Измерения в естественных условиях изменения внеклеточного нейротрансмиттеров в ходе естественно награждение поведения в женских сирийских хомяков

Краткое содержание

Этот документ подробно использования фиксированной потенциал Амперометрическое записей с использованием углеродного волокна электродов и ферментативные биосенсор технологии для измерения выпуска допамина и глутамата с высоким временным разрешением во время естественного награждение поведения в Женский хомяк.

Аннотация

Возможность нейромедиатора релиз в масштабе быстрого времени измерения позволяет модели синапсах увязываться с конкретным поведением или манипуляций; Это мощный инструмент в изучение основополагающих механизмов и схем. В то время как метод микродиализом был использован на протяжении десятилетий для измерения почти любой аналита интерес в головном мозге, этот метод ограничен временного разрешения. Кроме того быстрое сканирование циклической вольтамперометрии височно точные и чрезвычайно чувствительных; Однако потому что это технически сложным метод основывается на electroactivity аналита интерес, исключается возможность обнаружить nonelectroactive веществ (например, нейромедиатора глутамата). Этот документ подробно описывает использование системы под ключ, которая сочетает в себе amperometry-потенциал и ферментативные biosensing для измерения Электроактивные и nonelectroactive нейротрансмиттеров с височной точностью. Сопряжения этих двух мощных методов позволяет для измерения тоник и фазовые синапсах с относительной легкостью и позволяет одновременно с записью нескольких нейротрансмиттеров. Цель этой рукописи – продемонстрировать процесс измерения допамина и глутамата синапсах в естественных условиях с помощью естественно награждение поведения (т.е., сексуального поведения) в женских хомяков, с конечной целью отображения Техническая осуществимость этого анализа для изучения других поведений и экспериментальных парадигм.

Введение

Возможность измерения нейромедиатора релиз в бодрствовать поведения животных позволяет исследователям увязать конкретные режимы с пространственных и временных моделей синапсах-мощный инструмент для изучения механизмов и схем, лежащие в основе обоих природных и оперантной поведение в режиме реального времени. Исторически микродиализом был нанят для измерения в внеклеточной средой мозга¹электрически реактивной и неспекающиеся веществ. Этот метод использует непрерывный поток водный раствор аналогичные ионного состава внеклеточной жидкости через зонд микродиализом, состоит из небольшой вал с наконечником из полупроницаемых полые волокна мембраны². После введения зонда, медиаторы или другие аналитов интерес может пересечь полупроницаемой мембраны путем пассивной диффузии перед будучи собиранными высокопроизводительных жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), интервалы для последующего анализа Техника аналитическая химия, обычно используются для разделения, определить и количественно компонентов в гетерогенных смесь³.

Хотя микродиализом является чувствительной технологией, которая может использоваться для измерения практически любой аналита интерес, временное разрешение низка, с максимальной частотой дискретизации по приказу минут до десятков минут^1,2. Изобретение быстрого сканирования циклической вольтамперометрии (FSCV), техника, которая опирается на redox потенциал Электроактивные видов, можно выяснить вблизи мгновенной концентрации аналита интерес в внеклеточной жидкости. В краткой (см. Робинсон и др. ⁴ для обширный обзор), электрод применяется для поднятия и опускания в треугольная волна моды на быстрое время шкала⁴напряжение. Когда напряжение находится в допустимом диапазоне, соединение интереса неоднократно окисляется и уменьшена. Этот окисления и сокращение приводит в движение электронов, которое создает небольшой переменный ток. Сканировать курсы проходят на шкале секунды с окислением и сокращение соединений, происходящих в микросекундах. Вычитанием фона текущего созданные зонда от тока, один может генерировать напряжение vs. текущие сюжет, уникальные для каждого соединения. Поскольку шкала времени колебаний напряжения, как известно, эти данные могут использоваться для вычисления участок тока как функцию от времени. Таким образом относительной концентрации комплекса может быть определено до тех пор, как количество электронов, переданных в каждом окисления и снижение реакции, как известно,⁴.

