Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Эхокардиографических и гистологической экспертизы сердечной морфологии в мышь

22.5K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/55843

⸱

26 октября 2017 г.

 ,  ,  ,  , 
1Université Côte d’Azur, CNRS, INSERM, iBV, 2Department of Pathology, CHU Nice, 3Institute for Molecular Health Sciences, ETH Zurich

В этой статье

Краткое содержание

Ультразвуковое обследование часто используется в мышах. Дорогой высокого разрешения ультразвуковых устройств были разработаны для этой цели. Этот протокол описывает доступные эхокардиографические процедуры, в сочетании с гистологической морфометрический анализ для определения сердца морфологии.

Аннотация

Все большее количество моделей генетически модифицированных мышь стала в последние годы. Кроме того количество фармакологических исследований, выполненных в мышей является высоким. Фенотипические характеристики этих моделей мыши также требует изучения функции сердца и морфологии. Часто используемые подходы к характеризуют функции сердца и морфология мышей эхокардиография и магнитно-резонансная томография (МРТ). Оборудование ультразвуковое и МРТ специализированных для использования в мелких грызунов является дорогостоящим и требует выделенного пространства. Этот протокол описывает кардиологических измерений в мышей с использованием клинических эхокардиографические системы с 15 МГц человека сосудистого зонда. Измерения проводятся на наркотизированных взрослых мышей. По крайней мере три последовательности изображений регистрируются и анализируются для каждого животного в M-режиме в представлении парастернальной короткой оси. Впоследствии, сердечной гистологическое обследование, и диаметры cardiomyocyte определяются на гематоксилином-эозином или зародышей пшеницы агглютининов (WGA)-окрашенных парафиновых срезах. Плотность судна — определяется morphometrically после Pecam-1 иммуноокрашивания. Протокол был успешно применяется для фармакологических исследований и различных генетических животных моделей в исходных условиях, а также после экспериментальной инфаркт миокарда, постоянным перевязка левой передней нисходящей коронарной артерии ( ЛАД). По нашему опыту, Эхокардиографическое исследование ограничивается наркотизированных животных и осуществимым в взрослых мышей, весом по меньшей мере 25 g.

Введение

Большое разнообразие моделей генетически модифицированные мыши доступны, и количество фармакологических исследований на мышах-высокий1,2. Часто используемые подходы для фенотипического описания функции сердца и морфология в этих моделях мыши3эхокардиография и МРТ. Цель представленных протокола заключается в анализе функции сердца и морфология в взрослых мышей. Она сочетает в себе эхокардиографические, гистологические и иммуногистохимическое измерения. Ультразвуковое обследование широко используется в мышей4,5,6,,78,9,10,11, 12. Pachon и др. 11 определены 205 исследований, опубликованных в циркуляции, Исследования циркуляции, Американский журнал физиологии - сердца и кровообращения физиологиии Сердечно-сосудистых исследований между 2012 и 2015 годы использовано ультразвуковое обследование в животных.

Эхокардиографии используется для выявления сердечной фенотипы в генетически измененных мышей5,6,13,14,,1516, 17 , 18 , 19 , 20 , 21 , 22, а также о том, как анализировать функции сердца в хроническая гипертрофия перегрузки индуцированной ишемии миокарда и кардиомиопатия модели мышей (обзор в12). Улучшенная эхокардиография оборудование позволяет для стандартной мерой левого желудочка измерения систолического и диастолического (LV), ткань Doppler изображений, эхография миокарда контраст и оценки региональных функции LV и коронарного резерва 12. в идеале, ультразвуковое обследование должно выполняться в сознательных мышей, чтобы избежать негативные последствия анестезии на сократительной функции, вегетативная рефлекс управления, и ЧСС11. Тем не менее этот подход ограничен требованием для обучения животных; трудности в поддержании температуры тела стабильным; движение артефакты; стресса; очень высокие частоты сердца; и требования по крайней мере двух следователей для выполнения эксперимента, особенно, если большое количество животных находятся под следствием. Интересно, что недавнее исследование сообщил никаких различий в эхокардиографических параметров в подготовленных и неподготовленных животных19. Мы осуществляем эхокардиографические измерений на наркотизированных мышей. Протоколы разных анестезии будет обсуждаться ниже.

