Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Экстракция и очистка полифенолов от лиофилизированного порошка ягод для лечения сосудистых гладких мышечных клеток

18.9K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/55605

⸱

5 июля 2017 г.

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Dietetics and Nutrition, University of Arkansas for Medical Sciences, 2Department of Nutrition, Food and Exercise Sciences, Florida State University, 3Center for Advancing Exercise and Nutrition Research on Aging (CAENRA), Florida State University

В этой статье

Краткое содержание

В этой работе подробно описан пошаговый способ получения экстрактов, богатых полифенолом, из лиофилизированного порошка ягод. Кроме того, он дает подробное описание того, как использовать эти богатые полифенолом экстракты в культуре клеток в присутствии пептидного гормона ангиотензина II (Ang II) с использованием сосудистых гладких мышечных клеток (VSMCs).

Аннотация

Эпидемиологические исследования показывают, что увеличение потребления флавоноидов коррелирует со снижением смертности от сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ) в США (США) и Европе. Ягоды широко потребляются в США и имеют высокий полифенольный состав. Было показано, что полифенолы взаимодействуют со многими молекулярными мишенями и оказывают множество положительных биологических функций, включая антиоксидантные, противовоспалительные и кардиозащитные эффекты. Полифенолы, выделенные из ежевики (BL), малины (RB) и черной малины (BRB), снижают окислительный стресс и клеточное старение в ответ на ангиотензин II (Ang II). В этой работе приводится подробное описание протокола, используемого для получения полифенольных экстрактов из лиофилизированных ягод. Выделение полифенолов из лиофилизированного порошка ягод осуществляли с использованием 80% -ного водного этанола и метода экстракции ультразвуком. Неочищенный экстракт далее очищали и фракционировали с использованием хлороформа и этилацетата,соответственно. Эффекты как сырых, так и очищенных экстрактов были протестированы на сосудистых гладких мышечных клетках (VSMC) в культуре.

Введение

Полифенолы представляют собой соединения, содержащие по крайней мере одно фенольное кольцо в своей структуре и обильно присутствуют в растительном царстве 1 . Люди потребляют растения в течение тысячелетий в медицинских целях, не зная о существовании таких соединений 2 . Многие фрукты и овощи имеют некоторые общие полифенольные соединения, хотя и с различными количествами, включая флавоноиды, стильбены и фенольные кислоты. 3 . Хотя полифенолы часто ассоциируются с красочными фруктами и овощами, это не совсем верно. Например, зеаксантин и ксантин присутствуют в овощах, которые не очень яркие, такие как лук и чеснок, которые принадлежат к семейству луков и связаны с многочисленными преимуществами для здоровья 4 . Помимо того, что они связаны с несколькими преимуществами для здоровья 5 , полифенолы также служат растениям, защищая их от насекомых,D ультрафиолетовое излучение 2 . Полифенолы обычно встречаются в рационе человека и считаются мощными антиоксидантами, поскольку они могут собирать реактивные виды кислорода (ROS) 6 , 7 , 8 . Они также имеют противовоспалительные 9 , антимикробные 10 , антигипертензивные 11 и антиканцерогенные 12 , 13 свойства.