Эта химическая специфика и высокое временнóе разрешение сделать FSCV мощный метод для обнаружения изменения концентрации химических веществ в естественных условиях. Однако несмотря на эти многочисленные преимущества, этот метод требует обширных технических знаний и дорогостоящее оборудование и установки. Кроме того nonelectroactive нейромедиаторов (например, глутамата) не может измеряться с помощью этой техники. К счастью технологических достижений в области электрохимии⁵, а также коммерциализации этих изобретений, ввела сравнительно простой подход для измерения не Электроактивные нейротрансмиттеров в бодрствовать поведения животных без ущерба для временных метод точности а, известный как ферментативные биосенсор технологии. Этот метод использует Энзиматическая конверсия нейромедиатор nonelectroactive интерес в двух подложек, одним из которых является Электроактивные перекиси водорода, которая определяется как окисление Амперометрическое текущего генерируется прикладной потенциал⁵ . Коммерчески доступных биосенсор зонды (см. Рисунок 1) избирательно измерить аналитов интереса конкурсно уменьшая вклад эндогенного счётчик. В случае глутамата вклад общей interferent аскорбиновой кислоты (AA) конкурсно уменьшен для измерения тока совместно локализации оксидазы AA на активной ферментативные поверхность датчика, преобразование АА не Электроактивные dihydroascorbate и вода. Кроме того отрицательно заряженных Nafion полимерный слой под слоем фермента исключает эндогенных анионные соединений.

Этот же биосенсор экспериментальной установки можно измерить Электроактивные медиаторы как FSCV, но вместо этого он использует фиксированный потенциал записи⁶. В отличие от колебаний напряжения в FSCV в записи фиксированной потенциал напряжения хранится в redox потенциал для аналита интерес. Хотя это менее химически селективным, чем FSCV, как несколько нейротрансмиттеров, возможно же окислительно-восстановительного потенциала, в областях мозга, которые преимущественно наклон к одной нейромедиатора, ключ характер этого подхода перевешивает отсутствие химического специфика.

Возможность измерить Электроактивные и nonelectroactive нейромедиатора релиз в режиме реального времени и связать его с конкретных поведенческих событий предоставляет возможность изучить сходящихся нейромедиатора релиз. Эта рукопись подробности использования этой системы допросить допамина и глутамата синапсах в ответ на природные награду в бодрствования себя хомяков. Цель этого документа заключается в деталях процесс измерения этого нейромедиатора релиз во время сексуального поведения в женских хомяков, с целью продемонстрировать свои возможности для изучения других поведений и экспериментальных парадигм.

Хомяков являются идеальной моделью для использования в электрохимических записи
Исторически крыс и мышей модели были использованы в исследовании сексуального поведения. Эти виды грызунов заниматься динамической копулятивного последовательности, с участием многочисленных женских тендерной поведения, которые включают скачкообразной, бросаясь и уха шевелить побудить мужчин и погони и в конечном итоге монтировать девушки⁷. Монтаж, самец (с или без вагинального проникновения) длится всего несколько секунд, в течение которых женщина участвует в ее сексуальное поведение осанки (называемых лордоз) также только на несколько секунд, прежде чем возобновить активные тендерной поведения. Эта модель поведения, состоящий из высокий уровень активности, перемежаются с короткими периодами бездействия, является проблематичным для измерения в синапсах поведение животных. Во-первых может быть движение артефакты в Амперометрическое записи, которые не связаны с нервной деятельности. Во-вторых локомоции ассоциируется с выпуском определенной нейротрансмиттеров в определенных областях мозга. К примеру допамина релиз был соединен двигательной активности в дорсальной и вентральной стриатума^8,9, что является основой для измерения микродиализом дофамина, после психостимулятор Администрация¹⁰. Потому что девушки типичный тендерной поведения в МОСt грызунов включают высокий уровень двигательной активности и представлены основная часть теста сексуального поведения 10 минут, это делает его трудно приписать явного компоненты сексуального поведения, которые коллективно только последние изменения в синапсах минут.

