снижению производительности фермента).
  2. Vortex трубку осторожно перемешать. Инкубируйте пробирку при температуре 37 ° С в течение 1 ч в инкубаторе / шейкеры с круговым встряхиванием при 150 оборотах в минуту.
  3. Вихревые трубки снова и энергично растирают раствор фермента с ткани с помощью 5 мл пипетки, чтобы способствовать дальнейшему диссоциации.
  4. Передачи клеточной суспензии в пробирку объемом 15 мл и центрифугируют при 300 х г в течение 5 мин при комнатной температуре.
  5. Во время центрифугирования, смешать 2,7 мл EBSS 300 мкл восстановленного альбумин-овомукоид InhРешение ibitor (1.3.1) в стерильную пробирку. Добавьте 150 мкл раствора ДНКазы (этап 1.3.3).
  6. После центрифугирования, удалить супернатант и ресуспендируют осадок клеток с раствором, полученным выше (шаг 3.5). Vortex хорошо, чтобы сломать осадок клеток.
  7. Добавьте 3 мл восстановленного альбумин-овомукоид раствора ингибитора (этап 1.4.1) к клеточной суспензии. Центрифуга клетки при 70 мкг в течение 6 мин при комнатной температуре. Удалить супернатант (который содержит мембранные фрагменты).

4. Дальнейшее удаление миелина из одноклеточной суспензии

  1. Добавить 8 мл 20% -ного градиента плотности сред (полученного на стадии 1.2.2) в пробирку , содержащую осадок клеток, вихрь осторожно , чтобы разрушить осадок, и центрифуга клетки при 800 мкг в течение 30 мин при комнатной температуре без торможения. Осторожно снимите верхний слой мусора (в основном миелина) и супернатант, но сохранить осадок.
  2. Для того, чтобы удалить остатки градиента плотности, мыть клетки с помощью resuspendiнг осадок клеток с 8 мл разбавленной cDMEM (1 часть cDMEM и 2-х частей HBSS). Центрифуга клетки при 400 мкг в течение 10 мин при 4 о С. Удалить супернатант и промыть клетки снова с разбавленной cDMEM (выше) таким же образом. Держите клетки на льду до высева их.
  3. Удалить супернатант и ресуспендируют осадок клеток в культуральной среде (cDMEM поставляется с 2-МЕ (полученного на стадии 1.1)). Для одного 12-луночного планшета, используйте 3 мл х 4 (число мышей использовали) + 2 мл = 14 мл среды. Это будет гарантировать, что существует достаточное количество суспензии клеток в течение всей пластины (12 лунок) и обеспечит дополнительных скважин, которые могут быть использованы для определения среднего числа клеток на лунку и микроглии содержание культуры. Если будут использоваться другие типы сосудов для культивирования, рассчитать общий объем необходимой культуральной среды пропорционально.
  4. Добавить 1 мл клеточной суспензии в каждую лунку 12-луночного планшета.
  5. Инкубируйте клетки при 35,9 ° С с 5% CO 2.
  6. Изменение носителя (удалить старые средства массовой информации с помощью аспирации) на D 1, а затем через каждые 3 - 4 d после этого (обычно изменяют носитель на D: 1, 4, 8 и 11, а затем использовать клетки на 12-й день).
    Примечание: В 1-й день, культура может содержать значительное количество мусора из-за остатков миелина из ткани спинного мозга; Таким образом, изменение средств массовой информации на 1-й день рекомендуется (смотрите на обсуждение для получения дополнительной информации). Культуры готовы к лечению между D 12 - 14. Клетки обычно 80% сливающийся в D 12 и может быть около 100% сплошности от D 14. Как правило, на D 12, насчитывается около 100 000 клеток на лунку в 12-луночного планшета ,

figure-protocol-1
Рис . 2: Типичные изображения смешанных глиальных клеток в разное время после создания смешанной культуры глии спинного мозга Первичные смешанные глии получали из взрослых мышей C57BL / 6. Представитель изображенияпоказать ход глиальных культуры после посева. В 1-й день, некоторые клетки прикреплены к пластине культуры, но они до сих пор в основном круглые. Есть также много плавающих клеток и значительный мусор. На 4-й день, большинство клеток прикрепляются к культуральной пластине. Клетки появляются разветвленное с видимыми процессами. Клетки спорадически и культуры около 20-30% сливающийся в это время. На 8-й день культуры находятся в пределах 50-60% сплошности. Некоторые области культуры имеют большие участки клеток. Другие области культуры имеют разреженный рост клеток. Некоторые клетки в патчах взять на себя "квадратом как" внешний вид. На 12-й день культуры находятся на уровне или выше 80% сплошности (около 90% сплошности в изображении, показанном здесь). Cell находятся в логарифмической фазе роста в это время и между днями 12-14 оптимальное время для использования глиальных клеток для экспериментов. Пожалуйста , нажмите здесь для просмотраБольшая версия этой фигуры.

