Method Article

Абсолютный Количественное A & beta; 1-42 В спинномозговой жидкости С помощью масс-спектрометрического Reference Процедура измерения

DOI:

10.3791/55386

⸱

March 21st, 2017

 ,  ,  , 
1Institute of Neuroscience and Physiology, Department of Psychiatry and Neurochemistry, The Sahlgrenska Academy at University of Gothenburg, Sahlgrenska University Hospital, 2Clinical Neurochemistry Laboratory, Sahlgrenska University Hospital, 3UCL Institute of Neurology, Queen Square

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Описана эталонная методика измерения для абсолютного количественного определения Aβ1-42 в спинномозговой жидкости человека на основе твердофазной экстракции и тандемной масс-спектрометрии жидкостной хроматографии.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Болезнь Альцгеймера (БА) является наиболее распространенным нейродегенеративным заболеванием среди пожилых людей и составляет 60-80% всех случаев деменции. В настоящее время диагноз БА основан на когнитивных тестах и обследованиях психического состояния, но пептид бета-амилоид (Aβ) в спинномозговой жидкости (СМЖ) все чаще используется в клинических испытаниях и условиях. Как и в случае с большинством белковых и пептидных биомаркеров, количественная оценка проводится с использованием методов, основанных на антителах, таких как иммуноферментный анализ (ИФА). Однако внутрилабораторная и межлабораторная вариабельность этих анализов затрудняет его использование в качестве диагностического маркера в клинической практике.

Независимая от антител процедура эталонного измерения (RMP) была разработана на основе твердофазной экстракции (SPE) и жидкостной хроматографии (LC)-тандемной масс-спектрометрии (MS/MS), где стабильные, меченные изотопами пептиды Aβ использовались в качестве внутренних стандартов, что позволило провести абсолютную количественную оценку. Для измерений использовался гибридный квадруполь-орбитрап с высоким разрешением. Метод позволяет количественно определить содержание ликвора Aβ1-42 в диапазоне 150-4 000 пг/мл.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Болезнь Альцгеймера (AD) является наиболее распространенной формой слабоумия и затрагивает около 35 миллионов человек во всем мире 1. Нейропатологических признаки болезни широко , как полагают, лежат в основе патогенеза АД являются внутриклеточными нейрофибриллярных клубки тау - белка гиперфосфорилированного 2 и внеклеточные бляшки , состоящие из агрегированного бета-амилоида (A & beta ; ) пептидов 3. В соответствии с этим, оценка патологии бляшек в естественных условиях с помощью биомаркеров недавно были включены в диагностические критерии для исследований 4 AD. Для измерений ЦСЖ A & beta ; 1-42, несколько иммунологические доступны и используются во многих клинических лабораториях 5. Концентрация Ар 1-42 в ЦСЖ у пациентов с БА примерно на 50% ниже , чем в когнитивно нормального пожилого возраста, отражающие осаждение пептида в бляшках в брайн 6, 7.

Эти биомаркеры в основном анализируются с помощью иммунологических методов (например, на основе антител методик), однако эти анализы могут быть под влиянием эффектов матрицы 8. Использование иммуноанализа на различных технологических платформах и отсутствие анализа стандартизации 9, 10 делает введение глобальных концентраций отрезными сложных 11, 12. Аналитически подтверждено РМП позволило бы равномерную калибровку различных аналитических платформ, в идеале приводит к лучшей сопоставимости данных различных аналитических платформ и лучшего контроля факторов, способствующих общей изменчивости измерений.