Чтобы проанализировать нейрохимических профиль женского сексуального поведения, эта лаборатория разыскал видов, в котором есть минимальный двигательной активности, сопровождающие сексуальное поведение. Копулятивного последовательности в сирийских хомяков (Mesocricetus auratus) идеально подходит для нейрохимических записей из-за отсутствия тендерной поведения обычно видели в крыс и мышей¹¹. Как следствие женщины хомяков будет вводить и обновлять лордоз позы для свыше 9 минут 10 минут тестирования сессии¹². С отсутствием посторонних опорно движений, женщина, в естественных условиях могут быть получены электрохимических записей, которые могут быть связаны с компонентами сексуальных взаимодействий с мужчиной.

Копулятивного схватки в хомяков
После введения мужской стимул животного в испытательной камере самец будет первоначально участвовать в аногенитальной области расследования (AI) самка перед монтажомее (Рисунок 2). Чтобы мужчина для монтирования самка должны взять восприимчивы сексуальные позы, известный как лордоз, в котором она арки ее обратно и отклоняет ее хвост, так что мужчины монтажа может получить полового члена доступ к ее влагалище. Мужчина будет смонтировать самка, обхватив ее конечности с обеими лапами (рис. 2B) и начать, засовывая в попытке получить intromission полового члена (рис. 2C). Мужчина будет смонтировать самка (без вставки), а также intromit несколько раз, прежде чем в конечном итоге достижение эякуляции. Эта последовательность крепления и вмешательство приводит к эякуляции, называется «копулятивного бой». Мужчины будут иметь несколько копулятивного приступами в течение одной сессии.

Протокол

все описанные здесь процедуры были одобрены институциональный уход животных и использование Комитет (IACUC) университета Миннесоты и в соответствии с руководство по уходу и использованию лабораторных животных ¹³ .

1. животных и катетеризации хирургии

1. получить Сирийской хомячков от общего поставщика животных в возрасте приблизительно 55 дней.
   Примечание: Хотя возраст животных будут отличаться из-за ограничений различных экспериментальных парадигм, для сексуального поведения важно получить половозрелых животных, которые находятся примерно того же возраста.
2. Дом животных в контролируемой температурой (22 ° C) и освещения (14 ч света следуют 10 h темные с светами вне в 13:00) среды, продовольствия и воды доступны ad libitum за исключением периоды экспериментальных испытаний.
   Примечание: Поскольку сезонные воспроизвести хомяков, 14:10 свет/темно цикла имитирует условия их естественный разведения.
3. После 1 недели адаптационного в лабораторию, выполнять асептических двусторонних ovariectomies и внутричерепных стереотаксического cannulations под общим наркозом (например, Пентобарбитал) и управлять надлежащих институционально одобрил послеоперационные болеутоляющее и антибиотик лечения как описано ^{15 14 ,}.
   Примечание: Для изучения сексуального поведения, ovariectomies необходимо удалить основным источником эндогенных половых гормонов, так что животные могут равномерно вынуждены сексуальной восприимчивости экзогенные гормон в соответствии с экспериментальной шкале с.
   1. Для дофаминергической и глутаматергические зонд имплантации, stereotaxically имплантата руководство канюли (диаметром 0,7 мм; рис. 3) в область интересов (например, этой лаборатории направлены справа прилежащем ядре (NAc)) как подробно описано в ступенчатой других ¹⁵.
      Примечание: Хотя представленные данные от одного датчика записи одной глутамата или допамина зонда на животное, эта система позволяет для одновременной записи до 4 датчиков в одиночного животного; Таким образом 1-4 канюли может быть имплантирован в зависимости от желаемого экспериментальный дизайн и результаты.
      1. Определить имплантат координаты области интереса, с использованием стереотаксического атлас (например, Золотой мозг хомяка, Морин & дерево), держать в виду, что датчик простирается 1 мм ниже канюли в мозговой ткани.
   2. После канюля stereotaxically опускается в нужное место спинной вентральный, прикрепить его к черепа с помощью Кап, построенных из стоматологических акрил, обеспеченные с Костные винты из нержавеющей стали и пластиковые главой Маунт ( Рисунок 3 ; Смотреть ¹⁵ для получения более подробной информации).
   3. Для тестирования углеродного волокна, вставьте ссылку электрода (350 мкм диаметром, Общая длина 7,5 мм) в контралатеральной полушарии.
      Примечание: Определенное место или расстояние от катетер не требуется; Ссылка электроды могут быть размещены в любом в контралатеральной полушарии, что удобно.

