Мышиные лимфоцит Этикетировочное по<sup&gt; 64</sup&gt; Си-антитело к рецептору Ориентация на<em&gt; В Vivo</em&gt; Cell Торговля ПЭТ / КТ

Sabrina H. L. Hoffmann; Andreas Maurer; Dorothea I. Reck; Gerald Reischl; Bernd J. Pichler; Manfred Kneilling; Christoph M. Griessinger

doi:10.3791/55270

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Мышиные лимфоцит Этикетировочное по

8.3K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/55270

⸱

29 апреля 2017 г.

Sabrina H. L. Hoffmann¹ , Andreas Maurer¹ , Dorothea I. Reck¹ , Gerald Reischl¹ , Bernd J. Pichler¹ , Manfred Kneilling¹^,² , Christoph M. Griessinger¹

¹Werner Siemens Imaging Center, Department of Preclinical Imaging and Radiopharmacy, Eberhard Karls University Tübingen, ²Department of Dermatology, Eberhard Karls University Tübingen

В этой статье

Краткое содержание

После получения ⁶⁴ Сu-модифицированного моноклонального антитела связывания с рецептором Т - клеток трансгенного мышея, Т - клетками являются радиоактивно метили в естественных условиях, анализировали на жизнеспособность, функциональность, стабильность маркировки и апоптоз, и адаптивно переносили в мышей с дыхательными путями гиперчувствительности замедленного типа реакцию для неинвазивного изображений с помощью позитронно-эмиссионной томографии / компьютерной томографии (ПЭТ / КТ).

Аннотация

Этот протокол иллюстрирует получение ⁶⁴ Cu и хелатор конъюгацию / радиоактивную моноклональное антитела (монАТ) с последующим мышиной культурой лимфоцитов клеток и ⁶⁴ Cu-антитело рецептором ориентации клеток. В пробирке оценки мечена и неинвазивные в естественных условиях отслеживания клетки в животной модели с воздуховодной гиперчувствительности замедленного типа реакции (DTHR) с помощью ПЭТ / КТ описаны.

Более подробно, сопряжение с мАтом с хелатором 1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10-тетрауксусной кислотой (DOTA) показано. После производства радиоактивного ⁶⁴ Cu, радиомечения в DOTA-конъюгированных мАт описано. Далее, расширение куриного овальбумина (Cova) -специфические CD4 ⁺ интерферона (ИФН) -γ-продуцирующих Т - хелперы (Кова-TH1) и последующее введение радиоактивной клеток COVA-ТН1 изображены. Различные методы в пробирке представлены для оценки эфффекты из ⁶⁴ Cu-радиомечения о клетках, таких как определение жизнеспособности клеток с помощью трипанового синих, окрашивания для апоптоза с аннексином V для проточной цитометрии, и оценка функциональности с помощью IFN-gamma иммуноферментного теста (ELISA) , Кроме того, определение радиоактивного поглощения в клетки и стабильность маркировки описаны в деталях. Этот протокол далее описывает, как выполнять исследование отслеживания клеток в животной модели для дыхательных путей DTHR и, следовательно, индукция COVA-индуцированных острого DHTR в дыхательных путях BALB / с мышеем включена. Наконец, надежная ПЭТ / КТ рабочего процесс, включая приобретение изображений, реконструкцию и анализ представлен.

⁶⁴ Cu-антитело , воздействующий подход рецептора с последующей интернализацией рецепторов обеспечивает высокую специфичность и стабильность, снижение клеточной токсичность, а также низкие цены эффлюксных по сравнению с обычными ПЭТ-индикаторами для маркировки клеток, например , ⁶⁴ Cu-pyruvaldehyde бис (N-4-methylthiosemicarbazone) ⁽⁶⁴ Cu-PTSM). И, наконец, наш подход позволяет неинвазивным в естественных условиях отслеживания клетки с помощью ПЭТ / КТ с оптимальным отношением сигнала к фону в течение 48 часов. Этот экспериментальный подход может быть переведен в различные моделях животных и типов клеток с мембраносвязанными рецепторами, которые усваиваются.

Введение

Неинвазивная отслеживания клеток является универсальным инструментом для мониторинга функции клеток, миграции и самонаведения в естественных условиях. Недавние исследования отслеживания клетки были сосредоточены на мезенхимальных ^{^1,} ² или костного мозга стволовых клеток , полученных ³ в контексте регенеративной медицины, аутологичных периферических белых кровяных клеток в воспалении или Т - лимфоцитов в приемными терапии клеток против рака ^{^3,} ^4. Выяснение мест действия и основных биологических принципов клеточной терап....