Эпидемиологические исследования демонстрируют обратную связь между потреблением флавоноидов и сердечно-сосудистыми заболеваниями (ССЗ) 16 , 17 и смертностью 14 , 15 . Ягоды широко потребляются в США и содержат большое количество полифенолов, включая флавоноиды. Например, потребление сока ежевики (BL) (300 Мл / д) в течение восьми недель значительно уменьшалось систолическое артериальное давление у пациентов с дислипидемией 18 . Jeong et al. 19 сообщили, что у мужчин и женщин с гипертензией, потребляющих 2,5 г экстракта черной малины (BRB) в день, было более низкое 24-часовое и ночное кровяное давление по сравнению с теми, кто потреблял плацебо. Малина (RB) уменьшала артериальное давление, увеличивая экспрессию супероксиддисмутазы (SOD) у спонтанно гипертензивных крыс 20 . Недавно было показано, что BL, RB и BRB снижают уровни РОС и старения, вызванные ангиотензином II (Ang II) в сосудистых гладких мышечных клетках (VSMC) 21 . Кроме того, антоцианиновая фракция из экстракта BL уменьшала экспрессию индуцируемой синтазы оксида азота (iNOS) и ингибировала активность ядерного фактора kappa B (NF-κB) и внеклеточной сигнально-регулируемой киназы (ERK) в липополисахариде (LPS) -стимулированной Ячейки J774Ass = "xref"> 22. Экстракты BRB уменьшали экспрессию NF-κB и циклооксигеназы 2 (COX-2) in vitro 23 , улучшали профиль липидов и предотвращали образование атеросклероза у мышей, которым кормили диету с высоким содержанием жиров 24 . Антоцианины, которые считаются наиболее распространенными флавоноидами в ягодах, модулируют воспалительную реакцию в LPS-стимулированных макрофагах RAW 264.7 путем уменьшения производства альфа-фактора (NFRO-α) фактора роста опухоли 25 и уменьшают пролиферацию и миграцию VSMCs 26 .

Поскольку растет интерес к пониманию роли полифенолов в здоровье и болезни человека, важно оптимизировать метод извлечения. Для этой цели широко используется экстракция растворителем, так как она экономична и легко воспроизводима. В этом исследовании использовали экстракцию растворителем с этанолом наряду с экстрактом ультразвукаN, который был адаптирован из Ким и Ли 27 . Очистку и фракционирование сырых экстрактов (CE) с использованием хлороформа и этилацетата проводили для получения фракции очищенного экстракта (PE), которая была адаптирована из Queires et al. 28 . Кроме того, сравнивали эффективность неочищенных и очищенных полифенольных экстрактов из BL при восстановлении базального фосфорилирования ERK1 / 2 и были представлены типичные примеры ингибирующего действия очищенного экстракта полифенола BL на Ang-индуцированные передачи сигналов в VSMC.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Получение реагентов

  1. Подготовьте 80% этанола (100 мл) путем смешивания 80 мл абсолютного этанола (молекулярная биология) и 20 мл стерильной воды с клеточной культурой.
  2. Для приготовления экстракта полифенола (10 мг / мл) весят 10 мг СЕ или ПЭ. Добавьте 1 мл простой модифицированной среды Dulbecco Eagle Medium (DMEM) под кожух клеточной культуры. Vortex решение. Аликвоту в 200 мкл порциями и хранить при -20 ° C.
  3. Подготовьте буфер для лизиса.
    1. Добавляют 5 мл основного раствора 1 М HEPES (pH 7,4, 50 мМ конечного), 1 мл 5 М раствора NaCl (50 мМ конечного), 1 мл 0,5 М исходного раствора EDTA (5 мМ конечного), 2 мл 0,5 M NaF (конечный раствор 10 мМ), 286 мкл 700 мМ исходного раствора Na 3 VO 4 (2 мМ конечного), 5 мл 200 мМ Na 4 P 2 O 7 исходного раствора (10 мМ конечного) и 5 ​​мл 20% исходного раствора Triton-X-100, приготовленного в воде (1% конечного продукта). Добавьте воду, чтобы достичь объема 100 мл. Хранить при температуре 4 ° C.
    2. Добавьте 10 мкл / мл коктейля ингибитора протеазы. Добавьте свежие, когда клетки готовы к лизису.
  4. Подготовьте буфер образца Laemmli (4 раза).
    1. Добавляют 31,25 мл 2 М Tris исходного раствора (pH 6,8), 100 мл глицерина, 50 мл 20% раствора додецилсульфата натрия (SDS), приготовленного в воде, и 50 мл β-меркаптоэтанола. Добавить воду до 250 мл. Хранить при температуре 4 ° C.
  5. Для приготовления буфера Tris-Buffered Saline (TBS) весят 3 г Трис (25 мМ финала), 0,18 г KCl (2,5 мМ конечного) и 8,76 г NaCl (150 мМ финала). Отрегулируйте рН до 7,4 и добавьте воду до 1 л. Хранить при комнатной температуре.
  6. Для получения TBS-T добавляют 997,5 мл TBS и 2,5 мл 20% раствора Triton-X-100, приготовленного в воде. Хранить при комнатной температуре.

