Для изучения прогрессии опухоли яичников в физиологически соответствующей модели, многоклеточные сфероиды культивировали в микроустройство в смоделированных потоке текучей среды. Эта динамическая 3D модель эмулирует внутрибрюшного среду с клеточными и механических компонентов, где происходит яичников раковых метастаз.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Моделирование рака яичников Многоклеточная Сфероид Поведение в микроустройство Dynamic 3D перитонеального
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Рак яичников характеризуется широким перитонеального метастазирования, с опухолевыми сферами обычно встречаются в злокачественных асцит. Это связано с плохими клиническими результатами и в настоящее время не хватает эффективного лечения. И трехмерные (3D) окружающая среда и динамические механические силы являются очень важными факторами в этом метастатического каскада. Тем не менее, традиционные клеточные культуры не Повторим этот естественный микросреды опухоли. Таким образом, в естественных условиях -как модели , которые могут эмулировать внутрибрюшной среды имеют очевидное значение. В этом исследовании, новая платформа Микрожидкостных брюшины была создана, чтобы имитировать ситуацию яичников сфероидов рака в брюшной полости во время метастазирования. Яичниковые сфероидов рака, сгенерированные под неприлипающими состоянии культивировали в микроканалов, покрытых перитонеального мезотелиальной клеток, подвергнутых физиологически соответствующего напряжения сдвига. Таким образом, эта динамика 3D-рак яичников Мезотелия микрофонrofluidic платформа может предоставить новые знания по основам биологии рака и служить в качестве платформы для потенциального скрининга и разработки лекарственных средств.
Введение
Рак яичников является наиболее летальной гинекологический рак и характеризуется широко распространенной перитонеального распространения и образование злокачественных асцит 1. Эта обширная перитонеальный метастаз представляет собой серьезную клиническую проблему и связано с плохими клиническими результатами. В отличие от большинства твердых карцином, которые метастазируют через кровь, рак яичников, прежде всего, рассеивает в брюшную полость. Опухолевые клетки существуют как многоклеточные агрегаты / сфероиды в процессе метастазирования 2. Тот факт , что подвеска культура может обогатить овариальных стволовых рак / ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Микрожидкостных Конструкция устройства и изготовление
- Микрожидкостных мастер-дизайн
- Дизайн и рисовать микрожидкостных шаблон канала с любой компьютерной системы автоматизированного проектирования (САПР).
Примечание: Как правило, САПР чертеж может быть отправлен в фотошаблон компании для производства фотошаблона. Микрожидкостных конструкция состоит из трех идентичных параллельных каналов, каждый со следующими размерами: 4 мм × 25 мм × 250 мкм (ширина × длина × высота) и установить 2 мм друг от друга. На обоих концах канала были разработаны с 127 ° углами для облегчения жидкости вход и выход (рис 1B). Канал , используемый ....
- Дизайн и рисовать микрожидкостных шаблон канала с любой компьютерной системы автоматизированного проектирования (САПР).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Используя этот протокол, микрожидком платформа была создана для моделирования яичников сфероидов рака с мезотелиальной клеток в условиях гидродинамической. Первичные перитонеальные мезотелиальные клетки человека культивировали в микроустройство в течение 16 ч и наблюдают под ярко-поле микроскопа. Как показано на фигуре 2А, нижний канал был успешно покрыт монослоем НРМС. Важно отметить, что образование пузырьков во время фибронектина или НРМС кучность приведет к отказу ка.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Этот анализ предлагает гибкую и физиологически соответствующую модель, которая может быть объединена с различными биохимическими и клеток на основе анализов, в том числе, но не ограничиваясь ими, анализов адгезии, мезотелиальной анализов очистки, а также скрининга лекарственных средств. Он может быть применен к оценке влияния внутрибрюшинного микросреды на прогрессирование рака. Тем не менее, некоторые экспериментальные условия , возможно , необходимо оптимизировать, в зависимости от целей проекта (например, ко.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют ничего раскрывать.
Благодарности
Эта работа была поддержана исследовательских грантов Совета Гонконга (гранты 17122014, C1013-15G, 719813E и 17304514). АСТ Вонг является получателем Croucher старшего научного братства.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Кремниевая пластина | University wafer | #1196 | 100 мм |
| SU-8 2075 фоторезист | Разработчик Microchem | ||
| SU-8 | Microchem | 108-65-6 | |
| Трихлор (1H, 1H, 2H, 2H-перфтороктил) силан | Sigma | 448931 | |
| Sylgard 184 | Dow Corning | 1673921 | полидиметилсилоксан (PDMS) + набор отвердителя |
| Biopsy punch | Miltex | 33-31AA | Диаметр 1 мм |
| Плазменный очиститель | Harrick Plasma | PDC-002 | |
| Полиэтиленовая трубка | SCI | BB31695-PE/5 | 0,86 мм (внутренний диаметр) |
| Шприц | Terumo | ||
| Шприцевой насос | Более длинный прецизионный насос | LSP01-2A | |
| Medium 199 | Invitrogen | 31100-035 | Добавить 2,2 г/л бикарбоната натрия |
| MCDB 105 Medium | Sigma | M6395 | |
| Фетальная бычья сыворотка (FBS) | Гиклон | SH30068,02 | |
| Пенициллин/стрептомицин | Инвитроген | 15070-063 | |
| Трипсин ЭДТА раствор | Gibco | 25300-054 | 0,05% Трипсин - 0,01% ЭДТА, фенол красный |
| Фибронектин человека | BD | 354008 | |
| Агароза | Invitrogen | 15510-027 | |
| 5-хлорметилфлуоресцеин диацетат | Life technologies | C7025 | Green CMFDA |
| CO2 инкубатор | SANYO | MCO-18AIC | |
| Centrifuge | Hitachi | CT15RE | |
| Флуоресцентный микроскоп | Nikon | Модель: 80i или ECLIPSE Ti; программное обеспечение: SPOT | |
| SKOV-3& НБСП; | Подарок от доктора Н. Ауэрсперга (Университет Британской Колумбии) |
Ссылки
- Jemal, A., et al. Global cancer statistics. CA: Cancer J. Clin. 61, 69-90 (2011).
- Burleson, K. M., et al. Ovarian carcinoma ascites spheroids adhere to extracellular matrix components and mesothelial cell monolayers. Gynecol. Oncol. 93, 170-181 (2004).
- Chau, W. K., Ip, C. K., Mak, A. S., Lai, H.....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
