Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Высоким содержанием жиров питание и высокая пропускная способность Triacylglyceride Assay в Drosophila Melanogaster

11.3K просмотров

DOI:

10.3791/56029

13 сентября 2017 г.

В этой статье

Краткое содержание

Это высокий жира диета питание протокол побудить ожирения у дрозофилы, модель для понимания основополагающих молекулярных механизмов, причастных к lipotoxicity. Она также обеспечивает Пробирная triacylglyceride высокой пропускной способности для измерения накопление жира в дрозофилы и потенциально другие (насекомое) модели различных диетических, экологических, генетических или физиологических условиях.

Аннотация

Болезнь сердца является номер один причиной смерти человека во всем мире. Многочисленные исследования показали прочные связи между ожирением и сердечной неисправности в организме человека, но больше инструментов и исследовательские усилия необходимы для лучшего выяснения механизмов. Для более века, генетически очень шансов справиться с возникающими модель дрозофилы сыграла важную роль в открытие ключевых генов и молекулярные пути, которые оказались весьма сохраняться различных видов. Многие биологические процессы и механизмы болезней функционально консервируют в лету, как развитие (например, план тела, сердца), рак и нейродегенеративных заболеваний. Недавно изучению ожирения и вторичные патологий, таких как болезни сердца в модельных организмов, играет весьма важную роль в выявлении ключевых регуляторов участвующих в метаболического синдрома в организме человека.

Здесь мы предлагаем использовать эту модель организма как эффективный инструмент чтобы вызвать ожирение, то есть, чрезмерное накопление жира и разработать эффективный протокол контролировать содержание жира в виде тегов накопления. В дополнение к весьма сохраняется, но менее сложных генома лету также имеет короткий срок для быстрого экспериментов, в сочетании с экономической эффективности. Этот документ предоставляет подробный протокол для высоких жиров диеты (HFD) кормления у дрозофилы побудить ожирения и высокая пропускная способность assay triacylglyceride (TAG) для измерения связанное с этим увеличение содержание жира, с тем чтобы быть высокую воспроизводимость и эффективно для крупномасштабных генетических или химического скрининга. Эти протоколы предлагают новые возможности эффективно расследовать регламентационных механизмов, участвующих в ожирения, а также предоставляют стандартизированную платформу для исследования обнаружения наркотиков для быстрого тестирования воздействия наркотиков кандидатов на развитие или Профилактика ожирения, диабета и связанных с ними метаболических заболеваний.

Введение

Мы находимся в то время где ожирения и ее ассоциированные экономические трудности, является общемировой проблемой1. Два из каждых трех американцев, избыточный вес или страдают ожирением с связанные сердца патологий, основной причиной смерти в течение взрослого населения2. Новые эффективные методы необходимо адекватно расследовать генетические и молекулярные компоненты, замешанных в регуляции метаболического синдрома с помощью модельных организмов. По этой причине мы выбираем модель плодовой мушки Drosophila потому, что он разделяет самых основных биологических процессов с млекопитающих, в том числе мышей и людей....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. HFD кормления протокол

figure-protocol-1
в таблице 1. Fly питания рецепт.
В следующей таблице перечислены различные ингредиенты, используемые для подготовки нашего управления питания. После того, как сделал, 10 мл пищи выливают в флаконах, охлаждается и хранить при 4 ° C для долгосрочного хранения.

  1. HFD подготовки
    1. чтобы сделать 1 кг высокое жирной пищи, вес 700 г заранее сделал нормальную еду летать (см. таблицу 1) и 300 гр кокосового масла в две отдельные контейнеры с исп....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

D. melanogasterкак в случае с другими видами, в половой диморфизм между22мужчины и женщины. Хорошо известно, что самки крупнее, с больше жира в их животы, чем мужчины22. Чтобы проверить эффективность нашего протокола, мы провели тег анализов для определения различий в тег содержимого между мужчинами и женщинами стандартных лабораторных wildtype (w1118) летит. Данные показывают, что женщины имеют больше всего тела.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Индукции ожирением мышей может занять месяцы19,20. В мух этот HFD кормления протокол позволяет для индукции избыточное накопление жира в течение нескольких дней или меньше, вызывая увеличение в накопление жира только после 18 h (см. Рисунок 2). HFD кормления с описанной протокол увеличивает содержание глюкозы 12 и уменьшает Bmm липазы и PGC-1 выражение24. Это в отличие от поста.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

