Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

6.8K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/55183

⸱

9 февраля 2017 г.

 ,  , 
1Biomedical Engineering, Tulane University

В этой статье

Краткое содержание

Ангиогенез включает в себя многоклеточные, мультисистемные взаимодействия, которые необходимо исследовать в физиологически значимой среде. Целью данного исследования является демонстрация способности модели культуры брыжейки крыс проводить покадровые сравнения интактных микрососудистых сетей во время ангиогенеза.

Аннотация

Ангиогенез, определяемый как рост новых кровеносных сосудов из уже существующих судов, включает в себя эндотелиальные клетки, перицитов, гладкие мышечные клетки, клетки иммунной системы, а также координацию с лимфатическими сосудами и нервами. Нескольких ячеек, многоступенчатая система взаимодействия требует исследование ангиогенеза в физиологически соответствующей среде. Таким образом, в то время как использование в пробирке моделей клеточных культур обеспечили механистических понимание, общая критика в том , что они не перепросматривать сложности , связанные с сетью микрососудов. Целью данного протокола является демонстрация возможности сделать покадровой сравнения неповрежденных микрососудистых сетей до и после стимуляции ангиогенеза в культуре тканей крыс брыжейки. Культивированный ткани содержат микрососудистых сетей, которые поддерживают их иерархию. Иммуногистохимическое маркировка подтверждает наличие эндотелиальных клеток, клеток гладкой мускулатуры, перицитов, кровеносных сосудов и лимфатических сосудов. Вddition, мечения тканей с BSI-лектинов позволяет сравнение замедленную регионов локальной сети до и после сыворотки или фактора роста стимуляции характеризуется повышенной капиллярной всходов и плотности сосудов. По сравнению с моделями общих клеточных культур, этот метод обеспечивает инструмент для исследования эндотелиальных клеток линии дифференцировки и ткани специфического ангиогенного оценки лекарственных средств в физиологически соответствующих капиллярных сетей.

Введение

Рост сети микрососудов и ремоделирования являются общие знаменатели для функции тканей, заживление ран, а также несколько патологий и ключевой процесс ангиогенеза, определяется как рост новых кровеносных сосудов из существующих 1, 2. Для тканевой инженерии новых сосудов или проектирование ангиогенные терапии на основе, понимая важность клеточной динамики, вовлеченных в ангиогенез имеет решающее значение. Тем не менее, этот процесс является сложным. Он может варьироваться в определенных местах в пределах сети микрососудов и включает в себя несколько типов клеток (т.е. эндотелиальные клетки, клетки гладких мышц, перицитов, макрофаги, стволовые клетки) и несколько систем (лимфатическую сети и нейронных сетей). Хотя модели в пробирке внесли огромный вклад в изучение взаимосвязи между различными клетками , участвующими в ангиогенезе 3, их физиологическое значение может быть подорвана из - за Thei г ограниченную сложность и тот факт , что они не точно отражают сценарий в естественных условиях. Для преодоления этих ограничений, трехмерных систем культивирования 3, исключая виво модели ткани 4, микрофлюидальные системы 5, 6, и вычислительные модели 7 были разработаны и внедрены в последние годы. Тем не менее, все еще существует необходимость в модели с возможностью покадровой для исследования ангиогенеза в неповрежденных микрососудистых сетях бывших естественных условиях. Создание новых моделей покадровой для изучения ангиогенеза с этим уровнем сложности обеспечит бесценным инструментом, чтобы понять основные механизмы, регулирующие ангиогенез и улучшить методы лечения.

