Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Оптимизированный протокол для электрофоретической подвижности Сдвиг Пробирной с помощью ИК-флуоресцентным красителем-меченных

15.7K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/54863

⸱

29 ноября 2016 г.

 ,  , 
1Department of Biological Sciences, University of Illinois at Chicago

В этой статье

Краткое содержание

Здесь мы опишем оптимизированный протокол флуоресцентных электрофоретической подвижности (анализах сдвига FEMSA) с использованием очищенного SOX-2 белки вместе с инфракрасным флуоресцентным красителем-меченых зондов ДНК в качестве примера для решения важный биологический вопрос.

Аннотация

Электрофоретической подвижности сдвига анализа (EMSA) являются инструментальным средством для характеристики взаимодействия белков и их последовательностей ДНК-мишени. Радиоактивность была преобладающим методом мечения ДНК в EMSAs. Тем не менее, последние достижения в области флуоресцентных красителей и методы сканирования побудили применение флуоресцентного мечения ДНК в качестве альтернативы радиоактивности за преимущества простоты управления, экономии времени, снижения затрат и повышению безопасности. Недавно мы использовали флуоресцентный EMSA (FEMSA) успешно решать важный биологический вопрос. Наш анализ FEMSA обеспечивает механистического представление о влиянии миссенс-мутации, G73E, в высококонсервативной ГМГ фактора транскрипции SOX-2 по типу нейрон диверсификации обонятельной. Мы обнаружили , что мутантные SOX-2 G73E белок изменяет специфической ДНК связывающей активностью, вызывая тем самым обонятельный нейрон тождественное преобразование. Здесь мы представляем оптимизированные и экономически эффективный шаг за шагом протоколадля FEMSA с помощью инфракрасного флуоресцентного красителя-меченых олигонуклеотидов , содержащих LIM-4 / SOX-2 смежных целевых сайтов и очищенные SOX-2 белки (WT и мутантных SOX-2 G73E белки) в качестве биологического примера.

Введение

EMSAs используются для анализа взаимодействия между ДНК и белками, используя нативный электрофорезом на геле полиакриламида (СТР) , чтобы разрешить смесь интересующего белка и меченой ДНК зонда , содержащего потенциальные целевые участки белка 1. ДНК-зонд связан с белком будет мигрировать медленнее по сравнению со свободным ДНК-зондом, и, следовательно, задерживается в его миграции через матрицу полиакриламида. Радиоактивной ДНК 32 Р является основным методом для обнаружения в EMSAs. Хотя применение радиомечения в биохимических исследованиях было выгодным, методы альтернативной маркировки ДНК с сопоставимой чувствительностью в настоящее время используются в связи с риском для здоровья и безопасности, связанных с обработкой радиоактивностью. Эти альтернативные методы включают конъюгацию ДНК с биотином 2 или дигоксигенином (DIG) 3 (оба из которых затем детектируется системами хемилюминесцентные), SYBR зеленый окрашивание ДСН 4,или прямое обнаружение ДНК-флуоресцентного красителя конъюгатов путем сканирования геля 5,6.

Разрешенные гели EMSAs с использованием радиоактивно меченых зондов ДНК требуют postrun обработки через авторадиографии пленок или систему Phosphorimager для обнаружения радиоактивных сигналов 1,7. Гели EMSAs с использованием биотин - 2 или DIG-конъюгированные зондов 3 ДНК также должны быть обработаны и переданы на подходящую мембрану , а затем детектируется хемилюминесценции 6. SYBR зеленого окрашивания геля требует postrun геля окрашивания и флуоресцентный сканер 4. Поскольку этапы обработки postrun гель необходимы для EMSAs с помощью этих методов мечении ДНК, разрешенное гель можно анализировать только один раз. В отличие от этого, ДНК-зондов, меченных флуорофоров могут быть непосредственно обнаружены в геле внутри стеклянных пластин с помощью сканера. Таким образом, ДНК-белковых взаимодействий можно контролировать и несколько раз в различные моменты времени оценивали во время бега, котораязначительно сокращает затраты времени и средств. ДНК-флуоресцентный краситель конъюгаты , которые были использованы для EMSAs включают Су3 6,8, Су5 6,8, флуоресцеин 9 и инфракрасные флуоресцентные красители 4-6.