2. Подготовка экстрактов Blackerry

  1. Получение неочищенного экстракта из лиофилизированного порошка ягод.
    1. Взвесьте 10 г лиофилизированного порошка ежевики (или 5 г свежего порошка). Если используются замороженные фрукты, разрежьте их iNto очень мелкие кусочки перед началом экстракции.
    2. Смешайте фруктовый порошок с 100 мл 80% -ного водного этанола в 1 л круглодонную колбу Эрленмейера.
    3. Сонатируйте смесь в течение 20 минут при 42 кГц, 135 Вт, используя ультразвуковую ванну при 25 ° C, без какого-либо промежутка времени между ними. Выполняйте обработку ультразвуком с непрерывной продувкой азота в приглушенном свете. Для замороженных фруктов увеличьте время инкубации до 4 часов.
    4. Фильтруйте смесь через фильтровальную бумагу №2 с помощью охлажденной воронки Бюхнера с вакуумным отсосом.
      ПРИМЕЧАНИЕ. В конце этого этапа на фильтровальной бумаге появляются остатки образца; Это называется фильтровальной лепешкой.
    5. Промойте фильтровальную лепешку 50 мл 100% этанола. Сохраните фильтрат и добавьте осадок на фильтре в круглодонную колбу емкостью 1 л, содержащую 100 мл 80% -ного водного этанола.
    6. Повторите процесс экстракции остатка (шаги 2.1.2 - 2.1.4).
    7. Объедините два фильтрата в круглодонную колбу с дополнительными 50 мл80% -ного водного этанола.
      ПРИМЕЧАНИЕ. Конечный объем должен составлять приблизительно 300 мл.
    8. Для испарения растворителя используйте роторный испаритель при 62 ° C и 50 об / мин. Продолжайте этот процесс до тех пор, пока этанол не испарится.
      ПРИМЕЧАНИЕ. Этот процесс занимает приблизительно 45 минут.
    9. Перенесите образец в коническую трубку объемом 50 мл. Выпаривают этанол, впрыскивая газообразный азот в верхней части трубки в течение 10 мин.
      ПРИМЕЧАНИЕ. Этот шаг необходим для обеспечения полного испарения этанола. Объем образца на этой стадии составляет приблизительно 20 мл.
    10. Заморозьте образец при -80 ° C в течение не менее 24 часов.
      ПРИМЕЧАНИЕ. Этот шаг необходим, чтобы обеспечить более эффективный процесс сублимационной сушки.
    11. Замораживают образец при -50 ° C в течение приблизительно 8 часов. Храните образцы при температуре -20 ° C.
      ПРИМЕЧАНИЕ. Сушилка для замораживания создает мощный вакуум при температуре -50 ° C внутри камеры для сушки образцов, но сохраняет большую часть соединений, таких как полифNoLS.
  2. Получение очищенных полифенольных экстрактов из сырых экстрактов.
    1. Взвесьте лиофилизированные экстрагированные образцы.
      ПРИМЕЧАНИЕ. Объем экстракта на этом этапе составляет приблизительно 10 мл.
    2. Добавить два объема (~ 20 мл) хлороформа в неочищенный экстракт и встряхнуть раствор в течение 5 минут в мешалке.
    3. Вылейте смесь в разделительную воронку. Пусть сырой экстракт декантируют в течение 1 часа при комнатной температуре с получением очищенной фракции.
      ПРИМЕЧАНИЕ. На этом этапе образуется двухфазная смесь.
    4. Удалите нижний слой (фазу хлороформа) из разделительной воронки и соберите водный слой в чистый стакан.
    5. Добавьте два объема этилацетата к водной фракции и используйте магнитную мешалку для перемешивания смеси в течение 5 мин при комнатной температуре.
    6. Отфильтруйте смесь через фильтровальную бумагу №2 с помощью охлажденной воронки Бюхнера с вакуумным отсосом.
    7. Соберите отфильтрованный образец и перенесите его в круглодонную колбу для насС роторным испарителем.
    8. Установите роторный испаритель на 62 ° C и 50 об / мин и испарите этилацетат в течение примерно 30 минут.
    9. Замораживают образец при -50 ° C в течение приблизительно 8 часов. Перенесите образец в коническую трубку объемом 50 мл и храните его при -20 ° C.