  1. Изучить микроглиальную содержимое , используя клетки из дополнительных скважин (шаг 4.3) через стандартный флуоресценцией сортировка клеток (FACS) протокола окрашивания 11 с использованием комбинации анти-мыши-CD45 и анти-мышиных моноклональных антител CD11b. CD45 + CD11b + клетки идентифицируются как микроглии.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Этот метод может быть использован для получения смешанных глиальные клетки от мышей и крыс. Среднее общее количество клеток на лунку в 12-луночный планшет на D 12 после начала культивирования должна быть относительно стабильной, причем около 100000 клеток на лунку, когда клетки получают из мыши спинного мозга. Глиальные клетки , полученные из этого метода могут быть использованы в экспериментах, которые предназначены для изучения взрослых спинальных ответов корд глиальные при введении ве...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Крайне важно, чтобы выполнить все шаги, в том числе в средствах массовой информации меняющейся график-последовательным образом для того, чтобы получить воспроизводимые результаты между экспериментами. Следующие шаги особенно важны в получении отличного качества для взрослых смешанных глии.

Ферментативное расщепление является важным аспектом этого протокола. Очень важно, чтобы кусочки ткани хорошо переваривается с целью получения суспензии отдельных клеток. Тем не менее, чрезмерное переварива...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Взрослые смешанные культуры спинного мозга были впервые разработаны с использованием крыс при грантовой поддержке премии NIH/NIDA R01 (PI De Leo) и гранта на обучение NIH T32 (PI Green). Эти методы были дополнительно адаптированы для спинного мозга мышей при поддержке следующих грантов: NIH/NIDA 5K01DA023503 (PI Cao), NIH/NINDS 5R21NS066130 (PI Cao) и NIH/NIGMS P20GM103643 (PI Meng). Авторы также хотели бы поблагодарить доктора Алехандро М. С. Майера, факультет фармакологии, Чикагский колледж остеопатической медицины, за его техническую помощь в получении богатых микроглией смешанных глиальных клеток.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Дульбекко s модификация Eagle' Среда (DMEM) с глюкозой 4,5 г/лLonza12-709FСреда cDMEM является стандартной, широко используемой питательной средой. Каждый исследователь может решить, где приобрести DMEM и все другие компоненты, используемые для изготовления сред cDMEM.
L-глютамин (100x)Lonza17-605EL-глютамин является стандартным, широко используемым компонентом для различных питательных сред. Каждый исследователь может решить, где приобрести L-глютамин.
Антибиотик-антимикотический раствор (100x)Corning-Mediatech30-004-CIЭто комбинация пенициллина, стрептомицина и амфотерицина, содержащая 10 000 единиц/мл пенициллина G, 10 мг/мл стрептомицина сульфата и 25 &микро; г/мл амфотерицин В. Отдельные исследователи могут решить, где приобрести отдельные компоненты.
2-меркаптоэтанол (2-ME)Sigma-AldrichM3148Биореагент, подходит для клеточных культур, молекулярной биологии и электрофореза.
Система диссоциации папаинаWorthington Biochemical CorporationLK003150Отдельные компоненты этого набора можно приобрести отдельно.
PercollGE Health Care17-0891-01Percoll продается в виде стерильного раствора. Неразбавленный Percoll при необходимости может быть повторно автоклавирован.
Инкубатор/шейкер Lab-line Барстед/Лабораторная линияMaxQ4000 Это инкубатор/шейкер, который у нас есть в настоящее время. Вместо этого можно использовать другие типы шейкеров.
Липополисахариды, Salmonella Minnesota Re595Sigma-AldrichL-9764Другие штаммы ЛПС также могут вызывать глиальные реакции. Однако масштаб ответов может варьироваться.
Мышь IL-6 DuoSet ELISA НИР D SystemsDY406Каждый отдельный исследователь может выбрать набор ИФА по своему вкусу.
Мышь TNF-alpha DuoSet ELISAR& D SystemsDY410Каждый отдельный исследователь может выбрать набор ИФА по своему вкусу.
Мышь IP-10 (CXCL10) DuoSet ELISAR& D SystemsDY466Каждый отдельный исследователь может выбрать набор ИФА по своему усмотрению.
Мышь MCP-1 (CCL2) Набор ELISA Opteia BDBiosciences555260Каждый исследователь может выбрать набор для ИФА по своему вкусу.
Мышиный хемокин Q-PlexQuansys Biosciences120251MSВ то время этот продукт не был доступен для внутреннего анализа. Вместо этого мы отправили образцы производителю для анализа.
APC-anti-mouse-CD45 (клон 30-F11)eBioscience17-0451Можно использовать антитела того же клона, но от других поставщиков.
FITC-anti-mouse-CD11b (клон M1/70)eBioscience11-0112Можно использовать антитела того же клона, но от других поставщиков.
Проточный цитометр Accuri C6BD BiosciencesBD Accuri C6 Каждый отдельный исследователь может использовать любой проточный цитометр по своему усмотрению.
Программное обеспечение FlowJoTree Star, Inc.FlowJo7.6.5Каждый отдельный исследователь может использовать любое программное обеспечение для анализа, которое он или она предпочитает.