Регуляция транскрипции требует белок-ДНК взаимодействия факторов транскрипции и их генов-мишеней. Координация этих взаимодействий порождает различные типы клеток от общего предка во время развития животных. Объективный вперед генетический экран был выявлен миссенс мутации, G73E, в высоко законсервированной HMG ДНК-связывающим доменом Caenorhabditis фактора транскрипции Элеганс SOX-2. Мутация в трансформации идентичности клеток из AWB обонятельных нейронов в текущем AWC обонятельных нейронов на молекулярном, морфологических и функциональных уровнях 5,10. SOX-2 дифференцированно регулирует терминальную дифференцировку AWB и AWC нейронов путем взаимодействия с контекстно-зависимых факторов транскрипции партнер и соответствующийДНК - мишени сайты 5,10. SOX-2 партнеров с LIM-4 (LHX) в терминале AWB дифференцировки нейронов, в то время как SOX-2 партнеров с ЦВЗ-36 (OTX / ОДТ) в терминале AWC дифференцировки нейронов. Люциферазы анализы показывают , что SOX-2 и мутантные SOX-2 G73E белки имеют кооперативные взаимодействия с транскрипционных кофакторов LIM-4 и ЦВЗ-36 , чтобы активировать промотор , выраженный в AWB и AWC нейронов. Тем не менее, SOx-2 и мутант НОСКОВ-2 G73E отображаются свойства дифференциальной активацию промотора. Для изучения молекулярной основы дифференциальной ДНК - связывающим деятельности SOX-2 и SOX-2 G73E, fEMSAs были выполнены с этими белками и их потенциальных сайтов - мишеней.

Во-первых, биоинформатики подход был использован для идентификации биологически активные к ДНК последовательности в пределах области промотора 1 кб, используемого в анализе люциферазы. Поскольку несколько потенциальных SOX-2 сайты связывания присутствовали на протяжении промотора, мы сфокусировалина предсказанных SOX-2 связывающих участков, прилегающих к предполагаемому ЦВЗ-36 или LIM-4 сайты связывания и эволюционно консервативными между различными видами нематод. Эти последовательности были удалены или мутируют, и затем испытывали в естественных условиях для их деятельности , чтобы выразить GFP репортер трансгенов в AWB или AWC нейронов. Благодаря такому подходу, мы определили потенциальные LIM-4 / SOX-2 и Чех-36-2 SOX соседние целевые сайты /, которые конкретно необходимы для экспрессии GFP в AWB и AWC нейронов, соответственно 5. Мы исследовали потенциальные различия в ДНК связывания SOX-2 и SOX-2 G73E использованием FEMSA с выявленными LIM-4 / SOX-2 и ЦВЗ-36 / SOX-2 смежных целевых сайтов. Наш анализ показал , что EMSA SOX-2 G73E не связывает ДНК - зонд , содержащий LIM-4 / SOX-2 смежных целевых сайтов (необходим для экспрессии генов в AWB) столь же эффективно , как WT SOX-2 сделал. Тем не менее, SOX-2 и SOX-2 G73E не было никакой разницы в связывании ДНК - зонд , содержащий ЦВЗ-36 / SOX-2 аdjacent целевой сайт (необходим для экспрессии генов в AWC) 5,10. Наш FEMSA анализ обеспечивают механистической понимание природы G73E мутации SOX-2 в воздействии специфической ДНК - связывающей активности для идентичности клеточного фенотипа трансформации AWB-к-AWC. Здесь мы опишем оптимизированный протокол FEMSA с использованием очищенных 6xHis-SOX-2 или 6xHis-SOX-2 G73E вместе с ИК - флуоресцентных зондов ДНК красителя-меченый , содержащих LIM-4 / SOX-2 смежных целевых сайтов в качестве тематического исследования для решения важный биологический вопрос.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

ПРИМЕЧАНИЕ: EMSAs с использованием флуоресцентно меченых зондов ДНК или другие формы меченой ДНК разделяют одни и те же протоколы для белка или препарата клеточного экстракта, белок-ДНК реакции связывания и подготовки PAGE гель и работает (рис 1А). Основные отличия процедуры ДНК маркировки, этапы обработки геля после бежать, и методы обнаружения.