2. Биосенсор и углеродного волокна тестирования

1. после 1 неделя восстановления от хирургии, управлять режимом гормона грунтование побудить сексуальной восприимчивости.
   1. Подкожно вводить 10 мкг бензоата эстрадиола в 0,1 мл масло хлопковое (с.к.), около 48 ч и за 24 часа до сексуального поведения, тестирование, чтобы побудить сексуальной восприимчивости к мужской ¹¹.
   2. Придать 500 мкг прогестерона в 0,1 мл масло хлопковое, s.c., 4 ч до введения мужчин и побудить сексуальной восприимчивости ¹¹.
2. Тест всех животных в начале этапа темные их день цикла, как социальное поведение грызунов подлежат изменению под белый свет и красный свет тестирования условий ^{16 , 17 , 18}.
3. для ферментативного биосенсор глутамата тестирования, калибровки датчиков в пробирке ( рис. 4) перед использованием, как описано ранее, ^{15 , 19}.
   1. сделать калибровка решения свежие на день тестирования в стекла 20 мл центрифуга трубы. Для решения исследуемое вещество растворяются 7.4 мг L-глутаминовой кислоты в 10 мл ультра-чистой H ₂ O, нежно инвертирование трубки. Сделать interferent решение путем растворения 176.1 мг АА в 10 мл ультра-чистой H ₂ O.
   2. Создан для калибровки, поместив магнитную мешалку на основе базовой лаборатории кольцо стенда. Место 20 мл стакан с рубашкой поверх Магнитная мешалка и зажим на месте с использованием средних зажим 2 пуговицы. Бар
      1. Добавить магнитные перемешать и 20 мл 100 мм фосфата буфер солевой раствор (PBS) в стакан с рубашкой. Подключите с рубашкой стакан к циркулирующим водяной бане нагреть буферного раствора до 37 ° C.
         Примечание: Энзимный биосенсор калибровок должны быть выполнены при температуре тела с ферментативной активности под влиянием температуры.
   3. Место держатель калибровки датчика на вершине с рубашкой стакан и установить калибровки 4-канальный предусилитель на верхней части, обеспечение безопасности на месте с помощью углом зажим. Подключиться к записи калибровочных данных устройства для кондиционирования и приобретение данных предусилитель.
   4. Проверки чувствительности каждого ферментативные биосенсора, глютамат (или других аналитов интереса для других коммерчески доступных биосенсор зонды например, глюкоза) до экспериментальной записи, поместив зонд в держатель калибровки на вершине с рубашкой стакан, погружаясь зондирования полости и часть ведения хлорида серебра (AgCl) провод в буферном растворе.
      1. Перед подключением каждого датчика (до 4) тестируется на порт калибровки 4-канальный предусилитель, инициировать новую запись на компьютерный интерфейс, используя бесплатный загружаемый приобретение программного обеспечения. Разрешить датчики для достижения стабильной базовой.
   5. Начать добавление аналита инъекции, когда датчики достигли стабильной базовой линии. Используйте отверстие в держателе калибровки ввести наконечник пипетки для буферного раствора. Используйте средство быстрого основные аннотации в записи программного обеспечения для аннотирования при инъекции.
      1. Сделать 10 мкм дополнения глутамата дозирования 40 мкл раствора аналита в буферный раствор. Подождите, пока Датчик стабилизации между дополнений. Добавить 3 инъекции аналита решения перед добавлением одной инъекции из interferent AA решения (50 мкл инъекции объем 250 мкм изменений в концентрации).