3. Лечение VSMC с экстрактами ягод

  1. Культура VSMC.
    1. Выделите VSMC из грудных аортов крыс Sprague-Dawley, выполнив ферментативное расщепление, как описано ранее 29 . Культура VSMC, как описано 29 .
    2. Подготовьте полную среду для культивирования VSMC с использованием DMEM, содержащей глюкозу 1 г / л, и добавьте 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS), 100 ед. / Мл пенициллина, 100 мг / мл стрептомицина и 2 мМ L-глутамина. Хранить всю среду при температуре 4 ° C.
  2. Инкубация VSMC с экстрактами полифенолов.
    1. Чтобы разбить VSMC, отбросьте культуруИ промыть клетки дважды фосфатным буферным раствором (PBS). Добавить 4 мл PBS и 2 мл трипсина EDTA 0,25%. Инкубируйте клетки в течение 5 мин при 37 ° С в инкубаторе CO 2 .
      1. Соберите клетки, смешайте их с 2 мл полной среды в 15 мл центрифужной пробирке и центрифугируйте при 1100 × g в течение 5 минут. Удалите супернатант и ресуспендируйте клеточный осадок с 1 мл PBS. Подсчитайте клетки с помощью гемоцитометра.
      2. Семя 50 000 VSMC на лунку в 6-луночных планшетах для культивирования и выращивать их в полной среде, содержащей 10% FBS, до тех пор, пока они не достигнут 90% слияния (около 3 г). Поддерживайте VSMC при температуре 37 ° C в увлажненном 5% -ном инкубаторе CO 2 .
    2. Подготовьте среду для лечения с использованием среды DMEM, содержащей 1 г / л глюкозы, 100 ед. / Мл пенициллина, 100 мг / мл стрептомицина, 2 мМ L-глутамина и 0,5% FBS. Храните обрабатывающую среду при температуре 4 ° C.
      ПРИМЕЧАНИЕ. Полифенольные экстракты и Ang II добавляют непосредственно в клетки, используя это meРадиевом.
    3. Подготовьте исходный раствор 10 мг / мл сырого экстракта (CE) или очищенного экстракта (PE) из полифенолов путем растворения 10 мг экстракта в 1 мл простой среды DMEM. Храните запас в 200 мкл аликвоты при -20 ° C.
    4. Инкубируйте VSMC с 2 мл обрабатывающей среды, содержащей 0,5% FBS, и добавьте экстракт CE или PE для достижения концентрации 50-500 мкг / мл. Изменяйте среду каждые 24 часа, добавляя свежие экстракты полифенолов. Обработайте клетки в течение 3 дней.
    5. Для лечения Ang II или других гормонов и факторов роста голодайте клетки в течение по меньшей мере 24 часов путем инкубации клеток с лечебной средой, содержащей 0,5% FBS, перед добавлением Ang II (100 нМ).
      ПРИМЕЧАНИЕ. Инкубация с CE и без CE в 0,5% среде для обработки FBS перед добавлением Ang II рекомендуется.
      1. Через 24 часа голодания добавьте 100 нМ Ang II. Замените среду для обработки свежим CE, PE или Ang II каждые 24 часа на 3 дня.
  3. Подготовка образцов клеток.
    1. Промыть обработанные клетки дважды в холодном PBS и лизировать их 200 мкл буфера для лизиса на льду.
    2. Собирайте клеточные лизаты с помощью скребков клеток и переносите лизаты в 1,5 мл микроцентрифужные пробирки. Инкубируйте полные клеточные лизаты в течение 20 мин на льду и вихрете каждые 5 мин.
    3. Сонатируйте экстракты клеток тремя вспышками при 125 Вт в течение 10 с каждый с паузой в 2 с между ними. Храните образцы на льду во время обработки ультразвуком.
    4. Измерьте концентрацию белка, используя реагент для анализа белка при 595 нм.
    5. Храните образцы при -20 ° C для анализа с помощью Вестерн-блоттинга.
  4. Вестерн-блот.
    1. Смешайте равные количества белка (около 50 мкг) из контрольных необработанных и обработанных полифенолом или обработанных Ang II образцов буфером для лизиса, чтобы получить максимальный общий объем 50 мкл. Добавьте 16 мкл 4x буфера для образцов Laemmli. Нагреть образцы в течение 5 мин при 75 ° С.
    2. Отделите образецВ 10% гелях SDS-PAGE и переносить их на мембраны PDVF при 10 В в течение 75 мин в полусухой системе переноса для Вестерн-блот-анализа с конкретными антителами.
