Мы опишем здесь три различные протоколы для исследования в пробирке конъюгации, трансдукции и естественной трансформации в золотистый стафилококк.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Методика изучения горизонтальных генного переноса в
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Одной важной особенностью основных оппортунистических патогеном человека золотистый стафилококк является его исключительная способность быстро приобретают устойчивость к антибиотикам. Геномные исследования показывают , что S. стафилококк несет множество генов вирулентности и сопротивления , расположенные в мобильных генетических элементов, предполагая , что горизонтальный перенос генов (HGT) играет важную роль в эволюции золотистого стафилококка. Тем не менее, полное и подробное описание методологии , используемой для изучения HGT в золотистого стафилококка до сих пор отсутствует, особенно в отношении естественное преобразование, которое было недавно сообщалось в этой бактерии. Эта работа описывает три протокола, которые полезны для экстракорпоральное исследования ХГТ в золотистого стафилококка: конъюгации, трансдукции фагом и естественной трансформации. С этой целью, ген ЧФР (хлорамфеникол / сопротивления флорфеникол), которое дает Phenicols, Lincosamides, Оксазолидиноны, плевромутилины и стрептограминов А (PhLOPSА) -resistance фенотипом, был использован. Понимание механизмов , посредством которых золотистого стафилококка трансферты генетические материалы других штаммов имеет важное значение для осмысления быстрое приобретение сопротивления и помогает уточнить режимы распространения , представленные в программах наблюдения или для дальнейшего прогнозирования режима расширения в будущем.
Введение
Золотистый стафилококк является синантропных грамположительные бактерии , которые , естественно , населяет кожу и носовую полость человека и животных. Этот бактериальный вид является основной причиной внутрибольничных инфекций в больницах и медицинских учреждениях. Кроме того, его способность к развитию устойчивости к различным антимикробным соединений сделало управление инфекций, вызванных этой бактерией в глобальную озабоченность.
Два основных пути, участвующие в распространении фенотипов сопротивления известны: клонального распространение устойчивых генотипов и распространения генетических детерминант среди бактерий бассейна. ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Примечание: штаммы и материалы , используемые в этой работе, приведены в таблице 1 и таблице материалов, соответственно. В экспериментах по передаче, N315 и COL ЧФР -позитивных производные были использованы в качестве доноров СМО гена (N315-45 и Col-45). Эти штаммы были ранее получены путем конъюгации, с использованием в качестве донора клинической -положительным Staphyloccocus CFR эпидермидис штамм (ST2), в соответствии со стандартным протоколом сопряжению (см ниже). Этот штамм таил СМО ген на pSCFS7-подобной плазмиды 7.
1. Сопряжение Использ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Результаты , представленные здесь , были опубликованы ранее (адаптировано из ссылки 7 с разрешения издателя). Мы изучили возможные пути передачи гена ЧФР, что приводит к низкоуровневой линезолид сопротивление и экспрессию PhLOPSA сопротивления фенотипа 14, 15 штаммов золотистого стафилококка, исследуя три механизма ХГТ.
На
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Эта работа описывает три основных метода для изучения HGT генетических детерминант в золотистого стафилококка. Хотя трансдукции и конъюгации были изучены в течение многих десятилетий, существование естественной трансформации лишь недавно был признан 2. Таким образом, золотистого стафилококка оснащен всеми тремя основными режимами ХГТ, и тестирование всех из них требуется уточнить возможные пути распространения генетических детерминант. Целью данной работы является составле.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторам нечего раскрывать.
Благодарности
Эта работа была частично поддержана Takeda Science Foundation, Pfizer Academic Contribution и JSPS Postdoctoral Fellowship for Foreign Researchers (FC).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Триптический соевый бульон (TSB) | Бектон Дикинсон | ||
| Инфузия сердца для мозга (BHI) | Бектон Дикинсон | ||
| Питательный бульон No 2 | Оксоид | CM0067 | |
| Агар овечьей крови | Eiken Chemical Co., Ltd. | E-MR96 | Триптический соевый агар с добавлением 5% (v/v) овечьей крови по заявлению производителя. |
| Порошок агара | Wako Pure Chemical Industries | 010-08725 | |
| Цитрат натрия (дигидрат цитрата тринатрия) | Wako Pure Chemical Industries | 191-01785 | |
| Эфир целлюлозы сетчатый 0,45 μ L HAWG фильтр | Merck Milipore | HAWG 02500 | |
| QIAfilter Plasmid Midi kit | QIAGEN | 12243 |
Ссылки
- Lindsay, J. A. Genomic variation and evolution of Staphylococcus aureus. IJMM. 300, 98-103 (2010).
- Morikawa, K., et al. Expression of a cryptic secondary sigma factor gene unveils natural competence for DNA transformation in Staphyloco....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
