Наблюдение и Количественное брачного поведения в Pinewood нематоды, Bursaphelenchus xylophilus

Summary

Представлен протокол исследования брачного поведения сосновой нематоды, Bursaphelenchus xylophilus. Поведенческие особенности B. xylophilus описаны в процессе спаривания.

Abstract

Способ наблюдения и количественной оценки поведения сопряжении сосновой нематоды, Bursaphelenchus xylophilus, был создан под стереомикроскопа. Для повышения эффективности спаривания B. Xylophilus и увеличить шансы наблюдения спаривания, девственные взрослые культивировали и использовали для исследования. Яйца были получены путем держать нематод в воде и позволяя самки откладывают яйца в течение 10 мин. Молодь второго этапа (J2) были синхронизированы путем инкубирования яиц в течение 24 ч при 25 ° C в темноте, и в начале Д4 были получены культивированием J2 с серой гнили, Botrytis сшегеа, еще 52 ч. В этот момент времени, большинство J4 нематоды может быть четко отличать как мужского или женского пола с использованием их половых морфологии. Мужского и женского пола J4 собирали и культивировали отдельно в двух разных чашках Петри в течение 24 ч, чтобы получить девственные взрослых нематод. Девственница самец и самка девственницей были соединены в капле очистэр в скважине вогнутого ползуна. Брачное поведение было снято с видеомагнитофоном под стереомикроскопа. Весь период процесса спаривания был 82,8 ± 3,91 мин (среднее значение ± SE) и может быть разделен на 4 этапа: поиск, контактирующих, совокупляющихся и сохраняющиеся. Средние минуты продолжительности были 21,8 ± 2,0, 28,0 ± 1,9, 25,8 ± 0,7 и 7,2 ± 0,5, соответственно. Одиннадцать суб-модели поведения были описаны: крейсерская, приближаясь, сталкиваясь, прикасаясь, Hooping, размещение, установка, эякуляцию, отделяя успокоенность, и роуминг. Интересно, что наблюдалось очевидное внутри половой конкуренции, когда одна женщина была сгруппирована с 3-х самцов или одного самца с 3-х самок. Этот протокол является полезным и ценным, а не только при исследовании брачного поведения Б. xylophilus, но и выступает в качестве эталона для этологических исследований других нематод.

Introduction

Сосновая нематода, Bursaphelenchus xylophilus (Steiner and Buhrer) Nickle, является одним из самых разрушительных инвазивных видов, вызывающих увядание и возможную гибель сосен. Считается, что эта патогенная нематода родом из США, но она была завезена в несколько стран, включая Китай, Японию, Южную Корею и Португалию. Недавно сообщалось о нем и в Испании, в результате которого погибли миллионы сосен, что привело к огромным экономическим потерям и поставило под угрозу производство лесов и экологическую стабильность^.

Как только сосна-хозяин заражается сосновыми нематодами, тысячи миллионов потомков быстро размножаются вн....

Protocol

1. Приобретение Virgin взрослых нематод

1. Pinewood нематода изолят и условия культивирования
   Примечание: В B. xylophilus изолировать Nxy61 первоначально был извлечен из пораженной Pinus massoniana в районе Нинбо провинции Чжэцзян в Китае.
   1. Приготовьте картофельный агар с декстрозой (PDA, приведены в таблице материалов) пластин для выращивания ботритис серый.
   2. Для получения прививки, перфоратор кусок грибковой мата с диаметром 10 мм от B. стегеа мата и положить его в середину нового КПК пластины. Культура B. стегеа в течение 5 дней при 25 ° С в темн....

Results

Вероятность успешного спаривания (R) целинных взрослых была 86,67% в среднем, что значительно выше , чем у случайно выбранных взрослых: 13,33 ± 4,65% (F = 1301,71, ДФ = 1, P = 0,0001) (Рисунок 2). Этот факт позволяет предположить , что легче наблюдать за поведением спаривания B. xylophilus с Богородицей взрослых , чем со случайным образом отобранных взрослых.

Когда один мужчина был в.......

Discussion

Поведенческие тесты являются одним из основных аспектов химической экологии, нейробиологии, молекулярной биологии и генетики. Нематоды и , в частности С. Элеганс, широко используются для исследований в этих областях. Поведение спаривание С. Элеганс было исследовано ранее ^10-11. Однако Б. xylophilus является gonochoristic и отличается от гермафродитных C. Элеганс, и процесс его спаривание имеет различные поведенческие особенности ^9. В последнее время поведение спа.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
B. xylophilus изолят Nxy61			Экстрагировано из Pinus massoniana в районе Нинбо в Китае
		серой плесени	Получен из Лесной академии Китая
Воронки Baermann	Sengong falcon tubes Sengong
	Sengong Sengong
пипетка	Sengong
стерильная dd H2O			Стерилизуется под высоким давлением пара при 121°°; C в течение 30 мин.
Чашки Петри	Sengong
PDA medium	Huankai Bio.	021050
Инкубатор	Sengong
Ламинарный поток	Sengong
Стереоскоп	Leica	LED5000 RL
инвертированный стереомикроскоп	Zeiss	A1
вогнутые слайды	Sengong