Ссылки

  1. Gaskin, D. J., Richard, P. The economic costs of pain in the United States. J Pain. 13 (8), 715-724 (2012).
  2. Ji, R. R., Berta, T., Nedergaard, M. Glia and pain: Is chronic pain a gliopathy? Pain. 154 (01), S10-S28 (2013).
  3. Ni, M., Aschner, M., et al. Neonatal rat primary icroglia: isolation, culturing and selected applications. Curr Protoc Toxicol. Maines, M. D., et al. , (2010).
  4. Cao, L., Fei, L., Chang, T. T., DeLeo, J. A. Induction of interleukin-1beta by interleukin-4 in lipopolysaccharide-treated mixed glial cultures: microglial-dependent effects. J Neurochem. 102 (2), 408-419 (2007).
  5. Malon, J. T., Maddula, S., Bell, H., Cao, L. Involvement of calcitonin gene-related peptide and CCL2 production in CD40-mediated behavioral hypersensitivity in a model of neuropathic pain. Neuron Glia Biol. 7 (2-4), 117-128 (2011).
  6. Blasi, E., Barluzzi, R., Bocchini, V., Mazzolla, R., Bistoni, F. Immortalization of murine microglial cells by a v-raf / v-myc carrying retrovirus. J Neuroimmunol. 27 (2), 229-237 (1990).
  7. Bocchini, V., et al. An immortalized cell line expresses properties of activated microglial cells. J Neurosci Res. 31 (4), 616-621 (1992).
  8. Alliot, F. O., Marty, M. C., Cambier, D., Pessac, B. A spontaneously immortalized mouse microglial cell line expressing CD4. Dev Brain Res. 95 (1), 140-143 (1996).
  9. Alliot, F. O., Pessac, B. Astrocytic cell clones derived from established cultures of 8-day postnatal mouse cerebella. Brain Res. 306 (1-2), 283-291 (1984).
  10. Malon, J. T., et al. Microglial content-dependent inhibitory effects of calcitonin gene-related peptide (CGRP) on murine retroviral infection of glial cells. J Neuroimmunol. 279, 64-70 (2015).
  11. Cao, L., DeLeo, J. A. CNS Infiltrating CD4(+) T lymphocytes Contribute to Murine Spinal Nerve Transection-Induced Neuropathic Pain. Eur J Immunol. 38 (2), 448-458 (2008).
  12. Mayer, A. M., et al. Effect of a short-term in vitro exposure to the marine toxin domoic acid on viability, tumor necrosis factor-alpha, matrix metalloproteinase-9 and superoxide anion release by rat neonatal microglia. BMC Pharmacol. 1, 7(2001).
  13. Lawson, L. J., Perry, V. H., Dri, P., Gordon, S. Heterogeneity in the distribution and morphology of microglia in the normal adult mouse brain. Neuroscience. 39 (1), 151-170 (1990).
  14. Rock, R. B., et al. Role of Microglia in Central Nervous System Infections. Clin Microbiol Rev. 17 (4), 942-964 (2004).
  15. Yang, I., Han, S. J., Kaur, G., Crane, C., Parsa, A. T. The Role of Microglia in Central Nervous System Immunity and Glioma Immunology. J Clin Neurosci. 17 (1), 6-10 (2010).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Переваривание папаиномудаление миелинасреда градиента плотностисуспензия одиночных клетокмодифицированная среда Игла в модификации Дульбеккодобавка 2-меркаптоэтанолаанализ методом проточной цитометрииоценка содержания микроглии
Получение первичных смешанных глиальных культур от взрослых спинного мозга мыши ткани
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.