Методическая статья

Оценка пространственного обучения и памяти в малых чешуйчатый Рептилий

DOI:

10.3791/55103

3 января 2017 г.

В этой статье

Краткое содержание

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В этой статье описывается модификация лабиринта Барнса, стандартной парадигмы грызунов, используемой для оценки пространственной памяти и обучения, для использования у мелких чешуйчатых рептилий.

Аннотация

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Клинические исследования использовала различные парадигм для оценки когнитивных нарушений, обычно ориентации пространственного обучения и памяти способности. Тем не менее, интерес к когнитивным процессам nonmodel видов, как правило, в экологическом контексте, также стала развивающейся областью исследований. В частности, интерес к познавательных процессов у рептилий растет, хотя экспериментальные исследования рептилии познания скудны. Несколько рептилии исследований, которые экспериментально проверены на пространственное обучение и память использовали грызуна парадигм модифицированные для использования в рептилий. Тем не менее, экологически важные аспекты физиологии и поведения этой таксономической группы должны быть приняты во внимание при проверке на пространственно основанного познания. Здесь мы описываем модификации суша Barnes лабиринт и связанный протокол тестирования, которые могут улучшить производительность при зондировании для пространственного обучения и способности памяти в маленьких чешуйчатый рептилий. Описанная парадигма и процедуры были успешно использованы с мужской стороны-Расплывшиеся ящериц (Ута stansburiana), демонстрирующие , что пространственное обучение и память можно оценить в этой таксономической группы с экологически соответствующим устройством и протоколом.

Введение

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Многие нейродегенеративные заболевания , такие как настоящее Альцгеймера с прогрессирующим снижением когнитивных способностей, как правило , одновременно с деградацией мозга 1-4. Для проверки влияния черепно-мозговой травмы и ухудшения когнитивных процессов, клинические исследования использовала преимущества модельных видов грызунов и стандартизации испытательной аппаратуры и протокола. В частности, пространственные процессы обучения и памяти были оценены с помощью нескольких стандартных парадигм , таких как водный лабиринт Морриса, Barnes лабиринт, и радиально - консольных лабиринт (для всеобъемлющего обзора этих и других парадигм, см 5,6). Богатая история этих пространственных обучения и памяти парадигм оказались весьма успешными, что позволяет исследователям понять многие из граней и нюансов взаимосвязи между человеческой памяти, функции мозга, и болезни.

В то время как оценка когнитивных процессов была исследована в клинических исследованиях для выходае некоторое время, исследования, направленные на познавательных способностей nonmodel видов является относительно новым. Исследователи, изучающие познание в nonmodel видов, как правило, заинтересованы в экологической и эволюционной значимости когнитивных процессов, в частности, в контексте выживания и размножения. Некоторые исследования рептилий предположили, что продвинутые познавательные способности, в частности, пространственной памяти, могут лежать в основе некоторых форм поведения, в частности касающихся навигации и ориентации. Тем не менее, в то время как многие исследования показали , что рептилии могут переориентировать после смещения 7,8, то когнитивные механизмы , лежащий в основе поведения переориентация еще не дразнили друг от друга. Из - за этого, некоторые исследования попытались экспериментально оценить важность пространственного обучения и памяти во время навигации 9-17. Методология в этих исследованиях преимущественно по образцу грызунах парадигм и протоколы, иногда модифицированные для использования в рептилий, но эти исследованияимели с переменным успехом в оценке пространственной памяти. Некоторые исследования показали , пространственное обучение и память у некоторых видов 11-17 в то время как другие исследования не обнаружили никаких доказательств такого 9,10. Таким образом, роль или существование пространственного обучения и памяти во время навигации у рептилий до сих пор неясно.

Один вопрос, который может быть проблематичным, когда экспериментально оценить пространственное обучение и память у рептилий является экологическая актуальность задачи. Рептилии являются особой таксономической группы весьма отличаются от грызунов, демонстрируя большие изменения в экологии, поведения и физиологии. Различия в поведении через рептильных видов могли бы повлиять на оценку пространственных когнитивных способностей, особенно если парадигма используется не подключиться к естественному поведению. Например, в видов, которые, как правило, ищет убежища в небольших трещинах, пространственные способности могут быть легко оценены с использованием Barnes лабиринту в то время как этот лабиринт не может быть идеальным выбором парадигмыв видов, которые, как правило, остается неподвижным. Точно так же, большинство чешуйчатый рептилии не водная и , таким образом , вода лабиринте Морриса не может быть подходящим выбором для тестирования пространственного обучения и памяти (но см 15); Тем не менее, этот лабиринт может быть идеальным выбором для тестирования пространственных способностей у черепах 16. Наконец, физиология этой группы должны быть учтены, так как рептилии ectothermic и надлежащего поддержания температуры, в частности подложки, необходимо учитывать во время процедуры тестирования.