    3. Заблокируйте мембрану 2% молоком в TBS 0,05% буфера Triton-X100 (TBS-T) в течение 20 мин.
    4. Удалите молоко, промывая мембрану по меньшей мере три раза TBS (по 5 минут каждый) и инкубируйте с первичными антителами в течение 1 часа при RT или O / N при 4 ° C.
    5. Промывайте мембрану три раза, по 10 минут каждый, с TBS-T и инкубируйте с HRP-связанным вторичным антителом в течение 45 мин.
    6. Промывайте мембрану три раза, по 10 минут каждый, с TBS-T и развивайте с помощью улучшенной хемилюминесценции (ECL).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Ранее было продемонстрировано, что экстракты полифенолов, выделенные из BL, RB и BRB, уменьшают старение VSMC в ответ на Ang II 21 . Было показано, что эти очищенные полифенольные экстракты модулируют передачу сигналов Ang II путем снижения фосфорилирования Akt, p38 митоген-активированной белковой киназы (MAPK) и ERK1 / 2. BL предотвращает старение, уменьшая экспрессию NADPH-оксидазы (Nox) 1, фермента, который продуцирует супероксидные анионы и сильно активируется...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Полифенолы, выделенные из ягод, содержат различные композиции. Протокол извлечения этанола, описанный здесь, позволил идентифицировать различные уровни фенольных кислот и флавоноидов, присутствующих в неочищенных и очищенных полифенольных экстрактах BL ( таблица 1 ). CE был обогащен галловой кислотой, феруловой кислотой, 4-O-каффеоилхиноновой кислотой и 5-O-каффеоилхиноновой кислотой. Процесс очистки существенно не изменял уровни галловой кислоты и р-кумариновой кислоты. Тем не менее, он увеличил уровни...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Эта работа финансировалась Американской кардиологической ассоциацией (14GRNT20180028) и Советом Университета штата Флорида по исследованиям и творчеству (COFRS).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Ангиотензин IISigma-Aldrich, Inc.A9525-10MGЛечение VSMCs
&бета;-актинаSigma-Aldrich, Inc.A2228Первичное антитело (1:5000)
Плоды ежевикиMercer FoodsСублимированный порошок ежевики
Каталаза Первичное антитело Calbiochem219010(1:1000)
ChloroformBiotech Grd, Inc.97064-678Получение очищенных полифенольных экстрактов
модифицированной орлиной среды Дульбекко (DMEM)Mediatech, Inc.10-014-CVКультура этанола VSMC
(абсолютная степень молекулярной биологии)Sigma-Aldrich, Inc.E7023-500MLПолучение экстрактов полифенолов 
ЭтилацетатСигма-Олдрич, Инк.439169Получение очищенных полифенольных экстрактов
ERK1/2Cell Signaling Technology, Inc.9102SПервичное антитело (1:500)
EDTA, 500 мМ, pH 8.0Teknova, Inc.E0306
Сублимационная сушилкаLabconcoVirTis Benchtop KПрепарат полифенольных экстрактов
Фетальная бычья сыворотка (FBS)Seradigm1400-500Клеточная культура
HEPESSigma-Aldrich, Inc.H3375Буфер для лизиса 
NaClEMD Millipore, Inc.7760Буфер для лизиса
NaFJ.T.Baker, Inc.3688-01 Буфер для лизиса
Na3VO4Sigma-Aldrich, Inc.450243Буфер для лизиса
Na4P2O7 , декагидратSigma-Aldrich, Inc.S-9515Лизисный буфер
фосфо ERK1/2 Клеточная сигнализация Технология, Инк.9101SПервичное антитело (1:1000)
Коктейль ингибиторов протеазыSigma-Aldrich, Inc.P8340-5mlБуфер для лизиса
Реактив для анализа белкаБио-Рад Лаборатории, Инк.500-0006Измерение концентрации белка
Транспортная мембрана PVDFThermo Scientific, Inc.88518
Ротационный испарительBuchi LabortechnikRotavapor
R3000		Приготовление экстрактов полифенолов
Стерильная водаMediatech, Inc.25-055-CVПолучение экстрактов полифенолов
SonicatorQSonica, LLCQ125Получение клеточных экстрактов
SOD2Enzo Life Sciences, Inc.ADI-SOD-110-FПервичное антитело (1:1000)
Triton-X-100Sigma-Aldrich, Inc.X100Вестерн Блотс
Ватман #2 фильтровальная бумагаGE Healthcare, Inc.28317-241Получение полифенольных экстрактов
для лизиса вестерн-блоттинг