Хотя стандартное разрешение эхокардиография (> 10 МГц) является достаточной для измерения LV систолического и диастолического размеры и функции сердца у взрослых мышей, метод ограничен в его описание базовых структурных явлений. Таким образом, мы объединяем в естественных условиях измерений с гистологическим и иммуногистохимического анализа для измерения, например, диаметра и судно плотности cardiomyocyte. Другие гистологического и иммуногистохимического исследования, например определение распространения, экспертиза апоптоза, инфаркте размеры, определение фиброза и конкретных маркер выражения, могут также выполняться на тот же тип Обработка тканей, но не являются предметом настоящего Протокола. Сочетание в vivo Эхокардиографическое обследование с гистологический анализ обеспечивает дополнительное понимание базовых структурных изменений. В качестве дополнительного шага мы можем завершить эти измерения с молекулярной и ультра-структурных исследований. Гистологический анализ не только полное ультразвуковое обследование, но и стать незаменимым при резолюции эхокардиографии не является достаточным. Это особенно верно в моделях генетически измененных мышей, которые являются эмбриональных смертоносных23,24.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

во исполнение соответствующих институциональных и французский животных законов, руководящих принципов и политики были проведены эксперименты, описанные здесь. Они были одобрены французского Этический Комитет (Comité Institutionnel d ' Ethique Pour l ' животное де Laboratoire; номер NCE/2012-106).