Протокол и парадигма , представленная здесь были использованы для исследования пространственного обучения и памяти у взрослых ящериц бокового Расплывшиеся (Ута stansburiana) 13, небольшая ящерица , которая обычно убегает от хищников в небольших трещинах в скалах 18. Зная этот аспект естественной истории и поведении видов, мы использовали модификацию традиционного Barnes лабиринт, чтобы испытать для пространственного обучения и памяти. Лабиринтом я Barnesса сухой земли лабиринт и, как правило, используется для тестирования пространственного познания в моделях на грызунах. Мы модифицировали наш лабиринту несколькими способами от грызуна лабиринта, как в конструкции и протоколе (описано ниже). Наш лабиринт состоит из круглой платформы с 10 отверстий на равном расстоянии друг от друга по периметру платформы (рисунок 1). Протокол, описанный здесь, включает в себя предмет участия в учебных испытаниях, чтобы узнать местоположение цели отверстие, а затем, как только субъект узнает местоположение цели отверстие, пробный зонд используется для установления использования пространственной памяти во время навигации к цели.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все процедуры были одобрены Университета штата Пенсильвания Институциональные уходу и использованию животных комитета (IACUC - протокол ID: 43242) и придерживался всех местных, государственных и федеральных нормативных актов.

1. Подготовка

  1. Покупка или построить лабиринт Barnes, обеспечивая этой цели отверстия соответствующего размера для данного вида, представляющих интерес. Для этого протокола, использовать семь взрослых побочных-Расплывшиеся ящериц (Ута stansburiana). Определить адекватный размер выборки для исследований с использованием других видов.
    1. Если строить лабиринты Barnes, приобрести какой-либо стандарт, непористой круглый стол (106 см в диаметре), повышенные 76.2 см от пола.
    2. Используя рулетку, отметьте 10 равноудаленных точках, разнесенных 26 см друг от друга по всему периметру стола и 6,35 см от края стола. Используйте 10 отверстий в то время как грызун лабиринты обычно имеют больше отверстий. Это позволяет уменьшить количества вариантов побега.
    3. Используя отверстие увидел немного (2,54см в диаметре), высверлить все 10 голов отверстий и песок острых краев.
    4. Установите четыре колышки опорные полки под каждое отверстие с помощью винтов, используя домашний корпус в качестве руководства для измерений.
  2. Поместите лабиринт в тихой комнате с ярким освещением и накладных пространственных сигналов , доступных для навигации (двери, шкафы и т.д.).
  3. Смонтировать автоматической фокусировки, широкоугольный объектив веб-камеру (11,3 см х 3,99 см) или другую подходящую камеру непосредственно над лабиринтом. Убедитесь, что в поле зрения из видеопотока охватывает весь лабиринт.
  4. Поместите компьютер и стул наблюдателя не менее 1 м от лабиринта.
  5. Отметьте ноги лабиринта на полу с постоянным маркером или лентой. Это позволяет скорректировать любую минуту движения лабиринта за ходом испытаний.
  6. Случайным присвоить одно из отверстий как "1" и номер другие отверстия последовательно через "10". С постоянным маркером, писать числа вдоль стороны снаружилабиринта для удобства пользования. Убедитесь в том, что номера не видны животного в лабиринте.
  7. Случайным назначить голевых отверстий для субъектов с использованием генератора случайных чисел.

2. Испытания Обучение

ПРИМЕЧАНИЕ: Рептилии имеют предпочтительную температуру тела, которая может быть получена из литературы. Если животные становятся вялыми в течение нескольких тренировочных испытаний, лабиринт может быть слишком круто, и это может повлиять на поведение. Небольшое пространство нагреватель или нагревательной ленты на нижней стороне лабиринта может адекватно увеличить лабиринтный температуру поверхности, лучшую термическую индикацию температуры тела, чтобы поддерживать оптимальную температуру тела и поведенческие характеристики.