         Примечание: Калибровка позволяет преобразования изменения в Амперометрическое сигнал (видел во время ферментативные экспериментальной записи на шаге 2.12) для изменения концентрации глутамата, при желании. Смотрите ссылку ¹⁵ для пошаговая инструкция. Дофаминергической датчики, используемые этой лаборатории калибруются в процессе изготовления коммерческим поставщиком. Зонды глутамата должен быть откалиброван во время использования как их чувствительность может уменьшаться с течением времени как ферментативные компоненты ухудшить ¹⁹. Потому что углеродного волокна электроды не подвергаются деградации, калибровка, выполняемые компанией до отгрузки достаточно вдоль как tВот повышенную вероятность повредить тонкие волокна углерода (диаметр 350 мкм) через дополнительный.
4. Линия испытательную камеру с постельным бельем, взяты из животных ' s дома Кейдж.
   Примечание: Это увеличивает самка ' s знакомство с тестирования камеры, а также предоставляет мужчин сексуально стимулирования обонятельные спаривания сигналы, которые были распространены самка в ответ на лечение эстрадиола.
5. Слегка анестезировать животных до вставки зонда изофлюрановая или другой летучих анестетика в камеру всасывание.
6. Удалить окклюзионной obdurator из канюли руководство и вставлять электрод углеродного волокна или ферментативный зонд через вал руководство.
7. После введения зонда, поместите животное в испытательной камере.
   Примечание: Эта лаборатория использует 10-Гал стекла аквариум (24,5 x 48,9 x 29,4 см), но круглых камерах равной площади может также использоваться.
8. Начать запись видео и время locked Амперометрическое сигнала в коммерчески доступное программное обеспечение программы, подробно описаны в другом ¹⁵.
9. Подключите датчик к системе записи: потенцио через электрически экранированного кабеля и электрические шарнирного соединения. Стабилизировать подключение датчика путем завинчивания ПИН насадку на головы горе. Укрепление соединения с помощью лаборатории фильм при необходимости.
   Примечание: Настраиваемый соединитель необходимо придавать углеродного волокна электрода и электрод сравнения потенцио, в то время как ферментативные глутамата датчики могут быть непосредственно подключены к потенцио.
10. Позволяют датчика, чтобы сбалансировать в мозге до экспериментального тестирования.
    Примечание: Уравновешивания раз различаются в зависимости от датчика записи (например, ферментативные сенсоры требуют уравновешивания 2-4 ч, в то время как углерод волокна электроды требуют только около 30 мин). Если оба вида датчиков имплантируются, сбалансировать дольше ферментативные датчик.
11. После уравновешивания датчик, ввести мужчина стимул в испытательной камере.
12. После первого горе с полового члена вставки (называют intromission) стимул самец, продолжить запись для дополнительных 10-30 мин, в зависимости от целей экспериментальной.
13. После поведенческое тестирование, отключите самка ' Датчик ф.
14. Удалить оба хомяков из испытательной камеры. Удаление постельные принадлежности и чистой камере с помощью 70% этанол.
    Примечание: Из-за краткое уравновешивания, необходимых для записи углеродного волокна, шаги 2.3-2.14 может быть повторен для тестирования нескольких животных в тот же день. В противоположность этому, потому что ферментативные сенсоры требуют приблизительно 4 ч уравновешивания, тест только одно животное в день, чтобы ограничить возможные вариации между предметом из-за различий в животных ' суточного времени на тестирование.