Потенциальная модель , которая позволяет ех естественных условиях исследование ангиогенеза через неповрежденной сети микрососудов является брыжейки модель культуры крысы> 8. В недавней работе мы показали, что в крови и лимфатической микрососудистых сети остаются жизнеспособными после культивирования. Что еще более важно, брыжейки модель культуры крысы могут быть использованы для исследования функциональных перицитов-эндотелиальной взаимодействия клеток, крови и лимфатической соединений эндотелиальных клеток и покадровой обработки изображений. Целью данной работы является предоставление нашего протокола для метода формирования изображений в заданный промежуток времени. Наши показательные результаты документирования нескольких типов клеток, которые остаются жизнеспособными после стимуляции ангиогенеза с сывороткой и предлагают примеры использования этого метода для количественной оценки тканей специфические ангиогенные ответов, а также исследования отслеживания клеток эндотелия.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все эксперименты на животных и процедуры были одобрены Institutional Animal Care и использования Комитетом по Tulane университета (IACUC) путем.

1. Хирургическая процедура настройки

  1. Автоклавы инструменты, хирургические принадлежности и расходные материалы культуры до операции. Хирургические расходные материалы для каждой крысы включают в себя: 1 драп, 1 драпировку с предварительно вырезанное отверстие (0,5 х 1,5 дюйма) в центре, марлевые тампоны и 1 впитывающего лежащей снизу. Хирургические инструменты включают в себя: 1 скальпель с номером 10 лезвия, 2 пары пинцет и пару тонких ножниц. принадлежности культуры включают в себя: 1 простыня, 1 пара пинцета, и подготовили вставки пластины 6-а с поликарбонатом фильтрами.
  2. Стерилизовать плексигласа платформу, хирургический этап и хирургическая Benchtop пространство с 70% этанола. Держите хирургический этап в стерильной миске до использования.
    1. Создание хирургической стадии путем бурения приблизительно 2 в 1 с в отверстие в центре культуры блюдо 100 мм. Затем, используйте наждачную бумагу для сглаживаниялюбые острые края и добавить слой силиконового клея к краям в отверстие, чтобы создать приподнятую поверхность для тканей.
    2. В качестве альтернативы, разработать хирургический этап с использованием программного обеспечения САПР и сделать с помощью 3-D печати (рисунок 1).
  3. Поместите стерильный абсорбирующий вниз и лежащей снизу лежал оргстекло платформу на вершине. Поместите драпировку, без предварительно вырезанное отверстие, через нагретую площадку рядом с абсорбирующим лежащей снизу.
  4. Предварительно теплой стерильным фосфатно-буферным солевым раствором (PBS) средства массовой информации и физиологический раствор до 37 ° С. Место СМИ и PBS в отдельной посуде культуры на вершине грелку и место физиологического раствора в мл коническую трубку 50, рядом с хирургической установки.
  5. Убедитесь, что все пакеты открыты до начала операции, чтобы обеспечить стерильную обработку всех материалов. Полный перечень общих инструментов, используемых в данной процедуре, перечислены в разделе Таблица конкретных хирургических материалов и инструментов.