1. эхокардиография

  1. определить вес тела с использованием стандартных лабораторных баланс слегка держа ее за хвост для обеспечения надлежащего позиционирования мыши.
  2. Анестезировать животное впрыской внутрибрюшинного (и.п.) 50 мг/кг Пентобарбитал 25 , 26.
    Примечание: Любые другие виды анестезии может использоваться, если тот же протокол используется на протяжении всего исследования. Ниже будут обсуждены преимущества и недостатки.
  3. Положил мыши обратно в свои собственные клетки и ждать до тех пор, пока он не отвечает, он показывает устойчивый дыхание, и задние ноги рефлексы отсутствуют. Чтобы проверить это, слегка сжать ноги и наблюдать ли нога по-прежнему втягивается.
  4. Бритья с левой стороны грудной клетки и левой мышкой, с использованием коммерческих грызунов бритвы.
    Примечание: Использование выделенный грызунов бритва позволяет для полного удаления волос хорошо мыши чтобы избежать вмешательства в ультразвуковое измерение. Кремы удаления волос коммерческие или решения следует избегать, поскольку они обычно имеют душистый, которые будут беспокоить животное после того, как она пробуждает. Избегайте чрезмерного бритья, как он увеличивает потери тепла.
  5. Положить спать животных на площадку теплой, равным 40-42 ° C в неглубокой левосторонней позиции, с головой в 12 o ' часы и хвост на 6 o ' часы. Закрепите ленту левой руки, левой ноги и хвост.
  6. Применить предварительно разогретую эхокардиография геля на бритые грудь и голову преобразователя.
  7. Место датчика парастернальной слева, направляя его к правой стороне шеи, чтобы получить представление двухмерный (2D) парастернальной Лонг оси на уровне папиллярных мышц. Включите датчик 90° по часовой стрелке, чтобы получить представление короткой оси на уровне мышц papilary. Использование параметра Минимальная глубина и зумом для максимально изображения качества и частоты кадров. Установите скорость развертки на максимум.
    1. Чтобы получить эти параметры, различные масштаб и глубину, Настройка параметров могут использоваться, в зависимости от машины и программное обеспечение. Записи 2D-руководствуясь M-режим изображения в короткой оси просмотра 27. Обратитесь к рис. 1A и B 27.
      Примечание: Будьте осторожны, чтобы избежать чрезмерного давления на груди, как это может вызвать брадикардию.
  8. Запись по крайней мере 3 серии 3 сердце бить cine петли для каждого животного.
    Примечание: Для echocardiograph программное обеспечение, используемое в настоящем исследовании, нажмите " приобретать/сохранить " кнопку только один раз. Эта методология для echocardiograph с этого конкретного программного обеспечения. Другие пакеты программного обеспечения могут быть использованы с различными машинами.
    9. После успешной записи, протрите от эхокардиография гель от грудной клетки мыши, грелки и датчика
  9. . Удалите ленту из конечностей и хвост.
  10. Оставьте мышь под наблюдением на грелке, покрытые ткани, чтобы избежать ненужных света воздействия и потери тепла, до тех пор, пока он просыпает вверх
  11. Положил животное обратно в его клетке.
  12. Анализ записал M-режим изображения с парастернальной короткой оси зрения для определения левого желудочка (LV) размеры и функции. Измерить толщину передней стенки LV систолы и диастола (LVAWs и LVAWd), LV внутренний конец систолическое и диастолическое конце диаметров (LVIDs и LVIDd) и толщина задней стенки LV (LVPW) в систолы и диастола (LVPWs и LVPWd) с помощью определение интерфейса ткани кровь на сохраненные изображения.
  13. Измерение диастолического размеров в то время очевидным максимальной LV диастолический размер и LV конец систолический размер в то время наиболее передней систолической экскурсии LV задней стенки. Коснитесь сенсорного экрана на " анализ " значок и затем на " LVAWd " значок. Положение на стыке полости правого желудочка и LV передней стенки в диастола Калипер.
  14. Позиция Калипер на интерфейсе между передней стенки LV и LV полость для получения LV диастолического передней стенки толщиной; программное обеспечение будет непосредственно перейти к LV внутреннего измерения конечного диастолического.
  15. Позиция суппорта на интерфейсе между полости LV и задней стенки LV для получения внутреннего конечного диастолического диаметр LV; программное обеспечение будет переключаться на измерение толщины задней стенки LV.
  16. Позиция суппорт на стыке задней стенки LV и перикарда для получения LV диастолического задней стенки толщиной. Для LV систолический размер, коснитесь сенсорного экрана на " LVAWs " значок и положение Калипер на интерфейсе между полости правого желудочка и передней стенки LV в систолой.
  17. Позиция Калипер на интерфейсе между передней стенки LV и полость LV для получения LV систолического передней стенки толщиной. Повторите этот процесс, как описано выше для LV внутренний диаметр конца систолическое и LV систолического задней стенки толщиной. Используйте передовые Конвенция, принятая американского общества эхокардиографии для отслеживания 13 , эндокарда и эпикардиальной границы 27.
    Примечание: LV сократительной функции параметры будут автоматически рассчитываться с использованием предыдущего измерения. LV дробных сокращения (FS) определяется как FS (%) = [(LVIDd-LVIDs)/LVIDd] x 100. Фракция изгнания LV (EF) рассчитывается с модифицированной формуле Teicholz, где EF (%) = [(LVIDd3-LVIDs3)/LVIDd 3] x 100 12. Обратитесь к рис. 1A и B.
  18. Хранить данные на компакт-диски или карты памяти USB и делать резервные копии.
  19. Импорта, анализировать и экспорт данных с использованием соответствующего программного обеспечения.
    Примечание: После этих базовых измерений, эксперимент может быть приостановлена. Если прямое сравнение между нокаут животных и одичал тип однопометники, продолжите гистологический анализ 6. Для Cre-ERT2; жидкий кислород/lox мыши линии, продолжить на следующий день с тамоксифен индукции, и.п. инъекции, как описано в 5 , 24. Если заставить экспериментальной инфаркт миокарда, перевязка левой коронарной артерии 5 , 28, операция может быть выполнена непосредственно после эхокардиографические измерения, когда мышей находятся под наркозом. В противном случае, должна поддерживаться Минимальная задержка одной недели между двумя раундами анестезии ограничить скорость послеоперационная летальность.