Мы хотели бы поблагодарить Erika Тейлор для редактирования этой рукописи. Эта работа финансировалась грантов от национальных институтов здравоохранения (P01 HL098053, P01 AG033561 и R01 HL054732) для р.б., добавки пост-докторские исследования (R01 HL085481) и стипендий (AAUW) к S.B.D. и гранты от Американской ассоциации сердца в S.B.D. и R.T.B.

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Talboys Шаровая капельница/диспенсер для шариковTalboys#: 930150
Высокопроизводительный гомогенизатор TalboysTalboys#: 930145
Шлифовальные шары, нержавеющая сталь OPS Diagnostics, LLC# GBSS 156-5000-015000 шариков
Masterblock 96 Скважинные глубокие микропланшетыGreiner Bio-One# T-3058-1кейс из 80 пластин
Greiner  96 луночный микропланшет плоское дноSigma Aldrich# M443640 пластин
Greiner CapMat для герметизации многолуночных пластинSigma Aldrich# C360650 герметизирующих пластин Реагент
Резервуары& НБСП;Thomas Scientific# 1192T7112/PK
Thermo Scientific Finnpipette 4661040Thermo Scientific# 46610401-10 мкл мультипипетка
Thermo Scientific Finnpipette 4661070Thermo Scientific# 466107030-300 мкл мультипипетка
Thermo Scientific Finnpipette 4661020Thermo Scientific#466102010-100 мкл
многоканальный наконечники Denville Scientific Inc# P3131-Sдля пипетки 10 мкл
Многоканальные наконечникиDenville Scientific Inc# P3133-Sдля пипетки 200 мкл
Многоканальные наконечникиDenville Scientific Inc#P1125для пипетки 100 мкл
Щипцы Roboz Surgical# 5 DumontsСупертонкие щипцы
Mettler Toledo Excellence XS Аналитические весы Mfr# XS64Cole-Parmer научные эксперты# EW-11333-00
Metler Toledo Excellence XS Toploading BalanceCole-Parmer научные эксперты# EW-11333-49
96-луночная микропланшетная центрифугаHettich Zentrifugen# Rotina 420R
Microplate СчитывательМолекулярные устройства# SpectraMax 190
Lab-Line Bench Top Orbit Environ Shaker IncubatorBiostad# 3527
Infinity Triglycerides reagentThermo Scientific# TR22421
Стандарт триглицеридовStanbio#2103 - 030
Quick Start Bradford Protein AssayBio-RAD# 500-02051x краситель Реагент
Кокосовое маслоNutiva# 69275220001415 0z баночка
PBS 10XThermo Scientific# AM9625500 мл
Triton X-100Sigma Aldrich# 9002-93-1
Газопроницаемая фольгаMacherey-Nagel# 74067550 штук
фильтровальная бумагаVWR# 28317-241Упаковка из 100
флаконовдрозофилыGenesee ScientificCat #: 32-116SB
Quick Start Bovine Serum Albumin StandardBio-Rad# 5000206
FlyNap AnestheticCarolina# 173025100 мл
Kimwipes Low-LintUline# S-81151-Ply, 4,4 x 8,4"

Ссылки

  1. Ng, M., et al. Global, regional, and national prevalence of overweight and obesity in children and adults during 1980-2013: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2013. Lancet. 384, 766-781 (2014).
  2. Murphy, S. L., et al. Mortality in the United States, 2014. NCHS data brief, no 229. , Available from:

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Индукция ожиренияизмерение содержания жиравысокопроизводительный скринингприготовление корма для мушексверхчувствительные весыметаллические шлифующие шарикипланшет для спектрофотометра