2. Mesenterу тканей Уборочная

  1. Использование взрослых самцов крыс Wistar (350 ± 25 г; 6 - 8-недельного возраста). Другие штаммы и возраст крыс могут быть замещены.
  2. Обезболить крысу через внутримышечной инъекции кетамина (80 мг / кг массы тела) и ксилазина (8 мг / кг массы тела). Подтвердите крыса находится под наркозом, зажимая между пальцами, чтобы проверить наличие рефлекторной реакции; не должно быть ни одного. Преимущественное обезболивание для этого терминала процедуры не требуется.
  3. Бритье брюшной области и удалить оставшиеся волосы с помощью крема для удаления волос. Протрите кожи живота дважды с 70% изопропилового спирта с последующим повидон-йода. Для салфетками хирург должен начаться в центре места операции и перейти к внешней стороне на подготовленную поверхность в круговом образом, чтобы они не перекрывают друг друга областей, которые были предварительно вымыты с той же самой части стерильной марли или стерильного ватного тампона. Затем перенесите животное в стерильном хирургической установки и место на вершине плексигласа Platформа.
  4. Используя лезвие скальпеля, сделать 0,75 - 1,25 в разрез в кишечнике, начиная с 1 в ниже грудины. Будьте осторожны, чтобы не проколоть кишечника или брыжейки (1 слой кожи, 1 слой соединительной ткани, а также 1 слой мышц).
  5. Поместите драпировку с предварительно вырезанное отверстие через надрез и поместить стерильный хирургический этап на вершине салфетке. Убедитесь, что открытие совпадет с разрезом. Используйте стерильные ватные наконечником аппликаторы, чтобы найти и вытащить подвздошной через отверстие хирургической стадии.
  6. Вытащите 6 - 8 брыжейки окна через стадию с использованием ватным аппликаторы, и будьте осторожны , чтобы не коснуться окна (Рисунок 1). Ткани обычно собирают из подвздошной области тонкой кишки, начиная около слепой кишки. Держите открытые ткани влажной с подогреваемой стерильным физиологическим раствором по мере необходимости с помощью стерильного шприца капают раствор.
  7. Эвтаназии крыс путем инъекции внутрисердечной пентобарбитала натрия (0,2 мл на крысу). Перед удалением меняsenteric окна, убедитесь, что крыса эвтаназии пальпации сердце; не должно быть никакого пульса.
  8. Удалить нужные ткани брыжейки с помощью пинцета, чтобы захватить жировой ткани и тонкие ножницы, чтобы вырезать окно. Оставьте границу жира (2 мм) вокруг окна. Вымойте ткани раз в подогретой стерильной PBS и один раз в средствах массовой информации.
  9. Возвращение экстериоризированного подвздошной в брюшную полость и распоряжаться животного в соответствии с ведомственным руководящим принципам.

3. Брыжейка культуры ткани для ЗАМЕДЛЕННАЯ исследований

  1. Передача автоклавного поставок культуры (смотри раздел 1.1) и ткани в стерильный ламинарный.
  2. Используйте пинцет для передачи каждой ткани поверх мембраны из поликарбоната фильтра. Захват тканей жировой ткани, чтобы не повредить сосудистую сеть.
  3. Быстро распространение ткани с помощью жировой ткани, соблюдая осторожность, чтобы не коснуться окна. Инверсия вставку с тканью в нижней части 6-луночного планшета и накрыть 3 мл среды (рисунок 1 ). Типичные среды, используемые для этой процедуры включает в минимальном базовом Media (MEM) с добавлением 1% пенициллин стрептомицин (PenStrep) и 10% фетальной бычьей сыворотки (ФБС). Средства массовой информации могут быть дополнены другими сывороток и / или факторов роста для стимуляции ангиогенеза.
  4. Повторите шаги 3.2 - 3.3 для каждой ткани и культуры в стандартных условиях инкубатора (5% СО 2, 37 ° С) в течение до 5 дней.

4. Замедленная Визуализация брыжейки ткани

  1. В день съемки, дополняют средства массовой информации в каждую лунку с сопряженными BSI-лектин и инкубировать в стандартных условиях культивирования в течение 30 мин. Вымойте ткани дважды лектин свободных средств массовой информации. BSI-лектин пятно остается видимым на брыжейки ткани до 3-х дней в культуре.
  2. Перенести пластину на предметный столик микроскопа. Выявление кровеносных и лимфатических сосудов, основанные на их морфологии и структуры сети.
  3. Найдите нужную область сети на каждой ткани и делать снимки. Примите к сведению изображенияместо, чтобы обеспечить тот же регион будет захвачен для последующих изображений. При использовании моторизованного столика, документировать координаты.
  4. Возвращение тканей в инкубаторе и не продолжают культуру до желаемой конечной точки. Повторите шаги 4.1 - 4.3 по мере необходимости в зависимости от требуемых экспериментальных точек времени.