Абсолютное количественное определение A & beta ; 1-42 с использованием разработанного метода LC-MS / MS преодолевает многие из проблем , связанных с технич основе антителiques. Метод, перечисленные в качестве RMP Объединенного комитета по прослеживаемости в лабораторной медицине (JCTLM база данных идентификационный номер C11RMP9) путем будет использоваться для определения абсолютной концентрации A & beta ; 1-42 в качестве сертифицированного эталонного материала (CRM) для согласования CSF A & beta 1 -42 измерения всей техники и аналитических платформ. Описанный рабочий процесс должен иметь значение для развития кандидатов эталонных методов для пептидов и белков в составе других областях медицины.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Примечание: Этот протокол требует аликвоты по крайней мере, 50 мкл с концентрацией 50 мкг / мл для каждого пептида, Ар в качестве исходного материала. Пептиды A & beta; должен быть растворен в 20% ацетонитриле (ACN) и 4% -го раствора концентрированный аммиак в деионизированной воде (об / об) и хранили при температуре 80 ° С.

Внимание: Таблицу 1 для информации о безопасности полетов.

1. Приготовление растворов

  1. Приготовьте 100 мл 20% -ного ACN и 4% концентрированного раствора аммиака в деионизированной воде (об / об) разбавлением 20 мл ACN и 4 мл концентрированного аммиака (~ 25%) в деионизированной воде. Отрегулировать конечный объем до 100 мл деионизированной водой. Сделайте свежий ежедневно.
  2. Приготовьте 50 мл 5 М гуанидин-гидрохлорида растворением 26,08 г гуанидина гидрохлорида в деионизированной воде до конечного объема 50 мл. Хранить при температуре 20 ° C и сделать свежий ежемесячно.
  3. Приготовьте 200 мл 4% -ной фосфорной кислоты в деионизированной воде (об /v) путем разбавления 9,4 мл концентрированной фосфорной кислоты (~ 85%) в деионизированной воде. Отрегулировать конечный объем до 200 мл с помощью деионизированной воды. Хранить в холодильнике и сделать свежий еженедельно.
  4. Приготовьте 50 мл 75% ACN и 10% -ного раствора концентрированного аммиака (об / об) в деионизированной воде, разбавляя 37.5 мл ACN и 5 мл концентрированного аммиака (~ 25%) в деионизированной воде. Отрегулировать конечный объем до 50 мл деионизированной водой. Сделайте свежий ежедневно.
  5. Оттепель по меньшей мере, 2,5 мл человеческого CSF для калибраторов, полученных из обезличенной оставшихся образцов из обычного клинического анализа.
  6. Подготовка искусственного CSF, содержащий 150 мМ Na, 3,0 мМ K, 1,4 мМ Са, 0,8 мМ Mg, 1,0 мМ P, и 155 мМ Cl в деионизированной воде и добавляют бычий сывороточный альбумин до конечной концентрации 4 мг / мл. Только 1 мл необходимо на анализ, но подготовить большой объем, Аликвоту его, и хранить для будущего использования.

2. Получение калибраторов

  1. Приготовьте 0,5 мл 4 мкг / мл 15 NAβ 1-42 пептида путем добавления 40 мкл 50 мкг / мл 15 NAβ 142 до 0,46 мл 20% -ного ACN и 4% концентрированного аммиака в микроцентрифужных трубки 0,5 мл. Смешать на вихревом смесителе в течение 1 мин.
  2. Подготовка 2 мл 100 нг / мл 15 NAβ 1-42 пептида путем добавления 50 мкл 4 мкг / мл 15 NAβ 142 до 1,95 мл 20% -ного ACN и 4% концентрированного аммиака в микроцентрифужных трубки 2-мл. Смешать на вихревом смесителе в течение 1 мин.
  3. Приготовьте шесть решений калибратора (AF) путем смешивания объемы каждого раствора , указанного в таблице 2. Используйте 0,5, 1,5, и 2 мл микроцентрифужных трубки. Смешать на вихревом смесителе в течение 1 мин.
  4. Подготовка заключительного калибратора (в дубликатах) в 0,5 мл микропробирок путем добавления соответствующих калибровочных растворов и человеческого CSF в соответствии с таблицей 3. Перемешать на вихревом смесителе в течение 1 мин.