  1. Если предметы размещаются за пределами испытательной комнате, приносят животных в их доме вольерах в комнату, по крайней мере за 30 мин до тестирования. Будьте уверены , чтобы обеспечить тепло в домашних шкафах (например, нагревательные лампы, нагревательной ленты) для того , чтобы поддерживать температуру тела перед тестированием.
    1. Открытое программное обеспечение отслеживания и приложений веб-камера для видео-канал. Программное обеспечение пользовательского отслеживания была написана для Matlab и обработки изображений инструментов; другое программное обеспечение отслеживания является коммерчески доступным.
    2. Оценка поля зрения из видеопотока. Если лабиринт не находится в поле зрения, проверьте, что лабиринт находится в пределах отметок на полу.
    3. Откройте рабочий лист, содержащий информацию о дате, старт / время окончания учебных испытаний, при условии удостоверения личности, поставленной цели отверстие, количество тренировочных испытаний бегут, заметки и инициалы наблюдателя.
    4. Перемешать порядок, в котором будут испытуемые. Испытуемые на систематической основе.
  2. Удалите первый предмет из своей домашней клетки и осторожно поместить объект в середине лабиринта. Поместите пластиковую ванну над животным; делать это предотвращает смещение ориентации бессознательного исследователем. Разрешить 30 секунд, чтобы акклиматизироваться.
  3. Монтировать домой клетку животного под лабиринт, прямо под, какподписал цель отверстие, сдвинув верхнюю часть корпуса в колышек креплениями. Будьте уверены, что гигантская скала в домашней клетке находится непосредственно под отверстием, который будет служить в качестве насеста, когда животное спускается в отверстие. На данный момент, использование термических или химических репликами домашнего корпуса для использования в навигации не имеет никакого значения.
    1. Грызун лабиринты использовать чистый корпус как побег для субъекта. Тем не менее, поощрять вступление в отверстие во время тренировки испытания путем установки домашнего корпуса животного под лабиринт.
  4. Аккуратно удалите пластиковую ванну из верхней части лабиринта.
  5. Начало записи учебного судебного процесса с применением веб-камерой.
    1. Разрешить предмет исследовать лабиринт в течение 10 мин. Если происходит что-то нетипичное, обратите внимание, это на листе.
    2. Если объект падает или бежит со стола, аккуратно возвратить предмет к середине лабиринта. Продолжить выбор времени и запись, если животное из лабиринта в течение 30 с или менее.Если объект из лабиринта в течение более 30 секунд, прервать испытание. Запишите эту информацию в разделе примечаний рабочей книги.
    3. Если объект опускается в ворота отверстие без посторонней помощи, рассмотреть вопрос о судебном процессе в качестве более в то время.
    4. Если объект не опускается в ворота отверстие, рассмотрим, как испытание более после 10 минут прошло.
  6. Если объект не опускается в ворота отверстие через 10 мин, вручную аккуратно направлять животное, с головой, в соответствующей цели отверстие.
  7. Остановка видео и программное обеспечение для отслеживания. Сохранить видео кадры.
  8. Чтобы объект съемки отдыхать в течение по крайней мере 2 мин в своем домашнем шкафу в то время как корпус все еще установлен под лабиринтом.
  9. Используя пульверизатор и бумажные полотенца, очистить верхнюю часть лабиринта разбавленным мыльным раствором мыла 1:10 к воде. Это не позволяет использовать химические сигналы при навигации по лабиринту. Некоторые виды, особенно те, которые широко используют хемосенсорной информации, необхоsitate дополнительное полоскание лабиринта с горячей водой, чтобы удалить все реплики аромата.
  10. Снять корпус из-под лабиринт и либо повторить учебный судебный процесс с тем же лицом или нового индивидуума. Каждый субъект может быть запущен в до 5 учебных испытаний в день, с 30-минутного интервала между испытаниями индивидуума.
  11. Повторите эту процедуру до тех пор, пока субъект спускается в его цели отверстие без посторонней помощи, в 3-х различных учебных испытаний, что свидетельствует о том, что изучение местоположения цели произошло. Три учебные испытания не должны быть последовательными. Если субъект достигает этого критерия, субъект переходит на процесс зонда для оценки пространственной памяти.

3. Испытания Probe

Примечание: После того, как объект достигнет критерия, субъект научился перемещаться к цели. Тем не менее, на данный момент, до сих пор неясно, если объект навигации с использованием пространственной стратегии или какой-либо другой навигационную стратегию. зонд пробs испытание для этого и должны быть выполнены на следующий день после того, как субъект достигает критерия в учебных исследованиях.