1. Гель Приготовление

  1. Готовят 5% геля, содержащего нативный полиакриламидный 0.5x TBE (45 мМ Трис-борат, 1 мМ ЭДТА) и 2,5% глицерина, с использованием мини-гель системы белка (8,3 см ширина х 7,3 см толщина длина х 0,75 мм).
    1. Для приготовления 30 мл раствора геля для 4 гелей, смешать 5 мл 30% акриламид / бис (37.5: 1), 3 мл 5х КЭ (0,45 М Трис-борат, 10 мМ ЭДТА), 1,5 мл 50% глицерине, 300 мкл 10% персульфата аммония, 15 мкл TEMED, и 20,2 мл DDH 2 O тщательно.
      Примечание: акриламид вреден и токсичен, ручка с соответствующими средствами индивидуальной защиты.
  2. Cast раствора геля сразу. После полимеризации, обертывают гели в прозрачной пластиковой пленкой предварительно смачивать 0,5 × КЭ и хранить их при температуре 4 ° С.

2. Получение ИК-флуоресцентным красителем-меченых зондов

Примечание: Держите инфракрасные флуоресцентным красителем-меченных в защищенном от света как можно больше во время приготовления, хранения и экспериментов.

  1. Дизайн и порядок олигонуклеотиды.
    1. Дизайн длинный олигонуклеотид в течение ~ 51-меров.
      Примечание: Длинная последовательность олигонуклеотида / SOX-2 зонда LIM-4 TATCATATCTATTCTA TGATTA AATACC TATTCA TTTCAAAATCTTCTCCC. Длинные олигонуклеотиды не требуют PAGE или очистки ВЭЖХ.
    2. Разработка дополнительных коротких олигонуклеотидов в течение ~ 14-меров с модификацией красителем инфракрасного флуоресцентного на 5'-конца (5'Dye) и температурой плавления выше 37 ° С.
      ПРИМЕЧАНИЕ: короткая последовательность олигонуклеотида LIM-4 / SOX-2 зонд 5'Dye-GGGAGAAGATTTTG. Минимальный масштаб синтеза 5'Dye-меченых коротких олигонуклеотидов составляет 100 нМ. Таким образом, олигонуклеотиды требуют очистки ВЭЖХ.
  2. Ресуспендируют олигонуклеотиды в 1x Трис-ЭДТА буфере (ТЕ: 10 мМ Трис-HCl, рН 8,0; 1 мМ ЭДТА) до конечной концентрации 100 мкМ.
  3. Отжиг Short (5'Dye) и длинные олигонуклеотиды.
    1. Смешайте 0,6 мкл 5'Dye-Short олиго (100 мкМ), 1,2 мкл олиго (Long 100 мкМ), и 28,2 мкл натрия хлорид-трис-ЭДТА буфера (СТЭ: 100 мМ NaCl, 10 мМ Трис-HCl, рН 8,0; 1 мМ ЭДТА) в 1,5 мл трубки.
    2. Поместите пробирку в кипящей воде в течение 5 мин. Выключите источник тепла и дайте воде с отожженные олигонуклеотиды охлаждения O / N в темноте.
  4. Заполните свесами 5 'отожженных 5'Dye-короткий / длинный олигомеров с Кленова ДНК-полимеразы, чтобы двухцепочечные ДНК-зондов.
    1. Готовят реакцию путем смешивания30 мкл размороженного коротких / длинных олигомеров с 5'Dye теге, 8,5 мкл 10х буфера Кленова, 1,7 мкл 10 мМ дНТФ, 1,7 мкл Кленова (3 '-> 5' экзо-) (5 ед / мкл), и 43,1 мкл DDH 2 O в 0,2 мл ПЦР - пробирку.
    2. Инкубировать 60 мин при 37 ° С в машине ПЦР.
    3. Добавить 3.4 мкл 0,5 М ЭДТА, чтобы остановить реакцию, и нагревать инактивированную при 75 ° С в течение 20 мин в машине ПЦР.
  5. Развести заполненные зондов (0,7 мкМ) в СТЭ для конечной концентрации 0,1 мкМ.
  6. Храните олигонуклеотиды при -20 ° С в темноте до готовности к использованию. Олигонуклеотиды могут храниться до года в этом состоянии.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для создания ДНК-зондов с мутантными сайтами связывания, мутантные варианты длинных олигонуклеотидов отжигали с 5'Dye-меченых коротких олигонуклеотидов, а затем заполняются в 5 'свесы Кленова. Было показано, что зонд с одной цепью маркированы с инфракрасным флуоресцентнымкраситель имеет только 30% интенсивность зонда с обеих нитей, меченные красителем. Если интенсивность сигнала должна быть усилена, длинные олигонуклеотиды обеих нитей помечены с помощью инфракрасных флуоресцентных красителей на 5 'концах и отжигают, чтобы сделать инфракрасный флуоресцентный краситель меченных зондов.