3. Подготовка внутреннего стандарта

  1. Приготовьте 2 мл 0,8 мкг / мл 13 CAβ 1-42 пептида путем добавления 32 мкл 50 мкг / мл 13 CAβ 142 до 1.968 мл 20% -ного ACN и 4% концентрированного аммиака в микроцентрифужных трубки 2-мл. Смешать на вихревом смесителе в течение 1 мин.
  2. Подготовка 5 мл 16 нг / мл 13 CAβ 1-42 пептида добавлением 0,1 мл 0,8 мкг / мл до 4,9 мл 20% -ного ACN и 4% концентрированного аммиака в 5 мл микроцентрифужных трубки. Смешать на вихревом смесителе в течение 1 мин.

4. Подготовка образца Коэффициент чувствительности

Примечание: Коэффициент чувствительности (RF) , определение выполняется для определения концентрации меченого пептида , используемого для калибровки (15 NAβ 1-42). Для этого необходимо, чтобы концентрация нативной A & beta ; 1-42 пептида определена методом аминокислотного анализа (AAA). Таким образом, объем и концентрация нативных пептидных аликвот A & beta ; 1-42должны отвечать требованиям ААА.

  1. Приготовьте 0,5 мл 4 мкг / мл (родной Немеченому) A & beta ; 1-42 путем добавления 40 мкл 50 мкг / мл родной Ар 1-42 до 0,46 мл 20% -ного ACN и 4% концентрированного аммиака в микроцентрифужных трубки 0,5 мл. Смешать на вихревом смесителе в течение 1 мин.
  2. Приготовить 2-мл 40 нг / мл смеси нативного и 15 NAβ 1-42 добавлением 20 мкл 4 мкг / мл нативный A & beta 1-42 и 20 мкл 4 мкг / мл 15 NAβ 1-42 до 1,96 мл 20% -ного ACN и 4% концентрированного аммиака в 2 мл микроцентрифужных трубки. Смешать на вихревом смесителе в течение 1 мин.
  3. Добавьте 20 мкл 40 нг / мл смеси до 0,38 мл искусственной спинномозговой жидкости в 0,5 мл микроцентрифужных трубки. Готовят дубликаты и перемешать на вихревом смесителе в течение 1 мин.

5. Подготовка проб

Примечание: Оттепель образцы должны быть измерены при комнатной температуре на валике.

  1. Добавить 0,18 мл каждого калибратора, коэффициент отклика и неизвестного образца ( в том числе контроль качества [QC] образцов, если используется) к 1 мл белка 96-артезианской пластины, в соответствии с рисунком 1 (предполагая полную тарелку используется). Убедитесь в том, чтобы добавить образцы, или близко к нижней части лунки.
  2. Добавьте 20 мкл внутреннего стандарта в каждую лунку (т.е. калибраторов, факторы отклика, Бок и неизвестных); крайне важно, чтобы освободить капли на сторону скважины близко к поверхности образца, не погружая наконечник пипетки.
  3. Добавить 0,2 мл 5 М гуанидин-гидрохлорида в каждую лунку.
  4. Поместите образец пластину на микропланшет-шейкере и смешайте образцов в течение 45 мин при 1100 оборотах в минуту. Оптимальная частота может отличаться в зависимости от измерительных приборов. Установите частоту и амплитуду миксера так, что растворы тщательно перемешивают и не выбрасывались внутреннего стандарта или CSF не оставляют несмешанные на стороне лунок.
  5. Добавить 0,2 мл 4% -ной фосфорной кислотыв каждую лунку. Vortex кратко перемешать.

6. Твердофазная экстракция

ПРИМЕЧАНИЕ: Во всех стиральных, загрузка и стадий элюции, применять минимально возможную вакуум после добавления раствора и постепенно увеличивать по мере необходимости загружать или элюирования решение. Отключение вакуума между каждой загрузки и стадии элюирования.