  1. Поворот лабиринт на 180 °, обеспечивая, что ноги лабиринта находятся в пределах отметок на полу. Вращение лабиринта позволяет местным сигналы, которые непосредственно идентифицируют цель быть в прямом противоречии с более стабильными пространственными аллюзиями.
  2. Повторите шаги 2.1 - 2.5.2, шаг 2.3 монтажа домашнего корпуса испытуемого под лабиринте опуская. Это исключает использование обонятельных или других условных знаков, исходящих из дома корпуса во время разведки лабиринте.
  3. Во время пробных испытаний, предметы могут свободно исследовать лабиринт в течение полных 10 минут, чтобы оценить исследовательское поведение. Через 10 минут, остановите видео и отслеживания программного обеспечения.
  4. Удалить тему из лабиринта и вернуть его в родную клетку.
  5. Очистите верхнюю часть лабиринта с разбавленным мыльным раствором.

4. Поведенческие меры

ПРИМЕЧАНИЕ: Для обучения TriaLs, включают в себя поведенческие меры, такие как задержки, чтобы прийти к цели отверстие, количество ошибок, допущенных (исследование в nongoal отверстие; морда животного должно быть в пределах 1 см от отверстия), и доля времени, проведенного в правильном квадранте лабиринт.

  1. Для подготовки испытаний, определить стратегию поиска. Прямая стратегия определяется как спуском в цель отверстие с менее чем 3-х ошибок. Последовательная стратегия экспертиза 3-х или более последовательных отверстий в лабиринте по периметру лабиринта. Случайная стратегия не является последовательной исследование лабиринте отверстий с 3 или более ошибок.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для зондов испытаний, поведенческие меры включают задержку, чтобы прийти к пространственно правильное отверстие, количество ошибок, сделанных до исследования пространственно правильное отверстие, а доля времени, потраченного в пространственно правильном квадранте лабиринта.
  2. Для более тщательной оценки неслучайной выбора пространственно правильной цели отверстие, нанимать без замены выборки при расчетешанс ставка.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот протокол позволяет для экспериментальной оценки пространственно-навигации, основанной на небольших ящериц. Предыдущее исследование успешно использовали этот протокол для зондирования для пространственной навигации у самцов бокового Расплывшиеся ящериц 13. В данном конкретном исследовании, мужчины были обучены, чтобы перейти к цели отверстие и, после достижения критерия, прогрессировало в испытании зонд для оценки киев приоритезированных при навигации к цели отверстие.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

При экспериментальной проверки для пространственного обучения и памяти, существует несколько важных концептуальных вопросов, которые решаются в некоторых из основных шагов в протоколе. Во-первых, субъекты должны продемонстрировать, что они изучают расположение цели отверстие в течение тренировочных испытаний. Достигнув заданный критерий показывает, что изучение местоположения цели отверстия произошло. Если предметы не узнать местоположение цели отверстие, нет никакого осуществимого способа затем определить навигационную...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы благодарим М. Форни, Р. Магеда и К. Хеллвинкля за сбор данных, а также двух анонимных рецензентов за комментарии к предыдущей версии этой рукописи. Это исследование было поддержано премией NSF для LDL (IOS-0918268).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Лабиринт BarnesTSE Systems302050-BM/MДоступен у других поставщиков. В качестве альтернативы лабиринт Барнса может быть построен из стандартного непористого круглого стола.
Тепловая лентаBig Apple Pet Supplyтакже может использовать небольшой обогреватель, расположенный на полу под лабиринтом.
Держатель для мелких животныхPetco1230204Корпус вольера, который можно установить под лабиринтом.
Никелированные подставки для полокNewegg241941колышки, прикрепленные к нижней стороне лабиринта. Закрепляет корпус в лабиринте во время испытаний.
Веб-камера LifeCam StudioMicrosoftQ2F-00013Доступна у других поставщиков. Также можно использовать веб-камеры других марок.
Программное обеспечение для отслеживанияКод, написанный специально для Matlab
и программного обеспечения для отслеживания видео Image Toolbox
. Можно использовать другое программное обеспечение для слежения, такое как VideoMot 2 от TSE Systems.

