Заявление об этике: Институциональный комитет по уходу и использованию животных Университета штата Миссисипи одобрил все методы отлова, обращения и маркировки в соответствии с протоколами 04-068, 07-036, 10-03 и 13-034.
1. Создание мест отлова, иммобилизация и транспортировка дикого белохвостсяго оленя
- Определите государственные и частные земельные участки, участвующие в Программе содействия управлению популяциями оленей2, и установите ≥29 точек отлова в трех исходных регионах штата Миссисипи, США.
- Выберите несколько точек отлова в каждом исходном регионе, чтобы обеспечить охват всего диапазона генетической изменчивости, присутствующей в региональной популяции.
- Примечание: В данном случае исходные регионы включали Дельту, которая занимает почти 17% от общей площади земли в Миссисипи, США, и считается регионом с высококачественными почвами, где основным использованием земель является сельское хозяйство23,24. Все исследуемые животные были отловлены в этом регионе в пределах ареала распространения O. v. virginianus25. Другие регионы включали регион тонкого лёсса (объединенные верхний и нижний тонкий лёсс), который составляет почти 14% от общей площади земли в Миссисипи, США, и считается регионом со средним качеством почв. Сельское хозяйство также является основным видом землепользования в регионе тонкого лёсса, хотя и не столь распространенным, как в Дельте23,24. Все исследуемые животные были отловлены в этом регионе в пределах ареала распространения O. v. virginianus21. Наконец, почвенный регион Нижней прибрежной равнины (LCP) занимает почти 2% территории Миссисипи и классифицируется как регион с низким качеством почв. Основными видами землепользования в LCP являются производство соснового леса и выпас скота23,24. Регион LCP также перекрывается с географическим ареалом O. v. osceola; четыре из шести исходных популяций находились в пределах 21 km от этого ареала25. Данный подвид был описан как более мелкий, чем O. v. virginianus26.

Рисунок 1Исходные популяции. Физиографические регионы Миссисипи (США), в которых были отловлены беременные самки и детеныши. Рисунок модифицирован на основе источника31. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
- Выберите потенциальные места отлова, соответствующие следующим критериям: характеристики среды обитания, способствующие перемещению оленей, близость к дорогам для обеспечения доступа и равномерное распределение по всей исследуемой области.
ПРИМЕЧАНИЕ: Места отлова должны обеспечивать возможность скрытого размещения специалиста по отлову.
- Приманите оленей в данные места, используя около 10 kg очищенной кукурузы, и оцените эффективность точек на основе потребления приманки и фотографий оленей, сделанных камерами с датчиками движения. Если олени не посещают прикормочные площадки в течение 5-7 дней, перенесите отлов на альтернативные участки.
- Во время процесса отлова находитесь в скрытом «засидке-стенде».
- Разместите стенд примерно в 20 m с подветренной стороны от кучи приманки, учитывая преобладающее направление ветра, чтобы олени, приближающиеся к приманке, с меньшей вероятностью почувствовали запах специалиста по отлову.
ПРИМЕЧАНИЕ: Настоятельно рекомендуются приподнятые стенды, использование страховочных привязей обязательно. Существует несколько вариантов стендов от различных коммерческих поставщиков, и выбор зависит от личных предпочтений. Например, стационарный стенд может включать сиденье с лестницей для доступа, закрепленное на дереве ремнями. Переносные лестничные стенды могут доставляться специалистом по отлову, что обеспечивает большую мобильность, так как специалист может выбрать конкретное дерево уже по прибытии на место отлова. Использование переносных лестничных стендов ограничено прямыми деревьями без ветвей на выбранной высоте.
- Используйте дротикометатель в сочетании с радиометрическим дротиком объемом 3 cc для введения смеси телетамина HCl (4.4 mg/kg) и ксилазина HCl (2.2 mg/kg).
- Спланируйте мероприятия по отлову так, чтобы они совпадали с типичным сумеречным циклом активности оленей27. Начинайте каждую попытку отлова за 2-3 h до захода солнца.
- Если олени не были отловлены в светлое время суток, продолжайте мероприятия по отлову в течение 2-3 h после захода солнца, используя приборы ночного видения и лазерный целеуказатель для точного попадания.
- Производите выстрел, когда олень стоит неподвижно боком к вам.
ПРИМЕЧАНИЕ: Целью является задняя четверть оленя, так как там сосредоточена значительная мышечная ткань и эта область удалена от сердца и легких.
- Подождите около 15 min, пока животные-мишени (шестимесячные оленята любого пола или беременные взрослые самки), получившие укол дротиком, полностью не обездвижат, прежде чем обнаруживать их с помощью оборудования для направленной радиометрии.