  1. Поставьте резервуар лоток для отходов под смешанном режиме, катионообменной, 96-луночного твердофазной экстракции (SPE) пластины в коллекторе камеры экстракции пластины.
  2. Используйте кондиционер SPE сорбент, добавляя 0,2 мл метанола в каждую лунку.
  3. Равновесие сорбент, добавляя 0,2 мл 4% -ной фосфорной кислоты в каждую лунку.
  4. Перенесите все образцы (около 0,62 мл в каждую лунку) из артезианской пластины к пластине SPE. Используйте пипетку восьмиканальный при передаче образцов из артезианской пластины к пластине SPE; это не имеет решающего значения для передать весь или равные объемы всех образцов, так как образцы содержат стажерааль стандарт, который будет компенсировать изменения.
  5. Промыть сорбент после того, как образцы прошли через добавлением 0,2 мл 4% -ной фосфорной кислоты в каждую лунку.
  6. После промывки растворитель элюируют из сорбента, замените резервуар поднос с тарелкой для сбора или трубок.
  7. Элюции образца из сорбента дважды добавлением 50 мкл 75% ACN / 10% концентрированного раствора аммиака и отмечают, что это решение требует очень низкого вакуума, чтобы пройти через сорбент. Не забудьте отключить вакуум между каждым добавлением.
    1. ДОПОЛНИТЕЛЬНО: Уплотнение для сбора пластины или трубки и заморозить их при температуре -80 ° C. Снимите уплотнение из пластины сбора или трубок, прежде чем перейти к этапу 6.8.2.
    2. Сушат элюатов путем использования вакуумного центрифугирования (без подвода тепла); это может занять от одного до нескольких часов, в зависимости от вакуумной центрифуге.
    3. Уплотнение контейнеров и заморозить их при температуре -80 ° С.

7. Жидкость хроматография

  1. Подготовка подвижной фазы А (5% ACN , 0,3% концентрированного аммиака в деионизированной воде [об / об]), В (4% деионизированной воды и 0,1% концентрированного аммиака в ACN [об / об]), и игла стирки (50% ACN и 4% концентрированного аммиака в деионизированной воде [об / об]).
    1. Для получения 500 мл подвижной фазы А, добавляют 25 мл ACN и 1,5 мл концентрированного аммиака в деионизированной воде. Отрегулировать конечный объем до 500 мл деионизированной водой.
    2. Для получения 500 мл подвижной фазы B, добавьте 500 мкл концентрированного аммиака и 25 мл деионизированной воды к АКН. Отрегулируйте конечный объем до 500 мл с ACN.
    3. Приготовьте 250 мл иглы стирке, добавляя 120 мл ACN и 10 мл концентрированного аммиака в деионизированной воде. Отрегулировать конечный объем до 250 мл деионизированной водой.
    4. Помещенный подвижные фазы А и В и иглы Промывалки открытый в озвучивания бане в течение 20 мин перед использованием с системой LC
  2. Растворить каждую пробу с 25 мкл 20% ACN и 4% ConcentraTed раствор аммиака и поместить их на шейкере в течение 20 мин. Центрифуга вниз образцов и поместите их в автосамплера (держать на 7 ° C).
  3. Вводят 20 мкл образца на 1 х 250 мм 2 полистирол-дивинилбензола ( с обращенной фазой) монолитную колонну , поддерживаемую при температуре 50 ° C.
    1. С помощью градиента LC показано в таблице 4 со скоростью потока 0,3 мл / мин. Перенаправление первые два и последние пять минут, чтобы тратить (пост-столбец) с использованием отбракованных клапан, чтобы уменьшить загрязнение масс-спектрометра.

Анализ 8. Масс-спектрометрический

Примечание: Эти параметры использовались для квадрупольной-Orbitrap гибридном масс-спектрометр, снабженный aheated источником ионизации электрораспылением.

  1. Установите параметры для источника ионов в соответствии с таблицей 5.
  2. Установите инструмент MS , чтобы изолировать 4+ зарядовых состояния родного A & beta ; 1-42 (1,129.48 масс-к заряду [м / г]), 15 NAβ 1-42 (1,143.00 м / г), и 13 CAβ 1-42 (1,179.50 м / г) в масс - квадрупольного анализатора с шириной изоляции 2,5 м / г.
  3. Фрагментировать выделенных пептидов в клетке столкновения с энергией нормализуется столкновений (NCE) 17.0. Это может должны быть настроены для каждого инструмента, даже одного и того же типа (и особенно при использовании других типов инструментов, таких как тройной квадруполь МС).
  4. Регистрируют спектры фрагментов с разрешением 17500, с автоматической регулировкой усиления целевого 2 - х 10 5 зарядов и максимальное время впрыска 250 мс.