3. Подготовка немеченых / хол Зонды (конкурентный)

Примечание: Длинные олигонуклеотиды комплементарных последовательностей (длинные и LongR) отжигали сделать немаркированные зондов для анализа конкуренции с помощью инфракрасного флуоресцентного красителя-меченых зондов.

  1. Смешайте 20 мкл 100 мкМ в длину, 20 мкл 100 мкМ LongR олигонуклеотиды, и 60 мкл СТЭ в 1,5 мл трубки.
  2. Поместите пробирку в кипящей воде в течение 5 минут, выключите источник тепла и дайте воде с отожженные олигонуклеотиды остыть в течение ночи.

4. Обязательность реакции и электрофорез

  1. Подготовка 1 мл 5-кратного буфера для связывания путем смешивания 50 мкл60; 1 М Трис-HCl, рН 7,5; 10 мкл 5 М NaCl; 200 мкл 1 М KCl, 5 мкл 1 М MgCl 2, 10 мкл 0,5 М ЭДТА, рН 8,0; 5 мкл 1 М DTT; 25 мкл 10 мг / мл бычьего сывороточного альбумина, и 695 мкл DDH 2 O.
    Примечание: 5х буфера для связывания может быть аликвоты и хранили при -20 ° С. Еще один момент, рассмотреть вопрос о том, что различные факторы транскрипции будут иметь различные модификации в связывающем буфере.
  2. Право перед установкой реакции связывания, предварительно не запускать нативный полиакриламидный гель, 5% 0,5 × КЭ + 2,5% глицерина, чтобы удалить все следы персульфата аммония при 80 В в течение 30 - 60 мин, или до тех пор пока ток больше не изменяется со временем.
  3. Настройка реакции связывания в конечном объеме 20 мкл.
    1. Смешать 4 мкл 5 - кратного буфера для связывания, 80 - 200 нг очищенного белка A (в 50% глицерине, то есть, SOx-2), 1 мкл 0,1 мкМ Краситель-конъюгированного зонда (конечная концentration: 5 нМ), и DDH 2 O.
    2. Дополнительно: Когда конкуренты холодный зонд требуется, добавлять различные концентрации (2x, 10x, 25x, 50x, 100x и т.д.) холодных зондов.
    3. Дополнительно: Когда взаимодействие между белками А и В (то есть, SOx-2 и LIM-4) проверяется, добавить 80 - 200 нг очищенного белка B (в 50% глицерина, т.е. LIM-4).
    4. Дополнительно: Когда препарат ядерный экстракт используется и специфическое связывание белка А быть подтверждено, добавляют антитела , специфичные к протеином А (то есть, анти-6xHis, анти-FLAG, и т.д.).
    5. Инкубировать при R / T в темноте в течение 15 мин.
  4. Загрузите все реакции связывания на гель и запустить гель при 10 В / см до требуемого расстояния.

5. обработки изображений

ПРИМЕЧАНИЕ: Гель сканировали непосредственно в стеклянные пластины с передовой инфракрасной системы визуализации. Таким образом, гель может быть решена в дальнейшем и сканировать несколько раз (Рисунки 1C и 2). Ближнего инфракрасного флуоресцентного система формирования изображения в основном для Вестерн-блоттинга также была испытана для сканирования геля, но только усовершенствованная инфракрасная система визуализации была способна сканировать гель с хорошим разрешением. Методика описана является специфическим для конкретного инфракрасного ПО для обработки изображений, хотя могут использоваться и другие программные пакеты.

