Здесь мы сообщаем о различных этапах разработки основанного на знаниях эффективного микоинсецицита, включая изоляцию, идентификацию, скрининг и подбор «энтеропатогенного гриба« наилучшего соответствия », Metarhizium anisopliae , для борьбы с насекомыми-вредителями в сельском хозяйстве ,
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Основной проблемой при разработке коммерческих микоинсектицидов является скорость уничтожения по сравнению с химическими инсектицидами. Поэтому важными шагами являются изоляция и скрининг для выбора быстродействующего, сильно вирулентного энтомопатогенного гриба. Энтомопатогенные грибы, такие как Metarhizium, Beauveria и Nomurea , которые действуют при контакте, лучше подходят, чем Bacillus thuringiensis или вирус нуклеополедроза (NPV), которые необходимо принимать внутрь насекомого-вредителя. В настоящей работе мы выделили 68 штаммов Metarhizium от инфицированных насекомых с использованием метода разбавления почвы и приманки. Изоляты были идентифицированы путем амплификации и секвенирования области рДНК ITS1-5.8S-ITS2 и 26S. Наиболее вирулентный штамм Metarhizium anisopliae был выбран на основе медианной летальной концентрации (LC 50 ) и времени (LT 50 ), полученной в биоанализах насекомых, против личинок III-типа Helicoverpa armigera.Массовое производство спор по выбранному штамму проводили с твердофазной ферментацией (SSF) с использованием риса в качестве субстрата в течение 14 дней. Споры экстрагировали из спорулированной биомассы с использованием 0,1% твин-80 и получали различные составы спор. Полевые испытания составов для борьбы с заражением H. armigera в голубем были проведены рандомизированным блочным дизайном. Уровни контроля заражения, полученные с маслом и водными составами (78,0% и 70,9% соответственно), были лучше, чем 63,4%, полученные химическим пестицидом.
Введение
С введением хлорорганических пестицидов в 1940 - х годах в Индии, использование пестицидов увеличилось во много раз 1, с урожая вредители все еще обходится в миллиарды рупий 2 в год с точки зрения потери урожая в сельскохозяйственном производстве. Широкое и неразумное использование синтетических пестицидов является постоянной угрозой для окружающей среды и здоровья человека 1 . Неизбирательное использование пестицидов приводит к остаткам в почве и истощению природных хищников-вредителей. Он также служит мощным давлением отбора для изменения генетического состава популяции вредителей, что пр....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Выделение энтомопатогенных грибов
- Метод разбавления почвы
- Соберите образцы почвы и насекомых-микозов из разных полей сельскохозяйственных культур ( Таблица 1 ). Выделите энтомопатогенные грибы из образцов почвы, используя метод нанесения покрытия на почву 8 .
Примечание: в этом исследовании образцы были собраны из Пуны (18 ° 31'13''N, 73 ° 51'24''E) и Buldhana (19 ° 58'36''N 76 ° 30'30''E ), Махараштра, Индия. - Взвесьте 10 г каждого образца почвы и добавьте их отдельно к 90 мл стерильного 0,1% (мас. / Об.) Твин-80.
- ....
- Соберите образцы почвы и насекомых-микозов из разных полей сельскохозяйственных культур ( Таблица 1 ). Выделите энтомопатогенные грибы из образцов почвы, используя метод нанесения покрытия на почву 8 .
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
В ходе исследований различные штаммы Metarhizium, Beauveria и Nomuraea были изолированы различными методами изоляции (данные не показаны) 6 , 14. Было обнаружено, что штаммы Metarhizium более эффективны при контроле H. armigera , ужасного вредителя в импульсах 6 , 14 , Дальнейшие выделения были нацелены на выделение штаммов Metarhizium из разных полей сельскох.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
В 1880-х годах была сделана первая попытка использовать Metarhizium для борьбы с жуком-скарабеем Anisoplia austriaca и куркулией сахарной свеклы Cleonis punctiventris 21 . В этом протоколе одним из предварительных условий было выделение вирулентного штамма либо из почвы, либо из зараженных насекомых. Действительно, другие параметры, такие как LC 50 , LT 50 и ST 50 , значительно способствовали экономической эффективности пр.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторам нечего раскрывать.
Благодарности
Авторы признают вклад сотрудников из программы Индо-швейцарского сотрудничества в области биотехнологии (ISCB) Департамента биотехнологии, Дели и Швейцарского агентства по развитию и сотрудничеству, Берн, Швейцария. Признаны вклад студентов и сотрудников проекта, участвующих в разработке микоинсектицидов, в том числе Вандана Гормаде, Паллави Нахар, Прия Ядав, Шуклангби Кулкарни, Маниша Капур, Сантош Чаван, Равиндра Видхате, Шамала Мане и Абхиджит Ланде. EKP и SGT выражают благодарность Комиссии университетов по грантам, Индии и Совету научных и промышленных исследований (CSIR), соответственно, за научные стипендии. МВД признает поддержку Совета промышленных и научных....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Агар | Hi-Media | RM666 | Реагент |
| сульфат аммония | Thomas Baker | 11645 | Реагентный |
| анализатор ДНК | Прикладная биосистема | ABI призма 3730 | инструмент |
| Набор для ислации ДНК | Qiagen | 69104 | Реактив |
| Dodine | Sigma | 45466 | Набор |
| экстракции | Гель Qiagen | 28604 | Реактив |
| Глюкоза | Hi-Media | GRM077 | Реактив |
| Knapsac sparyer | Kaypee | HY-16L (1004) | Инструмент |
| Peptone | Hi-Media | RM006-500G | Реагент |
| Полипропиленовые флаконы | Laxbro | SV-50 | Пластиковая посуда |
| Картофельный декстроза-агар (PDA) | Hi-Media | M096-500G | Реагент |
| Tween-80 | SRL | 28940 | Реагент |
| Ультрамалый объем sparyer | Matabi | INSECDISK | Instrument |
| Unicorn-bags | Мешок Unicorn | UP-140024-SMB | Autoclavalbe для |
| SSF Дрожжевой экстракт | Hi-Media | RM027-500G | Реагент |
| Chromas 2.1 | программное обеспечение |
Ссылки
- Aktar, M. W., Sengupta, D., Chowdhury, A. Impact of pesticides use in agriculture: their benefits and hazards. Interdisciplinary Toxicology. 2 (1), 1-12 (2009).
- Dhaliwal, G. S., Jindal, V., Mohindru, B. Crop losses due to insect pests: Global and Indian scenario. Indian J Entomol. 77 (2), 165-168 (2015).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