9. Обработка данных

  1. Используйте сумму ионов продукта (с массовым допуском ± 250 милли единиц массы [чных]) в таблице 6 для расчета хроматографических областей для каждого пептида. Обратите внимание, что типы ионов и числа приведены только для нативного A & beta; ионы 1-42 продукта, так как они одинаковы для обоих 15 NAβ 1-42 и 13 CAβ 1-42.
  2. Определить средний коэффициент чувствительности двух выборок коэффициент отклика путем деления площади под кривой (хроматографического пика) от 15 NAβ 1-42 с площадью под кривой нативного Ар 1-42.
  3. Отрегулируйте концентрацию 15 NAβ 1-42 используется для калибровки путем умножения на коэффициент отклика , рассчитанного на этапе 9.2.
  4. Построить калибровочную кривую, откладывая соотношения площади 15 NAβ 1-42 до 13 CAβ 1-42 из двух наборов калибраторов против концентрации.
  5. Вычислить наклон и перехват калибровочной кривой с использованием линейной регрессии.
  6. Вычислить отношение площадей нативного A & beta ; 1-42 к внутреннему стандарту (13 CAβ 1-42) для ипизвестные образцы.
  7. Экстраполировать концентрацию неизвестных образцов по калибровочной кривой с использованием наклона и перехватывать, полученного на стадии 9.5.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Установка пластины на фиг.1 , используется для полной тарелкой образцов. Если необходимо проанализировать меньше неизвестных образцов, второй калибратор, наборы РФ и КК должен быть помещен после первой половины неизвестных образцов.

Как видно на рисунке 2, калибраторы близко к линии регрессии, с низкими стандартными отклонениями. Этот метод имеет более низкий уровень квантификации 150 пг / мл,...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Для описанного способа, вместо того чтобы использовать суррогатный матрицу, мы использовали суррогатного аналита подход 13, 14, 15, 16, что дает возможность калибровки в человеческом CSF. Суррогатного аналита подход включает в себя два различных меченные изотопами стандартов. Один (15 NAβ 142) используется для генерирования калибровочного графика в человеческом CSF, в то ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