3. Жертвы и перфузии

1. после завершения периода тестирования, глубоко анестезировать женского испытуемого с euthanizing агента (например, эта лаборатория использует внутрибрюшинного введения 0,2 мл раствора фенитоин и Пентобарбитал) .
2. Transcardially perfuse животное с 25 мм PBS, рН 7,6, чтобы удалить все циркулирующей крови, после 20 мин фиксации с помощью параформальдегида 4%-PBS.
3. Удаление мозга и postfix в ~ 30 мл параформальдегида 4% раствора в 50-мл Конические трубки на ночь.
   1. Магазин мозга в 10% раствор сахарозы PBS до готовности серийный секции.
      Примечание: Мозг может храниться до 2-х недель, с загрузок изменений раствор сахарозы, чтобы избежать потенциал роста загрязнений.
4. Серийный секции мозга в 40 мкм ломтиками через имплантированного регион с либо замораживания микротома или криостата как описано ¹⁹.
5. Подключить фрагментов поочередно на коммерчески доступных слайды, клей покрытием (или увидеть ²⁰ сделать). Дайте высохнуть, по крайней мере на ночь.
6. Пятно слайды с количество кресил фиолетового красителя, ясно, и coverslip как описано ²⁰.
7. Изображения слайдов, используя яркие области микроскопии для подтверждения анатомические размещение датчика.

4. Поведенческие кодирование

1. мнение и комментировать видео с помощью бесплатно коммерчески загружаемое программное обеспечение (см. Таблицу материалы) в медленное движение, чтобы точно кодекса поведения к морю времени сигнал Амперометрическое.
   Примечание: Для использования MATLAB код в анализе (см ниже ), аннотировать Начало и конец каждого из самка ' s и мужской ' s поведение.
   1. StartLordosis заметки в кадре, когда самка инициирует dorsoflexion ее обратно и дефектов ее хвоста вверх. Заметки endLordosis, когда самка завершает эту позу, которая часто происходит, когда самка выравнивала в другое место в испытательной камере.
   2. Аннотации startAI, когда самка в позе лордоз и самец движется его морда направлении самка ' s аногенитальной области региона, где может возникнуть нюхает, лизать или nuzzling ее промежности региона. Комментировать endAI когда самец удаляет его морду от близости к самка ' s аногенитальной области.
   3. Аннотации startMount, когда самец подходы и помещает его передними лапами на женщину в позе монтажа, независимо от ориентации попытки монтирования (например, стороны, Кострец).
   4. Аннотации startIntromission, когда успешный засовывая получает навесные мужского полового члена доступ к самка ' влагалище ф.
      Примечание: Intromission поведенчески отличается от навесные толкая, что происходит до intromission, как самец заметно тянет его верхних конечностей к его телу, направления его таз вперед и кудри его хвоста вверх, указывающее проникновения (см < сильный класс = «xfig» > рисунок 4 C).
      1. , Когда это применимо, аннотировать эякуляции.
         Примечание: В конце спаривания Бута и в связи с успешным intromission, мужчина будет эякулята. Хотя один не может визуализировать фактических выбросов, мужской хомяков имеют характерный ступая движение с их задних ног во время intromission ²¹, таким образом комментировать эякуляции при наступлении движения ног.
   5. Аннотации endIntromission и endMount одновременно в кадре, когда мужчина снял его передние две лапы и таким образом, не имеет контакта с женщиной. Из-за частых неспособности визуализировать его вывода, синхронный код эти два поведения, чтобы позволить для согласованности и надежности всей спаривания приступы.
      Примечание: Спаривания схватки следующим успешным эякуляции или когда женщина ломает лордоз осанки, после, по крайней мере один Маунт.

5. Пример анализа данных

Примечание: использование-потенциал углеродного волокна и ферментативные записей для допаминаND глутамата, соответственно, обеспечивает возможность измерения тоник и фазовые модели электрохимического релиз. Эта лаборатория использует свободный, коммерческих приобретение системы и программное обеспечение для записи и преобразования записаны сигналы от аналоговой к цифровой (смещения 0.600 V, частота дискретизации = 1 Гц).