5. Ткань иммунноокрашивания

  1. BSI-лектин Этикетировочное
    1. Инкубируйте ткани в течение 30 мин при температуре 37 ° С с 1:40 ФИТЦ-конъюгированного лектина в средах (2,5 мл раствора антител на лунку в 6-луночный планшет) с последующими двумя полосканий со средствами массовой информации. Для полосканий, добавить носитель, а затем немедленно заменить.
  2. Live / Dead Этикетировочное
    1. Инкубируйте ткани в течение 10 мин при температуре 37 ° С с 1: 500 2 мМ этидий гомодимер-1 и 1: 500 1 мМ кальцеина AM в среде (2,5 мл раствора антител на лунку в 6-луночный планшет) с последующими двумя полосканий со средствами массовой информации.
  3. BSI-лектин / NG2 Этикетировочное
    1. Спред ткани на микроскоп соскользнуле (1 - 2 ткани / слайд) и дайте высохнуть. Удалить лишний жир с помощью скальпеля, нажав вниз твердо акцизным жир.
    2. Закрепить ткани в холодном метаноле в течение 30 мин при -20 ° С. Промыть тканей с PBS (3 х 10 мин).
    3. Для получения первичной маркировки антител инкубировать ткани в течение 1 ч при комнатной температуре с 1: 100 кроличьего поликлонального антитела NG2 и 5% сыворотки нормальной козьей (NGS). Промыть тканей с PBS (3 х 10 мин).
    4. Для вторичной маркировки антител инкубировать ткани в течение 1 ч при комнатной температуре с 1: 100 козы к антителам кролика cy2-конъюгированные антитела (GAR-cy2) и 5% NGS. Промыть тканей с PBS (3 х 10 мин).
    5. Инкубируйте ткани в течение 30 мин при комнатной температуре с 1:40 ФИТЦ-конъюгированного лектина в PBS с последующей двух промывок PBS. Для полосканий, добавьте PBS, а затем немедленно заменить.
    6. Для крепления слайдов, охватывают ткани с 50:50 PBS и растворе глицерина и место покровное на вершине. Уплотнение скользящие края, используя лак для ногтей.
  4. LYVE-1 / РЕСАМ Этикетировочное
    1. Спред ткани на предметное стекло (1 - 2 ткани / слайд) и дайте высохнуть. Удалить лишний жир с помощью скальпеля, нажав вниз твердо акцизным жир.
    2. Закрепить ткани в холодном метаноле в течение 30 мин при -20 ° С. Промыть тканей с PBS + 0,1% сапонина (3 х 10 мин).
    3. Для получения первичной маркировки антител инкубировать ткани в течение 1 ч при комнатной температуре с 1: 200 мышиной моноклонального CD31 антитела и 1: 100 кроличьего поликлонального LYVE-1 антитела в PBS + 0,1% сапонина + 2% бычьего сывороточного альбумина (БСА) + 5% NGS , Промыть тканей с PBS + 0,1% сапонина (3 х 10 мин).
    4. Для вторичной маркировки антител, инкубировать ткани в течение 1 ч при комнатной температуре с 1: 500 Cy-3 конъюгированного стрептавидина антитела и 1: 100 GAR-CY2 в PBS + 0,1% сапонина + 2% БСА + 5% NGS. Промыть тканей с PBS + 0,1% сапонина (3 х 10 мин).