2. Подготовка сердца проб для гистологического оценки

  1. жертву животных, шейки матки дислокации. Измерьте их веса тела. Лечить груди и живота, с использованием 70% спиртом.
  2. Сделать поперечный разрез в коже 1 см дистальной к грудине. Использование тупой щипцы, снять кожу от грудной клетки, двигаясь в направлении головы. Слегка придерживайте грудины тонкой щипцы и открыть диафрагму, вставив тупой конец тонкой ножницы.
  3. Разрезать грудную клетку с обеих сторон параллельно к грудине. Перемещения грудины в направлении головы. Найдите сердце в грудной клетке. Держите ствол сосудов сердца с тонкой щипцами и сократить ниже с помощью тонкой ножницы.
  4. Открыть сундук и акцизный всего сердца из грудной клетки, измерить вес сердца и создать сердца и тела вес коэффициент 4 , 5 , 6 , 23 , 29 , 30 < /SUP >.
  5. Исправление сердца в 2 мл нейтрального буферизации формалина 10% раствора в 15 мл пробирок на ночь при 4 ° C.
    Предупреждение: опасность! Работа с формалином решения должно быть сделано в Химический вытяжной шкаф; Надевайте перчатки и защитные очки.
    Примечание: Состав буфера для решения формалин изменяется с различными поставщиками, использовать того же поставщика на протяжении всего исследования.
  6. На следующий день, вырезать сердца в поперечной плоскости, в середине и перевести их в кассеты для встраивания парафин, который производится в лаборатории патологии, используя автоматизированный аппарат встраивание.
  7. Выполняют секционирование.
    1. Разделе парафиновые блоки при толщине 3 мкм, используя микротом и плавать в воде 40 ° C Ванна с дистиллированной водой.
    2. Передачи секции на слайды. Разрешить слайды для высыхания на ночь в инкубаторе 37 ° C и хранить их на 4 ° С до готовности для использования в.
      Примечание: Протокол может быть приостановлена здесь до тех пор, пока пользователь готов для окрашивания (шаг 3).
  8. Deparaffinize и Регидратационный ткани слайды.
    1. Место слайды в пятнать баночки со стеклянными вставками в 55 ° C духовке 10 мин для плавления парафина.
    2. Deparaffinize слайды в два изменения по 200 мл, ксилол или заменой ксилола в 5 мин.
      Предупреждение: Высоко горючих и токсичных! Работа в Химический вытяжной шкаф; Надевайте перчатки и защитные очки.
    3. Передавать слайды в 200 мл 100% алкоголя. Сделать два изменения для 3 мин и после передачи через 200 мл 95% спирта на 3 мин
      Предупреждение: Легковоспламеняющиеся! Держать вдали от источников возгорания; не курить.
    4. Полоскать дважды в 200 мл фосфат буфер солевой раствор (PBS) для 5 мин и продолжите с шага 3, 4 или 5.

3. Гематоксилином и эозином

  1. промыть слайды с их разделами в дистиллированной воде.
  2. Пятно ядер с гематоксилином решение для 8 мин
  3. Промыть в проточной водопроводной воды за 10 мин.
  4. Пятно раствором эозина за 2 мин.
  5. Dehydrate три раза в течение 2 минут в 100% этанола (EtOH). Очистите три раза в течение 2 мин в ксилоле или ксилола замену. Гора в среде на основе ксилол монтажа.
  6. Фото слайды и измерить диаметр cardiomyocyte на уровне ядра в продольных секций межжелудочковой перегородки. Измерения по меньшей мере 100 клеток на секцию и три секции за сердце.

4. Пятнать WGA

  1. инкубировать слайды, полученные из шага 2.7 с тетраметилродамина (или других флуоресцентных красителей)-конъюгированных WGA (1: 100 в PBS) 60 мин при комнатной температуре во влажной камере.
  2. Мыть в три раза с PBS на 5 мин.
  3. Гора с флуоресценцией монтаж средств массовой информации, содержащие DAPI. Хранить при 4 ° C в темноте перед анализом.
    Предупреждение: Надевайте средства защиты глаз и совместимых химически стойкие перчатки.
  4. Фото слайды.
    1. Использования микроскопа с флуоресцентным epi освещение и фильтр наборы для DAPI и тетраметилродамина (см. Таблицу материалов). Установите диафрагму максимальные и яркость автоэкспозиция.
    2. Приобретать отдельные изображения при 400-кратном синий и красный каналы. Откройте изображения в ImageJ. Отрегулируйте яркость и контрастность, при необходимости (изображение > Настройка > яркость/контрастность).
    3. Присвоено 8-бит каждого изображения (изображение > тип > 8-бит). Наложение изображений DAPI и WGA. Использовать синий канал для DAPI и красный канал для WGA; значение none зеленые и серые каналы (изображение > цвет > объединение каналов) 31.
  5. Определить cardiomyocyte диаметров на уровне ядра в поперечной части межжелудочковой перегородки.
    1. Определить масштаб изображения в ImageJ. Для этой цели, сфотографировать объект известного размера (например, камеру Горяева на же увеличение как сердце секций; шаг 4.4).
    2. Использовать прямой инструмент нарисовать линию от начала до конца из известной структуры (анализ > задать масштаб).
      Примечание: Расстояние в пикселях будут автоматически отображаться; известным расстоянием и единица длины придется вводить. Продолжить с cardiomyocyte измерения на уровне ядра.
    3. Нарисовать прямую линию от WGA-положительных мембраной через ядро DAPI-позитивных на противоположной сайт WGA-позитивных клеточной мембраны (анализ > мера). В окне результатов, убедитесь, что длина значения имеют значимое количество десятичных разрядов (анализ > набор измерений > десятичных знаков).
    4. Измерения по меньшей мере 100 клеток на секцию и три секции за сердце. Экспортировать результаты в Excel (щелкните на результаты > файл > сохранить как > .csv) 31 6 ,.

5. PECAM-1 иммуноокрашивания

  1. выполняют антигена разоблачения.
    1. Добавить 1600 мл натрия цитрата буфер (цитрат натрия 10 мм, 0,05% 20 анимации, pH 6.0) для скороварки. Место скороварки на конфорку и поверните его на полную мощность. Не закрепляйте крышка скороварки на данный момент; просто остальные его на вершине.
      ВНИМАНИЕ: Горячий!
    2. После кипячения буфера цитрата натрия, передавать слайды с шагом 2,5 скороварки. Закрепите крышку скороварки. Как только плита достиг полного давления, ждать 7 мин. Когда прошло 7 минут, выключите конфорку и скороварку в пустую раковину. Активировать клапан выпуска и запустить холодной воды через скороварки. После того, как он де давлением, откройте крышку и запустить холодной воды в плита для 5 минут место слайды в 200 мл PBS.
      Примечание: в качестве альтернативы, Микроволновая антигена разоблачения могут использоваться, хотя риск перегрева увеличивается.
  2. Использования 0,3% перекиси водорода в метаноле блока эндогенной пероксидазы деятельности за 5 минут промыть слайды по три раза в течение 2 минут каждый в 200 мл PBS.
    Предупреждение: Горючих и токсичных!
  3. Инкубировать слайды для 15 мин в разреженных нормального блокирования сыворотки (5% нормальной козьего сыворотки в PBS), которая также содержит блок авидин (4 капель в 1 мл).
  4. Тщательно коснитесь жидкости из разделов и инкубировать их с антитела Pecam-1 от кролика, разбавленных 1:50 в PBS, содержащие 2,5% нормальной козьего сыворотки и 4 капли биотина блока на мл. Инкубируйте слайды на ночь в камере влажного на 4 ° C.
  5. Мыть слайды три раза за 5 мин в 200 мл ФСБ. Инкубируйте секции с биотинилированным анти кролик коза IgG антитела разводят 1: 200 в PBS, содержащие 2,5% нормальной козьего сыворотки 1 ч при комнатной температуре. Вымойте слайды три раза за 5 мин в 200 мл PBS.
  6. Инкубировать tОн разделы с системой на основе авидин/биотина пероксидазы для 20 мин (Реагент A и реагент Б нужно быть комбинированный 30 минут до использования). Вымойте слайды три раза за 5 мин в 200 мл PBS.
  7. Растворить 1 3,3 '-Диаминобензидин (DAB) и 1 Мочевина пероксида водорода Планшетные в 5 мл двойной дистиллированной воды. Инкубируйте секции с КАПЛЮ раствора для примерно 3 мин, тщательно контролируя цвет развития. Остановить цветной реакции, аккуратно мыть слайды в 200 мл PBS.
    Предупреждение: Канцерогенных; Надевайте защитные перчатки!
  8. Counterstain ядер 6 мин с применением окрасок гематоксилин. Промыть в проточной водопроводной воды на 2 мин Dehydrate три раза за 2 мин в 200 мл 100% алкоголя. Очистите три раза в течение 2 минут каждый в 200 мл, ксилол или заменителя ксилола. Гора в среде на основе ксилол монтажа.
  9. Фотографию слайдов (по крайней мере десять полей при 40 кратном от межжелудочковой перегородки каждого сердца) и измерения плотности области Pecam-1, с использованием свободно доступных ImageJ программного обеспечения 31. Использовать цвет деконволюция 32 плагин для DAB и гематоксилином и Отрегулируйте контрастность изображения до того же уровня.
    Примечание: В случае, если цвет коричневый и фиолетовый/синий спектральный пересекается, что может вызвать трудности с цветом Деконволюция, один можно попробовать различные марки гематоксилином решение получить четкие, светло голубой ядерной пятнать. Кроме того, может быть выполнена иммунофлюоресценции или ручной подсчет капилляров.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

На рисунке 1представитель эхокардиографические записи продемонстрировать полезность эхокардиографии для выявления сердечной фенотипов генетически измененных мышей. Можно легко определить разницу между мышь с нормальной функции сердца (рис. 1A) и животного с пролабированием левого желудочка и снижение LV функции (рис. 1B). Рисунок 2 показывает сравнение cardiomyocyte изме...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Различные методы были разработаны для оценки сердечной структуры и функции в мышей, в том числе эхокардиография, повысить контраст МРТ, микро КТ и ПЭТ-сканирование. Благодаря своей эффективности и простоте эхокардиографии является наиболее широко используемый метод для функционального анализа в11мышей. В общем, вследствие небольшого размера сердца и высокой частоты сердечных сокращений у мышей, преобразователи с частотой > 10 МГц должны быть использованы, хотя успешный измерения сообщалось с 8...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

Работа была поддержана правительством Франции (национального исследовательского агентства, НРУ) через программу «Инвестиции в будущее» LABEX SIGNALIFE (Справочник АНР-11-LABX-0028-01) и грантов на K. D. W. от Ассоциации налить sur la исследований le рака, Фонд-де-Франс и план рака Inserm. Д. б. и а. в. получили стипендии от Fondation pour la Recherche сообщала и из города Ниццы, соответственно. Echocardiograph и датчик были любезно предоставляемый Philips. Мы благодарим A. Borderie, S. Destree, M. Кутаджар-Bossert, A. Landouar, A. Мартр, A. Biancardini и S. м. Вагнер за их квалифицированную техническую помощь.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Агглютинин зародышей пшеницы (WGA) конъюгированный тетраметилродаминLife Technologies, Молекулярные зондыW849
Биотинилированный козий антикролик IgG антителаVectorlabsBA-1000
Авидин/Биотин Блокирующий наборVectorlabsSP-2001
VECTASTAIN Elite ABC HRP Kit (пероксидаза, стандарт)VectorlabsPK-6100
VECTASHIELD Монтажная среда Anti-Fade с DAPIVectorlabsH-1200
SIGMAFAST 3,3'-диаминобензидиновые таблеткиSigmaD4168
Раствор перекиси водородаSigmaH1009
Anti-Pecam-1 (CD31) антителоAbcamab28364
Гель для пропускания ультразвука, гель Aquasonic 100Parker
Линейный ультразвуковой датчик,Philips
Philips для медицинского обслуживанияIE33 xMATRIX
флуоресцентный фильтр
набор фильтров TxRLeica11525310
Программное обеспечение для визуализации
, SPOT 5.2 Расширенное и базовое программное обеспечениеКомпьютер для точечной визуализации
Dell
Тонкие ножницыИнструменты для тонкой науки14028-10
Большие ножницыИнструменты для тонкой науки14501-14
Лезвия скальпеляИнструменты для точной науки10023-00
Graefe ЩипцыFine Science Tools11650-10
Бритва для грызуновГарвардский аппарат34-0243
Кассеты для встраивания парафинаСакура4155F
нейтральный буферный ФормалинСакура8727
КсилолСакура8733
Парафин TEK IIIСакура4511
автоматизированный встраиваемый аппарат, станцияVIP Sakura6032
Tissue-Tek TEC 5Sakura5229
Accu-Edge S35Sakura4685
Tissue-TekSakura9533
, накладки Tissue-TekSakura9582
Монтажный материал Tissue-TekSakura1408
скользящие ящикиSakura3958
раствор эозинаSakura8703
раствор гематоксилинаSakura8711
микротом, RM2125RTLeica720-1880 (VWR)
водяная баня, Leica HI1210Leica720-0113(VWR)
ЭтанолVWRACRO444220050
15 мл тубыVWR734-0451
витражная чашкаVWRMARI4220004
банки для окрашиванияVWRMARI4200005
IncubatorBinder9010-0012
DAB и мочевина таблетки перекиси водорода, SIGMAFAST 3,3′-Диаминобензидин таблеткиSigmaD4293
PBS (10X)Thermo Fisher Scientific70011044
эхокардиограф L15-7io, микроскоп , Leica DMi8 Leica, DAPI Leica 11525304 цифровая камера, цветной слайдер SPOT RT3 для встраивания парафина Tissue-Tek Лезвия для микротомов , микроскопические стекла , защитные стекла

Ссылки

  1. Ormandy, E. H., Dale, J., Griffin, G. Genetic engineering of animals: ethical issues, including welfare concerns. Can Vet J. 52 (5), 544-550 (2011).
  2. Karl, T., Pabst, R., von Hörsten, S. Behavioral phenotyping of mice in pharmacological and toxicological research. Exp Toxicol Pathol. 55 (1), 69-83 (2003).
  3. Phoon, C. K., Turnbull, D. H. Cardiovascular Imaging in Mice. Curr Protoc Mouse Biol. 6 (1), 15-38 (2016).
  4. Wagner, N., et al. Peroxisome proliferator-activated receptor beta stimulation induces rapid cardiac growth and angiogenesis via direct activation of calcineurin. Cardiovasc Res. 83 (1), 61-71 (2009).
  5. Wagner, K. D., Vukolic, A., Baudouy, D., Michiels, J. F., Wagner, N. Inducible Conditional Vascular-Specific Overexpression of Peroxisome Proliferator-Activated Receptor Beta/Delta Leads to Rapid Cardiac Hypertrophy. PPAR Res. 2016, 7631085(2016).
  6. Ghanbarian, H., et al. Dnmt2/Trdmt1 as Mediator of RNA Polymerase II Transcriptional Activity in Cardiac Growth. PLoS One. 11 (6), e0156953(2016).
  7. Meguro, T., et al. Cyclosporine attenuates pressure-overload hypertrophy in mice while enhancing susceptibility to decompensation and heart failure. Circ Res. 84 (6), 735-740 (1999).
  8. de Araújo, C. C., et al. Regular and moderate aerobic training before allergic asthma induction reduces lung inflammation and remodeling. Scand J Med Sci Sports. 26 (11), 1360-1372 (2016).
  9. Benavides-Vallve, C., et al. New strategies for echocardiographic evaluation of left ventricular function in a mouse model of long-term myocardial infarction. PLoS One. 7 (7), e41691(2012).
  10. Colazzo, F., et al. Murine left atrium and left atrial appendage structure and function: echocardiographic and morphologic evaluation. PLoS One. 10 (4), e0125541(2015).
  11. Pachon, R. E., Scharf, B. A., Vatner, D. E., Vatner, S. F. Best anesthetics for assessing left ventricular systolic function by echocardiography in mice. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 308 (12), H1525-H1529 (2015).
  12. Gao, S., Ho, D., Vatner, D. E., Vatner, S. F. Echocardiography in Mice. Curr Protoc Mouse Biol. 1, 71-83 (2011).
  13. Mor-Avi, V., et al. Current and evolving echocardiographic techniques for the quantitative evaluation of cardiac mechanics: ASE/EAE consensus statement on methodology and indications endorsed by the Japanese Society of Echocardiography. J Am Soc Echocardiogr. 24 (3), 277-313 (2011).
  14. Collins, K. A., Korcarz, C. E., Lang, R. M. Use of echocardiography for the phenotypic assessment of genetically altered mice. Physiol Genomics. 13 (3), 227-239 (2003).
  15. Rottman, J. N., Ni, G., Brown, M. Echocardiographic evaluation of ventricular function in mice. Echocardiography. 24 (1), 83-89 (2007).
  16. Hart, C. Y., Burnett, J. C., Redfield, M. M. Effects of avertin versus xylazine-ketamine anesthesia on cardiac function in normal mice. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 281 (5), H1938-H1945 (2001).
  17. Moran, C. M., Thomson, A. J., Rog-Zielinska, E., Gray, G. A. High-resolution echocardiography in the assessment of cardiac physiology and disease in preclinical models. Exp Physiol. 98 (3), 629-644 (2013).
  18. Fayssoil, A., Tournoux, F. Analyzing left ventricular function in mice with Doppler echocardiography. Heart Fail Rev. 18 (4), 511-516 (2013).
  19. Schoensiegel, F., et al. High throughput echocardiography in conscious mice: training and primary screens. Ultraschall Med. 32, Suppl 1. S124-S129 (2011).
  20. Yariswamy, M., et al. Cardiac-restricted Overexpression of TRAF3 Interacting Protein 2 (TRAF3IP2) Results in Spontaneous Development of Myocardial Hypertrophy, Fibrosis, and Dysfunction. J Biol Chem. 291 (37), 19425-19436 (2016).
  21. Jara, A., et al. Cardiac-Specific Disruption of GH Receptor Alters Glucose Homeostasis While Maintaining Normal Cardiac Performance in Adult Male Mice. Endocrinology. 157 (5), 1929-1941 (2016).
  22. Kerr, B. A., et al. Stability and function of adult vasculature is sustained by Akt/Jagged1 signalling axis in endothelium. Nat Commun. 7, 10960(2016).
  23. Wagner, N., et al. Coronary vessel development requires activation of the TrkB neurotrophin receptor by the Wilms' tumor transcription factor Wt1. Genes Dev. 19 (21), 2631-2642 (2005).
  24. Wagner, K. D., et al. The Wilms' tumour suppressor Wt1 is a major regulator of tumour angiogenesis and progression. Nat Commun. 5, 5852(2014).
  25. Yang, X. P., et al. Echocardiographic assessment of cardiac function in conscious and anesthetized mice. Am J Physiol. 277 (5 Pt 2), H1967-H1974 (1999).
  26. Rottman, J. N., et al. Temporal changes in ventricular function assessed echocardiographically in conscious and anesthetized mice. J Am Soc Echocardiogr. 16 (11), 1150-1157 (2003).
  27. Quiñones, M. A., et al. Recommendations for quantification of Doppler echocardiography: a report from the Doppler Quantification Task Force of the Nomenclature and Standards Committee of the American Society of Echocardiography. J Am Soc Echocardiogr. 15 (2), 167-184 (2002).
  28. van Laake, L. W., et al. Monitoring of cell therapy and assessment of cardiac function using magnetic resonance imaging in a mouse model of myocardial infarction. Nat Protoc. 2 (10), 2551-2567 (2007).
  29. Wagner, K. D., et al. The Wilms' tumor suppressor Wt1 is expressed in the coronary vasculature after myocardial infarction. FASEB J. 16 (9), 1117-1119 (2002).
  30. Wagner, K. D., et al. RNA induction and inheritance of epigenetic cardiac hypertrophy in the mouse. Dev Cell. 14 (6), 962-969 (2008).
  31. Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis. Nat Methods. 9 (7), 671-675 (2012).
  32. Ruifrok, A. C., Johnston, D. A. Quantification of histochemical staining by color deconvolution. Anal Quant Cytol Histol. 23 (4), 291-299 (2001).
  33. Lazzeroni, D., Rimoldi, O., Camici, P. G. From Left Ventricular Hypertrophy to Dysfunction and Failure. Circ J. 80 (3), 555-564 (2016).
  34. Ismail, J. A., et al. Immunohistologic labeling of murine endothelium. Cardiovasc Pathol. 12 (2), 82-90 (2003).
  35. Benton, R. L., Maddie, M. A., Minnillo, D. R., Hagg, T., Whittemore, S. R. Griffonia simplicifolia isolectin B4 identifies a specific subpopulation of angiogenic blood vessels following contusive spinal cord injury in the adult mouse. J Comp Neurol. 507 (1), 1031-1052 (2008).
  36. Ayoub, A. E., Salm, A. K. Increased morphological diversity of microglia in the activated hypothalamic supraoptic nucleus. J Neurosci. 23 (21), 7759-7766 (2003).
  37. Maddox, D. E., Shibata, S., Goldstein, I. J. Stimulated macrophages express a new glycoprotein receptor reactive with Griffonia simplicifolia I-B4 isolectin. Proc Natl Acad Sci U S A. 79 (1), 166-170 (1982).
  38. dela Paz, N. G., D'Amore, P. A. Arterial versus venous endothelial cells. Cell Tissue Res. 335 (1), 5-16 (2009).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Pecam 1
Эхокардиографических и гистологической экспертизы сердечной морфологии в мышь
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.