JP and EP не раскрывает информацию. Х.З. входил в состав консультативных советов Roche Diagnostics, Eli Lilly и Pharmasum Therapeutics. КБ работал в качестве консультанта или члена консультативных советов Fujirebio Europe, IBL International и Roche Diagnostics. HZ и KB являются соучредителями Brain Biomarker Solutions в Гетеборге, AB, компании, основанной на венчурной платформе GU в Гетеборгском университете.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была выполнена от имени Рабочей группы по белкам спинномозговой жидкости Международной федерации клинической химии, которая имеет следующий состав: Кай Бленноу (председатель) и Хенрик Зеттерберг, Гётеборгский университет, Швеция; Лес Шоу и Магдалена Корецка, Университет Филадельфии, Пенсильвания, США; Ингрид Зегерс, Институт стандартных образцов и измерений, Гель, Бельгия; Петр Левчук, Университетская клиника Эрлангена, Германия; и Рэнд Дженкинс, биоаналитическая лаборатория PPD, Ричмонд, Вирджиния, США; Рэндалл Бейтман, Вашингтонский университет, Миссури, США; и Х. Вандерстихеле, Innogenetics NV, Гент, Бельгия. Эта работа также проводилась в рамках рабочей группы по референтным методам CSF Глобального консорциума по стандартизации биомаркеров, которую возглавляет Мария К. Каррильо, доктор философии, старший директор по медицинским и научным связям Ассоциации Альцгеймера. Исследование выполнено при поддержке Шведского исследовательского совета (гранты #14002, #521-2011-4709 и #2013-2546); Фонд Кнута и Алисы Валленберг; Demensförbundet; а также фонды Эмиля и Веры Корнелл, Айны Вальстрём и Мэри-Энн Шёблом, Гуна и Бертила Стоне, Магнуса Бергвалля и Гамлы Тьянариннор.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Микроцентрифужные пробирки Eppendorf Protein LoBind,Eppendorf
Eppendorf Protein LoBind объемом 0,5 мл, микроцентрифужныеEppendorf022431081
Eppendorf Protein LoBind объемом 1,5 мл, микроцентрифужные пробиркиEppendorf022431102
Eppendorf Protein LoBind объемом 2 мл, 5 млEppendorf0030 108.310
Eppendorf Protein LoBind Deepwell Plates 96Eppendorf951032905
Micronic 0,75 мл Полипропиленовые трубки, V-образное дноMicronicMPW32071BC3Трубки, используемые для сбора элюата SPE, но могут использоваться и другие устройства для сбора, такие как 96-луночные планшеты.
Micronic Split TPE Capcluster для 96 ind. tubesMicronicMP53026Caps для Micronic tubes.
Micronic Loborack-96 белый с высокой крышкой со штрих-кодомMicronicMPW51015BC3Держатель для трубок Micronic.
Насадки Biohit Optifit 1,2 млSartorius791210Используются для достижения полного дна глубоколуночных планшетов LoBind (96-луночные). Другие узкие советы также могут подойти.
Waters Oasis MCX 96-скважинный &микро; Элюирующая пластинадля вод186001830BA 
Вода Пластинчатый коллектор резервуарВодаWAT058942
Вода Заборная пластина Коллектор для Oasis 96-скважинные пластиныВоды186001831
раствор гидроксида аммония, puriss. p.a., reag. ISO, reag. Ph. Eur., ~25% NH3 basisSigma-Aldrich30501-1L-D
Ацетонитрил, Far UV HPLC Gradient grade, 2,5 лFisher ScientificA/0627/17X
ортофосфорная кислота 85%, ACS, ISO, Reag. Ph EurMerck Millipore1005731000
гуанидина гидрохлорида, 500 гThermo Scientific24110
Thermo Scientific Q-exactive Hybrid Quadrupole Orbitrap Mass SpectrometerThermo ScientificIQLAAEGAAPFALGMAZRс комплектом Dionex Ultimate 3000 LC и автосэмплером.
Dionex ProSwift RP-4H Монолитная колонка (1,0 x 250 мм)Dionex066640
Бычья сыворотка альбумина, лиофилизированный порошок, подходит для (для молекулярной биологии), НеацетилированныйСигма-ОлдричB6917
Бета-амилоид (1-42), Ультра чистый,TFA rPeptideA-1002-2
15N Бета-амилоид (1-42), Равномерно маркированныйrPeptideA-1102-2
13C Бета-амилоид (1-42), равномерно меченыйрПептидA-1106-2
Микропланшетные шейкеры, TiMix 2Edmund Bü HLER6110 000
микроцентрифужные пробирки 022431081 пробирки