- Подтвердите седацию особей, проверив наличие глазных рефлексов (мигание). Затем нанесите офтальмологическую мазь на глаза и завяжите глаза оленю, чтобы снизить уровень стресса.
ПРИМЕЧАНИЕ: Нарушение терморегуляции является следствием иммобилизации.
- Используйте ректальный термометр для оценки температуры тела после восстановления. Согрейте оленя подогреваемую одеялами, если температура животного ниже 37.7 °C. Охладите оленя пакетами со льдом, если температура животного выше 40.0 °C.
- Поместите оленя в положении лежа на животе (стернальное положение) на носилки военного типа и транспортируйте его из места отлова в закрытый прицеп.
- После помещения оленя в прицеп нейтрализуйте действие ксилазина HCl с помощью 0.125 mg/kg йохимбина HCl28.
- Транспортируйте всех отловленных оленей в соответствующее учреждение для содержания в неволе (например, в отдел оленей имени Расти Докинса Университета штата Миссисипи; MSU Deer Unit) и держите их разделенными по регионам происхождения.
2. Условия содержания и общие правила ухода за лабораторными животными
ПРИМЕЧАНИЕ: Оленья установка MSU разделена на пять загонов площадью от 0,4 до 0,8 ha.
- Закройте все стороны каждого загона затеняющей сеткой, чтобы создать визуальный и физический барьер между ними. Затеняющая сетка способствует снижению травматизма и обеспечивает тень в летние месяцы.
- Разместите по 1–2 приподнятых засика (боксов) в одном конце каждого загона, чтобы облегчить введение дротиков в процессе сбора данных.
- Разместите два кормушки желобчатого типа в противоположных концах каждого загона, чтобы снизить конкуренцию за корм между оленями. Также установите в каждом загоне поилку-желоб.
- Обеспечьте оленей высококачественным рационом (гранулами для оленей с содержанием сырого протеина 20%) ad libitum.
ПРИМЕЧАНИЕ: Здесь в качестве дополнительных доступных кормов в загонах использовались (Trifolium spp.) и овсяницы (Festuca spp.) вместе с самосеянными злаками и разнотравьем.
- При наличии поддерживайте доступные корма в загонах, используя смесь гербицидов для борьбы с широколистными сорняками и злаковыми травами в дозировках, указанных на соответствующих этикетках.
ПРИМЕЧАНИЕ: Вероятно, потребуется использование внешних площадок для содержания самцов в возрасте ≥5,5 месяцев. Данные площадки состояли из двух загонов площадью 0,7 га на каждом из трех участков с методами ухода, аналогичными тем, что применяются в подразделении по разведению оленей Университета штата Мичиган (MSU Deer Unit).

Рисунок 2Расположение объектов содержания в неволе. Район исследования, где были расположены вспомогательные объекты и отдел изучения оленей Университета штата Миссисипи (MSU). Затененные области обозначают округ Октиббеха (A), Noxubee (B), Аттала (С), Скотт (D), и Copiah (Е), округа, штат Миссисипи, США. Данный рисунок был изменен на основании источника34. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
3. Борьба с паразитами и заболеваниями
- Контролируйте наличие круглых червей-паразитов (Strongyloides spp) у подопытных животных с помощью метода флотации фекалий, измеря количество паразитов в яйцах на грамм (EPG).
- При обнаружении высокой концентрации проведите противогельминтную обработку, используя гранулированный препарат (активный ингредиент фенбендазол) в дозе примерно 0.7 kg препарата на 2.7 kg корма в течение мая.
- Если после первичного лечения уровень паразитов остается высоким, используйте ивермектин в форме раствора для нанесения на кожу (5 mg/mL)29, смешанный в пропорции 2 mL/0.45 kg, и вводите животным из расчета 0.45 kg обработанного корма на 45.4 kg массы тела животного.
ПРИМЕЧАНИЕ: Эпизоотическая геморрагическая болезнь представляет собой иногда летальное вирусное заболевание, распространяемое кусающими мошками (Culicoides spp) в летние и осенние месяцы. В случае ее возникновения обработайте исследовательский комплекс инсектицидом (5% ультранизкий объем инсектицида) 2-3 раза в неделю с 1 июля по 1 октября для снижения распространенности переносчиков среди подопытных животных. Распыляйте инсектицид с помощью генератора тумана в каждом загоне и по периметру комплекса примерно за 90 min до официального захода солнца. Предпочтительные методы борьбы с паразитами и болезнями индивидуальны для каждого учреждения по содержанию животных. При проведении любых исследований диких животных в неволе необходимо консультироваться с ветеринарами для обеспечения здоровья и безопасности животных.