Ссылки

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Adriano, F., Caltagirone, C., Spalletta, G. Hippocampal volume reduction in first-episode and chronic schizophrenia: A review and meta-analysis. Neuroscientist. 18, 180-200 (2012).
  2. Karl, A., Schaefer, M., Malta, L. S., Dorfel, D., Rohleder, N., Werner, A. A meta-analysis of structural brain abnormalities in PTSD. Neurosci. Biobehav. Rev. 30, 1004-1031 (2006).
  3. Shi, F., Liu, B., Zhou, Y., Yu, C., Jiang, T. Hippocampal volume and asymmetry in mild cognitive impairment and Alzheimer's disease: Meta-analyses of MRI studies. Hippocampus. 19, 1055-1064 (2009).
  4. Videbech, P., Ravnkilde, B. Hippocampal volume and depression: A meta-analysis of MRI studies. Am. J. Psychiatry. 161, 1957-1966 (2004).
  5. Sharma, S., Rakoczy, S., Brown-Borg, H. Assessment of spatial memory in mice. Life Sci. 87, 521-536 (2010).
  6. Vorhees, C. V., Williams, M. T. Assessing spatial learning and memory in rodents. ILAR J. 55, 310-332 (2014).
  7. Jenssen, T. A. Spatial awareness by the lizard Anolis Cristatellus: Why should a non-ranging species demonstrate homing behavior. Herpetologica. 58, 364-371 (2002).
  8. Pittman, S. E., Hart, K. M., Cherkiss, M. S., Snow, R. W., Fujisaki, I., Smith, B. J., Mazzotti, F. J., Dorcas, M. E. Homing of invasive Burmese pythons in South Florida: evidence for map and compass senses in snakes. Biol. Lett. 10, (2014).
  9. Day, L. B., Crews, C., Wilczynski, W. Spatial and reversal learning in congeneric lizards with different foraging strategies. Anim. Behav. 57, 393-407 (1999).
  10. Day, L. B., Crews, C., Wilczynski, W. Effects of medial and dorsal cortex lesions on spatial memory in lizards. Behav. Brain Res. 118, 27-42 (2001).
  11. Holtzman, D. A. From Slither to Hither: Orientation and Spatial Learning in Snakes. Integr. Biol. 1, 81-89 (1998).
  12. Holtzman, D. A., Harris, T. W., Aranguren, G., Bostock, E. Spatial learning of an escape task by young corn snakes, Elaphe guttata guttata. Anim. Behav. 57, 51-60 (1999).
  13. LaDage, L. D., Roth, T. C., Cerjanic, A. M., Sinervo, B., Pravosudov, V. V. Spatial memory: are lizards really deficient. Biol. Lett. 8, 939-941 (2012).
  14. Nobel, D. W. A., Carazo, P., Whiting, M. J. Learning outdoors: male lizards show flexible spatial learning under semi-natural conditions. Biol. Lett. 8, 946-948 (2012).
  15. Foà, A., Basaglia, F., Beltrami, G., Carnacina, M., Moretto, E., Bertolucci, C. Orientation of lizards in a Morris water-maze: roles of the sun compass and the parietal eye. J. Exp. Biol. 212, 2918-2924 (2009).
  16. López, J. C., Vargas, J. P., Gómez, Y., Salas, C. Spatial and non-spatial learning in turtles: the role of medial cortex. Behav. Brain Res. 143, 109-120 (2003).
  17. Petrillo, M., Ritter, C. A., Powers, A. S. A role for acetylcholine in spatial memory in turtles. Physiol. Behav. 56, 135-141 (1994).
  18. Zani, P. A., Jones, T. D., Neuhaus, R. A., Milgrom, J. E. Effect of refuge distance on escape behavior of side-blotched lizards (Uta stansburiana). Can. J. Zool. 87, 407-414 (2009).
  19. Mason, R. T. Reptilian Pheromone. Hormones, Brain, and Behavior: Biology of the Reptilia. Gans, C., Crews, D. , University of Chicago Press. 114-228 (1992).
  20. Crawley, J. N., et al. Behavioral phenotypes of inbred mouse strains: implications and recommendations for molecular studies. Psychopharmacology. 132, 107-124 (1997).
  21. Schellinck, H. M., Cyr, D. P., Brown, R. E. How Many Ways Can Mouse Behavioral Experiments Go Wrong? Confounding Variables in Mouse Models of Neurodegenerative Diseases and How to Control Them. Adv. Stud. Behav. 41, 255-366 (2010).
  22. O'Leary, T. P., Brown, R. E. The effects of apparatus design and test procedure on learning and memory performance of C57BL/6J mice on the Barnes maze. J. Neurosci. Methods. 203, 315-324 (2012).
  23. O'Leary, T. P., Brown, R. E. Optimization of apparatus design and behavioral measures for the assessment of visuo-spatial learning and memory of mice on the Barnes maze. Learn. Mem. 20, 85-96 (2013).
  24. Patil, S. S., Sunyer, B., Höger, H., Lubec, G. Evaluation of spatial memory of C57BL/6J and CD1 mice in the Barnes maze, the Multiple T-maze and in the Morris water maze. Behav. Brain. Res. 198, 58-68 (2009).
  25. Roth, T. C., Krochmal, A. R. The role of age-specific learning and experience for turtles navigating a changing landscape. Curr. Biol. 25, 333-337 (2015).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи