Здесь мы представляем специфический анализ Caenorhabditis elegans, предназначенный для оценки изменений поведения отвращения меди и способности находить общий источник пищи, так как организм развивается из сытого и голодного состояния питания.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Чтобы обеспечить выживание, организмы должны быть способны избегать неблагоприятных мест обитания, обеспечивая при этом постоянный источник пищи. Caenorhabditis elegans изменяют свои локомоторные закономерности при обнаружении разнообразных экологических стимулов и могут модулировать их набор поведенческих реакций в ответ на условия голодания. Нематоды обычно проявляют сниженный отвратительный ответ при удалении из источника пищи в течение более 30 мин. Наблюдение за поведенческими изменениями в ответ на меняющийся статус питания может дать представление о механизмах, которые регулируют переход от хорошо питающегося к голодному состоянию.
Мы разработали анализ, который измеряет способность нематоды пересекать барьер аверсивного действия ( то есть медь), затем достигает источника пищи в течение длительного периода времени. Этот протокол основывается на предыдущей работе, интегрируя несколько переменных таким образом, который позволяет продолжать сбор данных, когда организмы смещаются в сторонуN все более голодное состояние. Более того, этот анализ позволяет увеличить размер выборки, чтобы одновременно можно было оценить большую популяцию нематод.
Организмы, дефектные для способности обнаруживать или реагировать на медь, немедленно пересекают химический барьер, в то время как нематоды дикого типа изначально отталкиваются. Поскольку черви типа дикого типа становятся все более голодными, они начинают пересекать барьер и достигать источника пищи. Мы разработали этот анализ для оценки мутанта, который неспособен реагировать на различные экологические сигналы, включая пищевые ощущения или обнаружение отвратительных химических веществ. При оценке по этому протоколу дефектные организмы немедленно пересекали барьер, но также не могли обнаружить источник пищи. Следовательно, эти мутанты неоднократно пересекают химический барьер, несмотря на временное достижение источника пищи. Этот анализ может прямо проверять популяции червей для оценки потенциальных дефектов пути, связанных с отвращением и голоданием.
Введение
Caenorhabditis elegans использовался как модель для изучения нейробиологии в течение десятилетий из-за относительной легкости анализа схем нервной системы, состоящей только из 302 нейронов 1 . При условии, что организм зависит от реагирования на экологические сигналы, большая часть нервной системы предназначена для регулирования интеграции экологических сигналов 2 . Несмотря на простоту своей нервной системы, C. elegans может обнаруживать и реагировать на различные экологические сигналы, включая репелленты 3 , аттрактанты 4 , температуру
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Подготовка экспериментальных организмов
- Выбирайте 10 L4-ступенчатых нематод на один штамм за 24 часа до начала анализа, чтобы убедиться, что организмы являются молодыми взрослыми при тестировании. Для каждого тестируемого мутанта или контрольной нематоды выберите 10 L4s (10 для контроля и 10 для анализа).
- Поддерживайте организмы L4 с использованием стандартных методов 26 , 27 в течение 24 часов на стандартных агаровых чашках, засеянных OP50 Escherichia coli . Если организмы теряются во время последующих этапов промывки, компенсируйте, увеличив размер исходного ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Использовали дикий тип (N2), npr-9 (tm1652) и сверхэкспрессию npr-9 , т. Е. Npr -9 (GF) (IC836 - npr -9 :: npr-9; sur-5 :: gfp; odr -1 :: rfp), чтобы оценить реакцию на голод и отторжение меди. Органы дикого типа способны обнаруживать и реагировать на аверсивный медный барьер, в то время как мутанты npr-9 (GF) не инициируют отвратительный ответ на медь в течение 4 ч анализа 21 . Через 30 минут голодани.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Эта конструкция анализа изменяет анализ 24 продовольственной гонки, чтобы включить медный раствор для создания протективного срединного барьера и вокруг края пластины, чтобы предотвратить потерю нематод. Организмы тестируются на их способность преодолевать протективный барьер и достигать патча для пищи в течение 4-х часов. В контексте npr-9 (GF) мы использовали этот анализ для оценки того, как условия голодания могут влиять на отвратительные реакции и обнаружение пищи. При условии, что м.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Нам нечего раскрывать.
Благодарности
Эта работа была поддержана Советом исследований естественных наук и инженерных исследований Канады Discovery Grant RGPIN36481-08 Уильяму Г. Бендене.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| M9 Solution [3 г KH2PO4, 6 г Na2HPO4, 5 г NaCl, 1 мл 1 М MgSO4, H2O до 1 литра. Провести стерилизацию в автоклаве перед использованием.] | Производится в лаборатории | ||
| Сульфат меди | Sigma | C-1297 | Использовать воду для получения соответствующей суспензии с концентрацией 0,5 М |
Ссылки
- White, J. G., Southgate, E., Thomson, J. N., Brenner, S. The structure of the nervous system of the nematode Caenorhabditis elegans. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 314 (1165), 1-340 (1986).
- Bargmann, C. I. Chemosensation in C. elegans (October 25, 2006). The C. e....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Теги