4. Сбор данных

Рисунок 3Сбор данных о новорожденных оленятахИзмерение длины задней стопы новорожденного олененка в Мемориальном отделе по изучению оленей имени Расти Докинса при Университете штата Миссисипи в округе Октиббеха, штат Миссисипи, США. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
- Ежедневно осматривайте помещение для содержания животных в период отела на предмет появления оленят.
- Присвойте новорожденным оленятам уникальные идентификаторы, установив средние пластиковые ушные бирки с помощью аппликатора; на мужской конец бирки нанесите антибиотик для предотвращения возможной инфекции. Разместите бирку примерно по центру ушной раковины олененка.
- Измерьте массу тела (с точностью до 0.01 kg) с помощью цифровых подвесных весов, а также измерьте длину задней стопы и общую длину тела (с точностью до mm).
- Соберите образцы шерсти и отправьте их в удаленную лабораторию для определения родительства (см. таблицу материалов).
ПРИМЕЧАНИЕ: Определение родительства осуществлялось на основе ДНК с использованием проприетарной нестатистической специализированной базы данных на языке структурированных запросов. При попарном сравнении аллелей удаленная лаборатория подтверждала родительство, если исключались все, кроме одного самца и одной самки, на основании общего аллеля от каждого родителя по всем протестированным локусам (Б. Г. Кэссиди, личное сообщение). Этот метод определения родительства также использовался в предыдущих исследованиях белохвостых оленей в неволе30,31.
- Введите подкожно 2 cc токсоида Clostridium perfringens типов C и D и антитоксина Clostridium perfringens типов C и D, а также введите перорально каждому олененку 0.3 cc/kg ивермектина в пропиленгликоле (Veterinarian School Университета штата Миссисипи, Миссисипи, США).
- Проводите химическую иммобилизацию взрослых самцов (≥1.5 лет) в октябре и ноябре для сбора данных.
- Иммобилизуйте взрослых особей в загонах, используя ту же комбинацию телетамина HCl и ксилазина HCl, которая применялась для отлова диких животных (шаг 1.4).
- Во время седации сопроводите техника, который будет вводить дротики, в конец загона, где расположены приподнятые засилонки. В каждой из двух засилонок должен находиться один техник.
- Сотрудник, сопровождавший техника к засилонке, должен вернуться в противоположный конец загона.
ПРИМЕЧАНИЕ: Олени уходят от этих сотрудников и оказываются перед засилонками, где техники находятся в позиции для нанесения этичных выстрелов по каждому оленю.
- Произведите выстрел по оленю, когда он стоит боком и неподвижно (раздел 1.4).
- Подождите около 15 мин, пока животные, получившие дротик, полностью не иммобилизуются, прежде чем приближаться к ним.
- Подтвердите седацию особей, проверив глазные рефлексы (мигание). Нанесите на глаза офтальмологическую мазь и завяжите глаза оленю повязкой, чтобы снизить стресс.
- После успешной седации оленя контролируйте показатели его жизнедеятельности.
- Используйте ректальный термометр для оценки температуры тела после восстановления. Согрейте оленя подогреваемыми одеялами, если температура животного ниже 37.7 °C. Охладите оленя пакетами со льдом, если температура животного выше 40.0 °C.
- Поместите оленя на носилки армейского типа и транспортируйте его с помощью многофункционального транспортного средства (UTV) в заранее определенную зону сбора данных.
- После транспортировки зафиксируйте те же морфометрические показатели, что и при рождении (шаг 4.1).
- Измерьте массу тела (с точностью до 0.01 kg) с помощью цифровых подвесных весов, а также измерьте длину задней стопы и общую длину тела (с точностью до mm).
ПРИМЕЧАНИЕ: Отдельные олени по-разному реагируют на комбинацию препаратов, используемых при седации, поэтому введите около 0.1-0.3 cc смеси телетамина HCl и ксилазина HCl (в зависимости от массы тела конкретного оленя), если особь выходит из состояния седации до завершения сбора данных.
- Введите всем оленям соответствующие их размеру дозы антибиотика, ивермектина, клостридиальной вакцины и вакцины против лептоспироза после их транспортировки в зону сбора данных (см. разделы 1 и 3).
- Произведите три измерения рогов взрослых самцов с помощью измерительной ленты для рогов, пока животное находится под седацией.
- До удаления рогов измерьте внутренний размах (наибольшее расстояние между главными балками), базальный обхват (наименьший диаметр, расположенный между венчиком и первым отростком G1) и длину главной балки (расстояние от основания рога до кончика главной балки).
- Удалите рога примерно на 3 cm выше венчика, используя сабельную пилу. Не удаляйте рога на расстоянии менее 3 cm.

