Мы опишем протокол для индукции полезным и nonrewarding опыт в плодовых мух (дрозофилы) с использованием добровольного потребления этанола в качестве меры для изменения в награду государств.
Методическая статья
Мы опишем протокол для индукции полезным и nonrewarding опыт в плодовых мух (дрозофилы) с использованием добровольного потребления этанола в качестве меры для изменения в награду государств.
Мы опишем протокол для измерения этанола самоуправлением в плодовой мушки (дрозофилы) в качестве прокси для изменений в награду государств. Мы демонстрируем простой способ подключиться к системе вознаграждения лету, изменять опыт, связанный с естественной наградой, а также использовать добровольное потребление этанола в качестве меры для изменения в награду государств. Подход служит в качестве соответствующего инструмента для изучения нейроны и гены, которые играют определенную роль в опыте опосредованной изменения внутреннего состояния. Протокол состоит из двух отдельных частей: подвергая мух к полезным и nonrewarding опыта, и опробование добровольное потребление этанола в качестве меры мотивации, чтобы получить вознаграждение наркотиков. Эти две части могут быть использованы независимо друг от друга, чтобы вызвать модуляцию опыта в качестве первого шага для дальнейшего вниз по течению анализов или в качестве независимого два выбора анализа кормления, соответственно. Протокол не требует сложной настройки и, следовательно, могут быть применены в любом Laboratorу с основными инструментами культуры летать.
Модификация поведения в ответ на опыт позволяет животным корректировать свое поведение к изменениям в их среде 1. В ходе этого процесса, животные интегрировать их внутреннее физиологическое состояние с изменением условий внешней среды, а затем выбрать одно действие над другим, чтобы увеличить свои шансы на выживание и размножение. Системы вознаграждения эволюционировали мотивации поведения, которые необходимы для выживания особей и видов путем усиления поведения , которые увеличивают немедленное выживание, например, еды или питья, или те , которые обеспечивают долгосрочное выживание, такие как сексуальное поведение или уход за потомством 2. Искусственные соединения , такие как наркотики злоупотребления также влияют на системы вознаграждения путем кооптации нервных путей , которые обеспечивают естественные награды 2.
За последние два десятилетия плодовой мушки дрозофилы была создана в качестве перспективной модели для изучения Molecулар и нейронные механизмы, которые формируют влияние этанола на поведение 3,4.
Ранее мы определили подмножество пептидергических нейронов у мух (НРП / НРП рецептора (R) нейроны) , которые соединяют естественные награды, такие как сексуальный опыт, к мотивации получения вознаграждения наркотиков 5. НРП выражение чувствительна к обоим параметрам сексуального опыта и поощрений наркотиков, таких как этанол интоксикации. Изменения в НРП уровней экспрессии преобразуются в изменения в этаноле самоуправления 5, где высокая НРП снижает и низкий НРП увеличивает предпочтение к потреблению этанола. Активация нейронов является НПФ полезным для мух, поскольку они показывают сильное предпочтение запаха, спаренной с активацией, что также отражается снижением потребления этанола. Что еще более важно, активация нейронов НРП мешает способности мух, чтобы сформировать положительную ассоциацию между интоксикацией этанолом и запах реплике. Причинно-следственная связь между НРП / Rсистема, вознаграждение памяти, и потребление этанола позволяет предположить , что можно использовать этанол самоуправлением в качестве меры для изменения в награду 5 государств.
В этой публикации мы демонстрируют комплексный подход к выстукивать в лету естественной системы вознаграждения и изменения опробование в награду государств. Подход состоит из двух отдельных частей, учебного протокола для манипулирования природными опытом вознаграждения, связанных с последующим двумя вариантами капиллярный питатель анализа (CAFE) для оценки этанола самоуправления в качестве оценки изменений в награду государств. Анализ КАФЕ аналогична выбору анализов двух бутылок , используемых в исследованиях на грызунах для наркотиков самоуправления и было показано , чтобы отразить некоторые свойства наркомании типа поведения у мух 6.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Примечание: Общий обзор экспериментального проектирования: Экспериментальный дизайн включает в себя адаптированный протокол для подавления 7-9 ухаживания , в которых самцы мух подвергаются полезным и nonrewarding опытом в 3 -х последовательных сессий обучения в течение 4 дней. В конце фазы опыта, мухи проходят в два выбора добровольного анализа потребления этанола в течение 3 - 4 дней. Протокол в данном документе включает в себя несколько подготовительных этапов, некоторые из которых могут быть сделаны заранее , чтобы использоваться в более чем одном эксперименте, в то время как другие должны происходить своевременно до начала эксперимента (таблица 1).
1. Подготовительные шаги
2. Экспериментальные шаги

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
FPreviously, Devineni и др. показали , что , когда плодовые мушки дают выбор к потреблению этанола , содержащего пищу, они проявляют сильное предпочтение этанол-содержащие продукты над nonethanol , содержащей пищу 6. Здесь показаны некоторые репрезентативные результаты, полученные нами при опробование врожденное предпочтение к этанолу наивных мужчин мух, которые не прошли протокол обучения.
Наивные Canton S...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Здесь мы проиллюстрируем детали интегрированного подхода к измерению изменений в поведении, связанном с поиском вознаграждения, основанного на предыдущей работе, описанной Devineni et al.6 и Шохат-Офир и др.5. В первом разделе протокола используются различные типы сексуальных взаимодействий в качестве входных данных для опыта, а во втором разделе используется анализ с двумя вариантами питания для оценки влияния опыта на предпочтение потребления этанола.
...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Авторам нечего раскрывать.
Мы благодарим У. Хеберлайн и А. Devineni для длительных обсуждений и технических консультаций. Мы также благодарим членов лаборатории Шохат-Офир, А. Benzur, Л. Kazaz и О. Шалом, за помощь с демонстрации метода. Особая благодарность идет к Элиэзер Costi для создания систем для полетов в лаборатории. Эта работа была поддержана Израильского научного фонда (384/14) и гранты Мари Кюри Карьера интеграции (CIG 631127).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Флаконы из полистирола 25 х 95 мм | FlyStuff | 32-109 | |
| узкие пластиковые флаконы | FlyStuff | 42-102 | |
| одноразовые стерильные иглы 18 г и 27 г | может быть приобретена любой фирмой | 1,20 X 38 мм (18 G x 1 1/2") , 0,40 X 13 мм (27 G x 1/2") | |
| 10 x 75 мм Боросиликатное стекло одноразовые пробирки для культивирования | kimble chase | 73500-1075 | |
| калиброванные пипетки 5 μ L | VWR | 53432-706 | с цветовой кодировкой белого цвета, содержащим 5 μ L |
| Минеральное Масло | Сигма-Олдрич | M5904 | |
| Сахароза, Молекулярная биология Сорт | CALBIOCHEM | 573113 | |
| Дрожжевой экстракт Порошок для микробиологии | может быть приобретен любой компанией | ||
| Этанол | Sigma-Aldrich; | 32221 | |
| Наконечники для пипеток стандартные (микропипетки) | ThermScientific | T114R-Q | объем: 0.1 - 20 μ L (ультрамикро) |
| IDENTI-PLUGS (Пробки из пенопласта) | Jaece | L800-A | подходит для отверстий 6 - 13 мм |
| IDENTI-PLUGS (Пробки из пенопласта) | Jaece | L800-D | подходит для отверстий 35 - 45 мм |
| Virginator Fly Stock | bloomington drosophila stock center | #24638 | |
| Узкие флаконы, лоток для упаковки (PS) | Genesee Scientific Corporation | # 32-109BR | |
| Drosophila Media Рецепты и методы | Bloomington Drosophila Stock Center | http://flystocks.bio.indiana.edu/Fly_Work/media-recipes/molassesfood.htm | |
| пропионовой кислотой | Sigma-Aldrich | P5561 | |
| фосфорная кислота | Sigma-Aldrich | ||
| Methl 4-гидроксибензоат | Sigma-Aldrich | H3647 | |
| Агар Агар | может быть приобретен любой компанией | ||
| Кукурузный шрот | может быть приобретен любой компанией | ||
| Бабушкина патока | B& G Foods, Inc | не указана | |
| быстрорастворимые сухие дрожжи | могут быть приобретены любой компанией |
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE
Запросить разрешение