Здесь мы приводим протокол для исследования распределения хоста-ткани, режима передачи, и влияния на хозяин пригодности к densovirus в пределах чешуекрылых видов, хлопковую совку. Этот протокол также может быть использован для изучения взаимодействия между другими устно передаваемых вирусов и их хозяев насекомых.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Протоколы для исследования распределения Хоста-ткань, Transmission-режим, и эффекта на хост приспособленности Densovirus в хлопковой совке
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Многие новые вирусы были обнаружены в животных-хозяев с использованием технологии секвенирования следующего поколения. Ранее мы сообщали о мутуалистическом вирусе, совок хлопковой densovirus (HaDV2), в течение чешуекрылых видов, хлопковый совок, совок хлопкового (Хюбнер). Здесь мы описываем протоколы, которые в настоящее время используются для изучения влияния HaDV2 на его хозяин. Во-первых, мы устанавливаем HaDV2 свободного хлопка совки колонию из одной пары разведения. Затем мы пероральны инокуляция некоторого Новорожденных личинок потомства с HaDV2 содержащими отфильтрованную жидкостью для получения два колоний с одной и тем же генетическим фоном: один HaDV2-инфицированными, а другой неинфицированных. Протокол для сравнения параметров жизненного таблицы (например, личиночной, куколки и взрослые периоды и плодовитость) между HaDV2-инфицированных и лиц -uninfected также представлен, как и протоколы для определения распределения хост-ткани и эффективность передачи HaDV2. Эти протоколы Woпакетирования также подходит для изучения влияния других устно передаваемых вирусов на своих хозяев насекомых, чешуекрылых хозяев, в частности.
Введение
В последние несколько десятилетий, развитие секвенирования технологий , таких как следующего поколения секвенирования (NGS) способствовал открытию многих новых ДНК и РНК вирусов, особенно непатогенные вирусы, но и новых изолятов ранее известных вирусов 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11,
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Строительство HaDV2 свободной хлопковой совки колонии
- Личинки совка сзади хлопок (Х. armigera) на искусственной диете 32 в контролируемой комнате роста или искусственной климатической камере при температуре 25 ± 1 ° С, с 14 ч света / 10 ч темными и 60% относительной влажностью.
- Aid одной пары спаривание вновь eclosed моли с помощью пластиковой клетке на пару (высота 10 см, диаметр 5 см), покрытый хлопчатобумажной марли, чтобы обеспечить хорошую вентиляцию и служить в качестве подложки яйцекладки. Для того, чтобы увеличить вероятность получения вируса свободной колонии, используют по меньшей мере, 30 пар одной п....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Потомство от родителей , которые были HaDV2 свободной (Фигура 3А) были выращены в качестве NONINF-штамма. Мы успешно амплифицировали ген актина , используя те же шаблоны ДНК, предполагая , что шаблоны ДНК были хорошего качества (рис 3B). Кроме того, случайным образом выбранных восьми также были потомства свободны от HaDV2 (рис 3C), HaNPV (рис 3D), и Wolbachia (рис 3Е). Опять же , мы при.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
В течение последних нескольких десятилетий, большинство исследований на насекомых-вирусных взаимодействий были сосредоточены на медоносной пчелы здоровья 34, 35, 36, векторы болезни человека 37, растительных вирусов 38, и некоторые насекомые патогенные вирусы , которые имеют большой потенциал в качестве агентов биологического контроля 39. Мало внимания удел.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.
Благодарности
Эта работа была поддержана Национальным ключ программы фундаментальных исследований Китая (№ 2013CB127602) и научного фонда творческих исследовательских групп Национального научного фонда Китая (№ 31321004).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 24-луночный планшет | Corning | 07-200-740 | Доступно несколько поставщиков. |
| Набор для экстракции ДНК | TIANGEN | DP304-03 | Доступно несколько поставщиков. |
| термоамплификатор | Veriti; Прикладные биосистемы | 4375786 | |
| PBS | Corning | 21-040-CV | |
| 0.22 &; m мембранный фильтр | Millipore | SLGS025NB | |
| pEASY-T Cloning Vector | TransGen, Пекин, Китай | CT301-02 | |
| Пинцет | IDEAL-TEK | 2.SA | |
| Premix Ex Taq (Probe qPCR) | Takara | RR390A | |
| Зонды | Invitrogen | Custom order | |
| Primers | Invitrogen | Custom order | |
| микроспектрофотометрия NanoDrop 2000c | Термонаучный | Нет в наличии | |
| 7500 Система ПЦР в реальном времени | Прикладные биосистемы | недоступны | |
| стереомикроскоп SZX-16 | Olympus | Сахароза | |
| Доступны несколько поставщиков. | |||
| витаминный комплекс | Доступно несколько поставщиков. |
Ссылки
- Tang, P., Chiu, C. Metagenomics for the discovery of novel human viruses. Future Microbiol. 5, 177-189 (2010).
- Rosario, K., Breitbart, M. Exploring the viral world through metagenomics. Curr. Opin. Virol. 1, 289-297 (2011).
- Hugenholtz, P., Tyson, G. W.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Теги