    5. Для крепления слайдов, покровных тканей с 50:50 PBS и растворе глицерина и помещают покровное на вершине. Уплотнение скользящие края, используя лак для ногтей.
  5. BrdU / BSI-лектин Этикетировочное
    1. Добавить 1 мг / мл BrdU к средствам массовой информации и заменить ткани носитель с BrdU раствором. Инкубировать в течение 2 ч при 37 ° С.
    2. Спред ткани на предметное стекло (1 - 2 ткани / слайд) и дайте высохнуть. Удалить лишний жир с помощью скальпеля, нажав вниз твердо акцизным жир.
    3. Закрепить ткани в холодном метаноле в течение 30 мин при -20 ° С. Промыть тканей с PBS (3 х 10 мин).
    4. Денатурации ДНК ткани в 2 М HCl в течение 1 ч при 37 ° С. Мытье ткани в PBS + 0,1% сапонина (3 х 10 мин).
    5. Для получения первичной маркировки антител, инкубировать ткани в течение 1 ч при комнатной температуре с 1: 100 мышиное моноклональное анти-BrdU в PBS + 0,1% сапонина + 2% БСА + 5% NGS. Промыть тканей с PBS + 0,1% сапонина (3 х 10 мин).
    6. Для вторичной маркировки антител, инкубировать ткани в течение 1 ч при комнатной температуре с 1: 100 козьего анти-мышиного Cy-3 антитела, конъюгированного (GAM-Су3) в PBS + 0,1% сапонина + 2% БСА + 5% NGS. Промыть тканей с PBS + 0,1% сапонина (3 х 10 мин).
    7. Инкубируйте ткани в течение 30 мин при комнатной температуре с 1:40 ФИТЦ-конъюгированного лектина в PBS с последующей двух промывок PBS.
    8. Для крепления слайдов, покровных тканей с 50:50 PBS и растворе глицерина и место покровное на вершине. Уплотнение скользящие края, используя лак для ногтей.
  6. BSI-лектин / маркировка CD11b
    1. Спред ткани на предметное стекло (1 - 2 ткани / слайд) и дайте высохнуть. Удалить лишний жир с помощью скальпеля, нажав вниз твердо акцизным жир.
    2. Закрепить ткани в холодном метаноле в течение 30 мин при -20 ° С. Промыть тканей с PBS + 0,1% сапонина (3 х 10 мин).
    3. Для получения первичной маркировки антител инкубировать ткани в течение 1 ч при комнатной температуре с 1: 100 мышиное анти-крысиного CD11b в PBS + 0,1% сапонина + 2% БСА + 5% NGS. Промыть тканей с PBS + 0,1% сапонина (3 х 10 мин).
    4. Для вторичной маркировки антител инкубировать ткани в течение 1 ч при комнатной температуре с 1: 100 GAM-Су3 в PBS + 0,1% сапонина + 2% БСА + 5% NGS. Вымойте тканей с PBS+ 0,1% сапонина (3 х 10 мин).
    5. Инкубируйте ткани в течение 30 мин при комнатной температуре с 1:40 ФИТЦ-конъюгированного лектина в PBS с последующей двух промывок PBS.
    6. Для крепления слайдов, покровных тканей с 50:50 PBS и растворе глицерина и место покровное на вершине. Уплотнение скользящие края, используя лак для ногтей.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