  1. Очистите слой сканера с DDH 2 O и хорошо высохнуть перед сканированием. Насухо протирать стеклянные пластины геля и помещают пластины, содержащие гель на планшете сканера.
  2. Откройте инфракрасное программное обеспечение визуализации и перейдите на вкладку 'Acquire'. Когда тоньше пластина (1 мм) помещается на планшете сканера, используйте настройки канала: 700, Интенсивность: Авто, разрешение: 169 мкм, Качество: среднее, и фокус смещение: 1,5 мм. Когда толще пластины (3 мм) помещается на планшете сканера, используйте настройки канала: 700, Интенсивность: Авто, разрешение: 84 мкм, Качество: среднее, и смещение фокуса: 3,5 мм. Направление смещения зависит оттолщина стеклянной пластины.
  3. Выберите область, что гель занимает на сканере. Нажмите кнопку "Пуск", чтобы начать сканирование.
  4. Повторите электрофорез и сканирования дополнительно по мере необходимости.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Оранжевый G красителем (6х: 0,12 г Оранжевый G в 100 мл 30% глицерина) может быть добавлен к реакции связывания перед загрузкой визуализировать ход электрофореза. Другие красители , включая погрузочные бромфенолового синего будут обнаружены во время сканирования и , следовательно , мешают анализу изображений (рис 1B).

В некоторых случаях EMSAs, особенно если препарат ядерный экстракт используется, поли deoxyin...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

fEMSAs являются эффективным инструментом для изучения взаимодействия белок-ДНК, и являются альтернативой радиоактивное мечение ДНК. Флуоресцентные красители, такие как инфракрасные красители являются коммерчески доступными, а также обеспечить более безопасный и более экологически чистый метод по сравнению с радиоактивное мечение ДНК. EMSAs с использованием инфракрасного флуоресцентного красителя-меченных не требуют postrun стадий обработки гель, и, следовательно, сэкономить время и затраты по сравнению с другими методам...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Эта работа была поддержана исследовательской стипендией Альфреда. Слоуна (для C.-F.C.) и грантом NIH R01 (5R01GM098026-05 для C.-F.C.). Мы благодарим Дэвида Кроу за доступ к передовой системе инфракрасной визуализации.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
30% раствор акриламида/бис, 37,5:1 Bio-Rad1610158акриламид вреден и токсичен.
6x-HIS антитело к эпитопной метке (HIS. H8)Антитела ThermoFisherMA1-21315
Anti-Flag M2 Sigma-AldrichF3165-.2MG
Бычий сывороточный альбумин (BSA) молекулярно-биологический классNew England BiolabsB9000S
5'IRDye700-меченая ДНК Олигосинтегрированные технологии ДНКПользовательские олиго ДНКВ рукописи они упоминаются как «5'Меченные красителем или инфракрасные флуоресцентные меченные красителем олигопласты ДНК» в рукописи. Компания будет синтезировать 5'-меченые IRDye ДНК-олигонуклеотиды. Требуется минимум 100  μ Синтез в масштабе М и очистка ВЭЖХ.
Фрагмент Кленоу (3'-->5' exo-)New England BiolabsM0212S
LightShif Poly (dI-dC)ThermoFisher20148E
Mini-PROTEAN  Вертикальная ячейка для электрофореза Био-Рад1658000FC В рукописи это называется «мини-белковой гелевой системой». Можно использовать любые электрофоретические системы, если они представляют собой пластины из прозрачного стекла размером менее 25 см х 25 см.
Система инфракрасной визуализации Odyssey CLxLI-COR БиотехнологияСистема Odyssey CLx Infrared Imagng Врукописи она упоминается как «усовершенствованная система инфракрасной визуализации».
Система визуализации Odyssey Fc LI-COR BiotechnologyOdyssey Fc Dual-Mode Imaging SystemВ рукописи она упоминается как «система флуоресцентной визуализации в ближнем инфракрасном диапазоне, предназначенная в первую очередь для западных блоттингов».
Программное обеспечение Image Studio (версия 4.0)Программное обеспечениеLI-COR BiotechnologyImage Studio В рукописи это называется «особым программным обеспечением для обработки изображений». 
Оранжевый GSigma-AldrichO3756-25G
6x Оранжевый нагрузочный краситель0,25% Orange G; 30% Глицерин
0,5x TBE45 мМ Трис-борат; 1 мМ ЭДТА
1x TE10 мМ Трис-HCl, pH 8,0; 1 мМ EDTA
1x STE100 мМ NaCl; 10 мМ Tris-HCl, pH 8,0; 1 мМ EDTA
5x Связывающий буфер50 мМ Tris-HCl, pH 7,5; 50 мМ NaCl; 200 мМ KCl; 5 мМ MgCl<суб>2; 5 мМ ЭДТА, pH 8,0; 5 мМ DTT; 250 μ г/мл BSA