Ссылки

  1. Morton, L. W., Abu-Amsha Caccetta, R., Puddey, I. B., Croft, K. D. Chemistry and biological effects of dietary phenolic compounds: relevance to cardiovascular disease. Clin Exp Pharmacol Physiol. 27 (3), 152-159 (2000).
  2. Sekirov, I., Russell, S. L., Antunes, L. C., Finlay, B. B. Gut microbiota in health and disease. Physiol Rev. 90 (3), 859-904 (2010).
  3. Manach, C., Scalbert, A., Morand, C., Remesy, C., Jimenez, L. Polyphenols: food sources and bioavailability. Am J Clin Nutr. 79 (5), 727-747 (2004).
  4. Griffiths, G., Trueman, L., Crowther, T., Thomas, B., Smith, B. Onions--a global benefit to health. Phytother Res. 16 (7), 603-615 (2002).
  5. Mazzoni, L., et al. The genetic aspects of berries: from field to health. J Sci Food Agric. 96 (2), 365-371 (2016).
  6. Wang, S. Y., Jiao, H. Scavenging capacity of berry crops on superoxide radicals, hydrogen peroxide, hydroxyl radicals, and singlet oxygen. J Agric Food Chem. 48 (11), 5677-5684 (2000).
  7. Choi, M. H., Shim, S. M., Kim, G. H. Protective effect of black raspberry seed containing anthocyanins against oxidative damage to DNA, protein, and lipid. J Food Sci Technol. 53 (2), 1214-1221 (2016).
  8. Forbes-Hernandez, T. Y., et al. The Healthy Effects of Strawberry Polyphenols: Which Strategy behind Antioxidant Capacity? Crit Rev Food Sci Nutr. 56, Suppl 1. S46-S59 (2016).
  9. Figueira, M. E., et al. Protective effects of a blueberry extract in acute inflammation and collagen-induced arthritis in the rat. Biomed Pharmacother. 83, 1191-1202 (2016).
  10. Daglia, M. Polyphenols as antimicrobial agents. Curr Opin Biotechnol. 23 (2), 174-181 (2012).
  11. Hügel, H. M., Jackson, N., May, B., Zhang, A. L., Xue, C. C. Polyphenol protection and treatment of hypertension. Phytomedicine. 23 (2), 220-231 (2016).
  12. Niedzwiecki, A., Roomi, M. W., Kalinovsky, T., Rath, M. Anticancer Efficacy of Polyphenols and Their Combinations. Nutrients. 8 (9), E552(2016).
  13. Kresty, L. A., Mallery, S. R., Stoner, G. D. Black raspberries in cancer clinical trials: Past, present and future. J Berry Res. 6 (2), 251-261 (2016).
  14. Hertog, M. G., et al. Flavonoid intake and long-term risk of coronary heart disease and cancer in the seven countries study. Arch Intern Med. 155 (4), 381-386 (1995).
  15. Peterson, J. J., Dwyer, J. T., Jacques, P. F., McCullough, M. L. Associations between flavonoids and cardiovascular disease incidence or mortality in European and US populations. Nutr Rev. 70 (9), 491-508 (2012).
  16. Cassidy, A., et al. High anthocyanin intake is associated with a reduced risk of myocardial infarction in young and middle-aged women. Circulation. 127 (2), 188-196 (2013).
  17. Jacques, P. F., Cassidy, A., Rogers, G., Peterson, J. J., Dwyer, J. T. Dietary flavonoid intakes and CVD incidence in the Framingham Offspring Cohort. Br J Nutr. 114 (9), 1496-1503 (2015).