После 3 -х дней в культуре ткани были помечены живой / мертвой комплекту жизнеспособность / цитотоксичность , чтобы продемонстрировать жизнеспособность микрососудов у крыс брыжейки модели культуры (фиг.2А). Большинство клеток, присутствующих в брыжейки остаются жизнеспособными в культуре, где эндотелиальные клетки были определены на основании их расположения в капиллярных сегментах. Пролиферации эндотелиальных клеток была также подтверждена лектин / BrdU маркировки

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Этот протокол документов метод с использованием модели культуры крысы брыжейки в качестве инструмента для экс естественных условиях покадровой визуализации роста микрососудистой сети. Предыдущая работа в нашей лаборатории установила использование нашей модели 1) ангиогенеза 8, 2) лимфангиогенез 8, 3) перицитов-эндотелиальной взаимодействий клеток 8, и 4) антиангиогенная тестирования на наркотики 9. Способность к визу...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

Эта работа была поддержана грантом 5-P20GM103629 Национального института здравоохранения WLM и Центром старения Тулейна. Мы хотели бы поблагодарить Мэтью Найса за его помощь в редактировании текста протокола.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
ДрапировкаCardinal Health401212" x 12" Bio-Shield регулярная стерилизационная обертка
ручка скальпеляхирургический инструментRS-9843ручка скальпеля, #3; Сплошной;
Стерильное хирургическое лезвиеCincinnati Surgical0110Нержавеющая сталь; Чашка для культур размера 10
(60 мм)Thermo Scientific13018110/Рукавный
щипец Graefe (изогнутый пинцет)Хирургический инструмент RobozRS-5135Микрорассекающие щипцы; Зубчатый; небольшой изгиб; Ширина наконечника 0,8 мм;
Щипец Graefe длиной 4 дюйма (прямой пинцет)Хирургический инструмент RobozRS-5130Микрорассекающие щипцы; зубчатый, прямой; Ширина наконечника 0,8 мм;
Микроножницы Noyesхирургический инструмент RobozRS-5677ножницы с микродиссекцией, пружинные ножницы;
прямые, остро-тупые острия; режущая кромка 13 мм; 0,25 мм Ширина кончика, общая длина 4 1/2 дюйма
Марлевые салфеткиFisherBrand13-761-52Нестерильные ватные марлевые губки; 4 x 4 дюйма 12-слойные
хлопчатобумажные аппликаторыFisherBrand23-400-1246 дюймов; деревянный вал; одноразовая только
6-луночная пластинаFisher Scientific08-772-49плоское дно с крышкой с низким испарением; Полистирол; Непирогенный
стерильный шприц 5 млFisher Scientific14-829-45Luer-Lok Tip
Sterile BowlMedical Action Industries Inc.0123232 унции Мешочек для кожуры; Синий; стерильные одноразовые
6-луночные пластинчатые вставки (вставки CellCrown)SIGMAZ681792-3EA нестерильная
поликарбонатная фильтрующая мембранаSIGMATMTP04700мембранный фильтр Isopore; Поликарбонат; Гидрофильный; 5.0  &микро; м, 47  мм, Белая равнина
<сильная>Название<strong>Company>Номер в каталогеКомментарии/Описание
BeuthanasiaSchering-Plough Animal Health Corp. Union (Заказано в MWI Veterinary Supply)MWI #: 011168Активный ингредиент: На 100 мл, 390 мг пентобарбитала натрия, 50 мг фенитоина натрия 
КетаминFort Dodge Animal Health (Заказан в MWI Veterinary Supply)MWI #: 000680Kateset 100 мг/мл
XylazineLLOYD. Inc. (Заказан в MWI Veterinary Supply)MWI #: 000680Anased 100 мг/мл
Физиологический растворBaxter2F7122
PBS Invitrogen14040-133
MEMInvitrogen11095080
PenStrepInvitrogen15140-122
FBSInvitrogen16000-044
BSAJackson ImmunoResearch001-000-162
Saponin SIGMAS7900-100G
Изопропиловый спиртFisher ScientificS25372
Повидон-йодоперанд82-226
Соляная кислотаSIGMA320331
метанолFisher Scientific67-56-1
ГлицеринFisher Scientific56-81-5
ФИТК-конъюгированный ЛектинSIGMAL9381-2MG
Anti-NG2 Хондроитинсульфат Протеогликан АнтителоSIGMAAB5320
PECAM (CD31) АнтителоBD Biosciences555026
LYVE-1 АнтителоAngioBio Co.11-034
Козье анти-кроличьи Cy2-конъюгированное антителоJackson ImmunoResearch111-585-144
Козье анти-мышиное Cy3-конъюгированное антителоJackson ImmunoResearch115-227-003
Стрептавидин Cy3-конъюгированное антителоJackson ImmunoResearch016-160-084
Набор для живых/мертвых жизнеспособных/цитотоксичных веществInvitrogenL3224
Обычная сыворотка для козлятников Jackson ImmunoResearch005-000-121
5-бромо-2'-дезоксиуридинSIGMAB5002
Моноклональный мышиный анти-бромодоксиуридин                                              Клон Bu20aDakoM074401-8
Мышь против крыс CD11b AbD SerotecMCA275R
роботизированный длиной 4 дюйма длиной 4 дюйма, , , 6-луночные пластинчатые вставки ;