Ссылки

  1. Hellman, L. M., Fried, M. G. Electrophoretic mobility shift assay (EMSA) for detecting protein-nucleic acid interactions. Nat Protoc. 2, 1849-1861 (2007).
  2. Ludwig, L. B., Hughes, B. J., Schwartz, S. A. Biotinylated probes in the electrophoretic mobility shift assay to examine specific dsDNA, ssDNA or RNA-protein interactions. Nucleic Acids Res. 23, 3792-3793 (1995).
  3. Engler-Blum, G., Meier, M., Frank, J., Muller, G. A. Reduction of background problems in nonradioactive northern and Southern blot analyses enables higher sensitivity than 32P-based hybridizations. Anal Biochem. 210, 235-244 (1993).
  4. Jing, D., Agnew, J., Patton, W. F., Hendrickson, J., Beechem, J. M. A sensitive two-color electrophoretic mobility shift assay for detecting both nucleic acids and protein in gels. Proteomics. 3, 1172-1180 (2003).
  5. Alqadah, A., et al. Postmitotic diversification of olfactory neuron types is mediated by differential activities of the HMG-box transcription factor SOX-2. EMBO J. 34, 2574-2589 (2015).
  6. Jullien, N., Herman, J. P. LUEGO: a cost and time saving gel shift procedure. Biotechniques. 51, 267-269 (2011).
  7. Poulin-Laprade, D., Burrus, V. Electrophoretic Mobility Shift Assay Using Radiolabeled DNA Probes. Methods Mol Biol. 1334, 1-15 (2015).
  8. Ruscher, K., et al. A fluorescence based non-radioactive electrophoretic mobility shift assay. J Biotechnol. 78, 163-170 (2000).
  9. Pagano, J. M., Clingman, C. C., Ryder, S. P. Quantitative approaches to monitor protein-nucleic acid interactions using fluorescent probes. RNA. 17, 14-20 (2011).
  10. Alqadah, A., Hsieh, Y. W., Chuang, C. F. Sox2 goes beyond stem cell biology. Cell cycle. , (2016).
  11. Larouche, K., Bergeron, M. J., Leclerc, S., Guerin, S. L. Optimization of competitor poly(dI-dC).poly(dI-dC) levels is advised in DNA-protein interaction studies involving enriched nuclear proteins. Biotechniques. 20, 439-444 (1996).
  12. Sorenson, A. E., Schaeffer, P. M. In-gel detection of biotin-protein conjugates with a green fluorescent streptavidin probe. Anal. Methods. 7, 2087-2092 (2015).
  13. Onizuka, T., Endo, S., Hirano, M., Kanai, S., Akiyama, H. Design of a fluorescent electrophoretic mobility shift assay improved for the quantitative and multiple analysis of protein-DNA complexes. Biosci Biotechnol Biochem. 66, 2732-2734 (2002).
  14. Steiner, S., Pfannschmidt, T. Fluorescence-based electrophoretic mobility shift assay in the analysis of DNA-binding proteins. Methods Mol Biol. 479, 273-289 (2009).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Белок-ДНК взаимодействиенерадиоактивные зондынативный полиакриламидный гельотжиг олигонуклеотидовДНК-связывающая активностьочищенный белок SOX-2система инфракрасной визуализациианализ суперсдвига
Оптимизированный протокол для электрофоретической подвижности Сдвиг Пробирной с помощью ИК-флуоресцентным красителем-меченных
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.