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Querfurth, H. W., LaFerla, F. M. Alzheimer's disease. N Engl J Med. 362 (4), 329-344 (2010).
  2. Braak, H., Braak, E. Evolution of the neuropathology of Alzheimer's disease. Acta Neurol Scand Suppl. 165, 3-12 (1996).
  3. Blennow, K., de Leon, M. J., Zetterberg, H. Alzheimer's disease. Lancet. 368 (9533), 387-403 (2006).
  4. Dubois, B., et al. Advancing research diagnostic criteria for Alzheimer's disease: the IWG-2 criteria. Lancet Neurol. 13 (6), 614-629 (2014).
  5. Blennow, K., Hampel, H., Weiner, M., Zetterberg, H. Cerebrospinal fluid and plasma biomarkers in Alzheimer disease. Nat Rev Neurol. 6 (3), 131-144 (2010).
  6. Buchhave, P., et al. Cerebrospinal fluid levels of beta-amyloid 1-42, but not of tau, are fully changed already 5 to 10 years before the onset of Alzheimer dementia. Arch Gen Psychiatry. 69 (1), 98-106 (2012).
  7. Olsson, B., et al. CSF and blood biomarkers for the diagnosis of Alzheimer's disease: a systematic review and meta-analysis. The Lancet Neurology. 15 (7), 673-684 (2016).
  8. Bjerke, M., et al. Confounding factors influencing amyloid Beta concentration in cerebrospinal fluid. Int J Alzheimers Dis. , (2010).
  9. Dumurgier, J., et al. Intersite variability of CSF Alzheimer's disease biomarkers in clinical setting. Alzheimers Dement. 9 (4), 406-413 (2013).
  10. Mattsson, N., et al. CSF biomarker variability in the Alzheimer's Association quality control program. Alzheimers Dement. 9 (3), 251-261 (2013).
  11. Kang, J. H., Korecka, M., Toledo, J. B., Trojanowski, J. Q., Shaw, L. M. Clinical Utility and Analytical Challenges in Measurement of Cerebrospinal Fluid Amyloid-beta1-42 and tau Proteins as Alzheimer Disease Biomarkers. Clin Chem. 59 (6), 903-916 (2013).
  12. Mattsson, N., et al. Reference measurement procedures for Alzheimer's disease cerebrospinal fluid biomarkers: definitions and approaches with focus on amyloid beta42. Biomark Med. 6 (4), 409-417 (2012).
  13. Ahmadkhaniha, R., Shafiee, A., Rastkari, N., Kobarfard, F. Accurate quantification of endogenous androgenic steroids in cattle's meat by gas chromatography mass spectrometry using a surrogate analyte approach. Anal Chim Acta. 631 (1), 80-86 (2009).
  14. Jemal, M., Schuster, A., Whigan, D. B. Liquid chromatography/tandem mass spectrometry methods for quantitation of mevalonic acid in human plasma and urine: method validation, demonstration of using a surrogate analyte, and demonstration of unacceptable matrix effect in spite of use of a stable isotope analog internal standard. Rapid Commun Mass Spectrom. 17 (15), 1723-1734 (2003).
  15. Leinenbach, A., et al. Mass spectrometry-based candidate reference measurement procedure for quantification of amyloid-beta in cerebrospinal fluid. Clin Chem. 60 (7), 987-994 (2014).
  16. Li, W., Cohen, L. H. Quantitation of endogenous analytes in biofluid without a true blank matrix. Anal Chem. 75 (21), 5854-5859 (2003).
  17. Perret-Liaudet, A., et al. Cerebrospinal fluid collection tubes: a critical issue for Alzheimer disease diagnosis. Clin Chem. 58 (4), 787-789 (2012).
  18. Lewczuk, P., et al. Effect of sample collection tubes on cerebrospinal fluid concentrations of tau proteins and amyloid beta peptides. Clin Chem. 52 (2), 332-334 (2006).
  19. Pannee, J., et al. Reference measurement procedure for CSF amyloid beta (Aβ)1-42 and the CSF Aβ1-42 /Aβ1-40 ratio - a cross-validation study against amyloid PET. J Neurochem. 139 (4), 651-658 (2016).
  20. Thienpont, L. M., Van Houcke, S. K. Traceability to a common standard for protein measurements by immunoassay for in-vitro diagnostic purposes. Clin Chim Acta. 411 (23-24), 2058-2061 (2010).
  21. Vesper, H. W., Thienpont, L. M. Traceability in laboratory medicine. Clin Chem. 55 (6), 1067-1075 (2009).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Absolute QuantificationAmyloid Beta 1 42Cerebrospinal FluidMass SpectrometrySolid Phase ExtractionLiquid ChromatographyStable Isotope StandardsReference Measurement ProcedureAlzheimer s Disease BiomarkerQuadrupole Orbitrap

Related Articles