Ссылки

  1. Carmeliet, P., Jain, R. K. Angiogenesis in cancer and other diseases. Nature. 407 (6801), 249-257 (2000).
  2. Carmeliet, P. Angiogenesis in life, disease and medicine. Nature. 438 (7070), 932-936 (2005).
  3. Kaunas, R., Kang, H., Bayless, K. J. Synergistic Regulation of Angiogenic Sprouting by Biochemical Factors and Wall Shear Stress. Cell Mol Bioeng. 4 (4), 547-559 (2011).
  4. Pitulescu, M. E., Schmidt, I., Benedito, R., Adams, R. H. Inducible gene targeting in the neonatal vasculature and analysis of retinal angiogenesis in mice. Nat Protoc. 5 (9), 1518-1534 (2010).
  5. Song, J. W., Munn, L. L. Fluid forces control endothelial sprouting. Proc Natl Acad Sci U S A. 108 (37), 15342-15347 (2011).
  6. Chan, J. M., et al. Engineering of in vitro 3D capillary beds by self-directed angiogenic sprouting. PLoS One. 7 (12), e50582(2012).
  7. Peirce, S. M., Mac Gabhann, F., Bautch, V. L. Integration of experimental and computational approaches to sprouting angiogenesis. Curr Opin Hematol. 19 (3), 184-191 (2012).
  8. Stapor, P. C., Azimi, M. S., Ahsan, T., Murfee, W. L. An angiogenesis model for investigating multicellular interactions across intact microvascular networks. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 304 (2), H235-H245 (2013).
  9. Azimi, M. S., et al. An ex vivo model for anti-angiogenic drug testing on intact microvascular networks. PLoS One. 10 (3), e0119227(2015).
  10. Nicosia, R. F., Ottinetti, A. Growth of microvessels in serum-free matrix culture of rat aorta. A quantitative assay of angiogenesis in vitro. Lab Invest. 63 (1), 115-122 (1990).
  11. Hutter-Schmid, B., Kniewallner, K. M., Humpel, C. Organotypic brain slice cultures as a model to study angiogenesis of brain vessels. Front Cell Dev Biol. 3, 52(2015).
  12. Sawamiphak, S., Ritter, M., Acker-Palmer, A. Preparation of retinal explant cultures to study ex vivo tip endothelial cell responses. Nat Protoc. 5 (10), 1659-1665 (2010).
  13. Unoki, N., Murakami, T., Ogino, K., Nukada, M., Yoshimura, N. Time-lapse imaging of retinal angiogenesis reveals decreased development and progression of neovascular sprouting by anecortave desacetate. Invest Ophthalmol Vis Sci. 51 (5), 2347-2355 (2010).
  14. Norrby, K. In vivo models of angiogenesis. J Cell Mol Med. 10 (3), 588-612 (2006).
  15. Kelly-Goss, M. R., Sweat, R. S., Azimi, M. S., Murfee, W. L. Vascular islands during microvascular regression and regrowth in adult networks. Front Physiol. 4, 108(2013).
  16. Kelly-Goss, M. R., et al. Cell proliferation along vascular islands during microvascular network growth. BMC Physiol. 12, 7(2012).
  17. Skalak, T. C., Price, R. J. The role of mechanical stresses in microvascular remodeling. Microcirculation. 3 (2), 143-165 (1996).
  18. Kadohama, T., Nishimura, K., Hoshino, Y., Sasajima, T., Sumpio, B. E. Effects of different types of fluid shear stress on endothelial cell proliferation and survival. J Cell Physiol. 212 (1), 244-251 (2007).
  19. Milkiewicz, M., Brown, M. D., Egginton, S., Hudlicka, O. Association between shear stress, angiogenesis, and VEGF in skeletal muscles in vivo. Microcirculation. 8 (4), 229-241 (2001).
  20. Corliss, B. A., Azimi, M. S., Munson, J. M., Peirce, S. M., Murfee, W. L. Macrophages: An Inflammatory Link Between Angiogenesis and Lymphangiogenesis. Microcirculation. 23 (2), 95-121 (2016).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

ex vivoBSI
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.