Рисунок 4Сбор данных по взрослым самцам. Удаление рогов у взрослого самца белохвостого оленя, содержащегося в неволе, с помощью сабельной пилы. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
- После сбора всех данных от седированного животного поместите оленя в соответствующий загон и введите либо 0,125 мг/кг йохимбина HCl28 или 4,0 мг/кг толазолина гидрохлорида32 для купирования действия ксилазина HCl. Наблюдайте за особями, чтобы они оставались в положении лежа на груди до полного прекращения седации и восстановления полной осознанности.
ПРИМЕЧАНИЕ: В случае возникновения осложнений, при которых потребуется эвтаназия животных, этичными способами усыпления являются деслокация головного мозга с помощью деструктора (болт-станера) и перерезание яремной вены.
- Перенесите рога в специально отведенную зону для завершения измерения их размера.
- Измерьте каждый отдельный зубец, выступающий из основного луча (G1, G2, G3, и т. д.) и дополнительные аномальные точки с помощью проволоки.
ПРИМЕЧАНИЕ: Точки, не имеющие соответствующего аналога на противоположной основной балке или не соответствующие определению типичного набора рогов, определяются Boone and Crockett Club33.
- Обмотайте проволоку в месте пересечения зубца с основной балкой и отметьте эту точку для справки.
- Измерьте расстояние от этой контрольной точки до кончика зубца и повторите процедуру для каждого зубца.
- Соберите остальные измерения окружности, определив самую узкую точку между зубцами G1 и G2 (окружность H2), между зубцами G2 и G3 (окружность H3) и, если имеется, между зубцами G3 и G4 (окружность H4).
- Если зубец G4 отсутствует, измерьте расстояние от середины зубца G3 до конца основной балки и измерьте окружность H4 в средней точке.
- Измеряйте менее четырех обхватов, если рога имеют менее трех отростков.
ПРИМЕЧАНИЕ: Например, при наличии двух типичных точек на основном луче измеряется только три окружности. Для расчета размера рогов могут использоваться другие руководства (Safari Club International), однако для обеспечения достоверности сравнения в отношении каждого животного должны применяться единообразные методы.
- После проведения всех измерений рассчитайте баллы за рога по системе, аналогичной общему баллу для нетипичных трофеев по системе Boone and Crockett.33.
- Взвесьте рога с точностью до 0,1 г на цифровых научных весах и установите минимальную критическую массу рогов в 1 г для животных первого года жизни с длиной рогов менее 3 см.
- Проведите химическую иммобилизацию молодых особей в садках в возрасте примерно 5,5 месяцев, используя те же методы, что и для взрослых особей (раздел 4.2), и пометьте молодых особей крупной пластиковой биркой в ушную раковину (шаг 4.1.1).
- Используйте те же дозировки смеси препаратов для иммобилизации взрослых особей в неволе, что и при иммобилизации диких оленей (раздел 1).
- Проведите те же измерения, что и при рождении (шаг 4.1.2), и введите те же профилактические препараты, что и взрослым (раздел 4.2).
ПРИМЕЧАНИЕ: После сбора всех данных перевезите каждого молодого самца в случайно назначенное вспомогательное помещение с помощью прицепа.
5. Получение потомства первого и второго поколений
- Классифицируйте шестимесячных оленят, пойманных в дикой природе, а также потомство, рожденное в условиях неволи от матерей из дикой природы, как особей первого поколения.
- В период размножения помещайте двух самцов с 7–16 самками для достижения среднего соотношения полов при разведении — один самец на восемь самок.
ПРИМЕЧАНИЕ: Отбирайте самцов для разведения из вспомогательных центров содержания на основании их внешнего вида, так как наиболее здоровые самцы (с самыми крупными рогами и наибольшим размером тела) с наибольшей вероятностью смогут обслуживать самок на протяжении всего сезона размножения, не получив травм из-за агрессивного поведения самцов в этот период.
- Допускайте размножение оленей только с особями из того же региона происхождения (например, самцы из региона Delta спариваются с самками из региона Delta, самцы из региона Thin Loess — с самками из региона Thin Loess, а самцы из региона LCP — с самками из региона LCP).
- Классифицируйте оленей, зачатых родителями первого поколения, как потомство второго поколения. Выращивайте этих особей в неволе с рождения и кормите тем же высококачественным рационом, что и их родителей.
ПРИМЕЧАНИЕ: Самки могут приносить потомство на протяжении нескольких лет, но обычно от разных самцов в каждом году. Собирайте о потомстве второго поколения те же данные, что собирались для особей первого поколения и особей, пойманных в дикой природе.