  18. Aghababaee, S. K., et al. Effects of blackberry (Morus nigra L.) consumption on serum concentration of lipoproteins, apo A-I, apo B, and high-sensitivity-C-reactive protein and blood pressure in dyslipidemic patients. J Res Med Sci. 20 (7), 684-691 (2015).
  19. Jeong, H. S., et al. Effects of Rubus occidentalis extract on blood pressure in patients with prehypertension: Randomized, double-blinded, placebo-controlled clinical trial. Nutrition. 32 (4), 461-467 (2016).
  20. Jia, H., et al. The antihypertensive effect of ethyl acetate extract from red raspberry fruit in hypertensive rats. Pharmacogn Mag. 7 (25), 19-24 (2011).
  21. Feresin, R. G., et al. Blackberry, raspberry and black raspberry polyphenol extracts attenuate angiotensin II-induced senescence in vascular smooth muscle cells. Food Funct. 7 (10), 4175-4187 (2016).
  22. Pergola, C., Rossi, A., Dugo, P., Cuzzocrea, S., Sautebin, L. Inhibition of nitric oxide biosynthesis by anthocyanin fraction of blackberry extract. Nitric Oxide. 15 (1), 30-39 (2006).
  23. Lu, H., Li, J., Zhang, D., Stoner, G. D., Huang, C. Molecular mechanisms involved in chemoprevention of black raspberry extracts: from transcription factors to their target genes. Nutr Cancer. 54 (1), 69-78 (2006).
  24. Kim, S., et al. Aqueous extract of unripe Rubus coreanus fruit attenuates atherosclerosis by improving blood lipid profile and inhibiting NF-κB activation via phase II gene expression. J Ethnopharmacol. 146 (2), 515-524 (2013).
  25. Wang, J., Mazza, G. Effects of anthocyanins and other phenolic compounds on the production of tumor necrosis factor alpha in LPS/IFN-gamma-activated RAW 264.7 macrophages. J Agric Food Chem. 50 (15), 4183-4189 (2002).
  26. Pascual-Teresa, S., Moreno, D. A., Garcia-Viguera, C. Flavanols and anthocyanins in cardiovascular health: a review of current evidence. Int J Mol Sci. 11 (4), 1679-1703 (2010).
  27. Kim, D. O., Lee, C. Y. Extraction and Isolation of Polyphenolics. Curr Protoc Food Analyt Chem. 1, John Wiley & Sons. New York. 2.1-2.12 (2002).
  28. Queires, L. C., et al. Polyphenols purified from the Brazilian aroeira plant (Schinus terebinthifolius, Raddi) induce apoptotic and autophagic cell death of DU145 cells. Anticancer Res. 26 (1A), 379-387 (2006).
  29. Griendling, K. K., Taubman, M. B., Akers, M., Mendlowitz, M., Alexander, R. W. Characterization of phosphatidylinositol-specific phospholipase C from cultured vascular smooth muscle cells. J Biol Chem. 266 (23), 15498-15504 (1991).
  30. Vuong, T., et al. Role of a polyphenol-enriched preparation on chemoprevention of mammary carcinoma through cancer stem cells and inflammatory pathways modulation. J Transl Med. 14, (2016).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

ERK
Экстракция и очистка полифенолов от лиофилизированного порошка ягод для лечения сосудистых гладких мышечных клеток
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.