1. 1. Описание примера данных анализа протокола хотя другие программы могут быть использованы, количественно тоник и фазовые (временных) изменения в записанные электрохимических сигналов с использованием MATLAB.
      1. Для представленных данных, вычисления сигнала тоник, с использованием движущихся средний фильтр 50 пунктов. Только для переходных нормализованное представление сигнала была рассчитана путем вычитания тоник сигнал от исходных данных. При определении фазовые пиков, существуют различные варианты алгоритма (например, маркировка вершины как изменения в более чем 1 сигнал SD выше среднего).
      2. Определения местоположения этих пиков, т.е., локальные максимумы, от нормализованной сигнала с использованием MATLAB функция peakfinder с амплитудой минимальный пик установить Среднее квадратическое сигнала. Местоположение пики, обнаружено от сигнал нормализованные был использован для извлечения амплитуда из каждого пика. Способность обнаруживать пики позволяет для идентификации любого к морю время поведения, которые могут быть совпало с, или вождения относительной пик в нейрохимических расследуется.
   2. Сегмент обработанных данных в соответствии с поведенческой аннотации (см. шаг 3), студент ' s t-тест был использован для оценки различий в уровень нейромедиатора тоник и возникновение транзиентов, амплитуда переходные процессы при предварительно спаривания лордоз бой против лордоз во время спаривания приступы. Для измерения изменений в тоник модели электрохимического релиз, точек данных, происходящих во время лордоз положение непосредственно перед спаривания схватки (то есть, предварительно спаривания схватки лордоз) были по сравнению с точки данных во время спаривания Бут сеанс с использованием t-test.
2. Подготовка исходных данных для анализа протокола описаны данные
   Примечание: как отмечалось, хотя другие программы или анализы могут быть одинаково жизнеспособными, чтобы использовать MATLAB код, описанных выше, необработанные данные должны быть подготовлены следующим образом:
   1. Экспорт файлов аннотации и напряжения. Для этого, под ' файл ' вкладку, выберите ' экспорт ' функции и выберите ' аннотации ' вкладку, чтобы сохранить примечания. Под ' файл ' вкладку, выберите ' экспорт ' функции и выберите " TSV ' вкладку, чтобы сохранить измерения напряжения как файл расширения TSV.
   2. Открыть каждый файл с помощью программы электронных таблиц и сохранить как ' xls/xlsx ' чтобы сделать совместимым с MATLAB файлы.
      Примечание: Для ' Аннотация ' файла, есть дополнительные аннотации, которые необходимо вручную добавить после экспорта в программу электронных таблиц, чтобы диктовать начала и окончания обоих предварительно спаривания схватки лордоз (помечен как PreMBlordorsis ) и спаривания схватки, таким образом, чтобы эти моменты времени может сравниться непосредственно, как указано в шаге 5.1.2.
   3. Аннотации начало предварительно спаривания схватки лордоз (startPreMBlordosis) в то же время, как лордоз поведение начинает (startLordosis), который также включает подключить поведение, а также в начале нового спаривания схватки если самка остается в позе лордоз.
   4. Аннотации в конце предварительно спаривания схватки лордоз (endPreMBlordosis), когда первый смонтировать начинается.
   5. Заметки начала спаривания схватки (startMB) в то же время endPreMBlordosis, как это означает начало спаривания схватки.
   6. Аннотации к концу спаривания схватки (endMB) в любом конце смонтировать который включает эякуляции (см. шаг 4.1.4.1), или после самка ' s прекращение лордоз осанки (endLordosis).

Результаты

С использованием электрохимических и поведенческих кодирования методологии, описанной выше, эта лаборатория начал характеризуют тоник и фазовые колебания допамина и глутамата во время записи в естественных условиях сексуального поведения. Благодаря височно-точно этой методологии мы можем более точно характеризуют синапсах во время сексуального поведения; а также приписать соответствующие изменения тоник конкретные изменения в структуре выпуска во время спаривания приступы и соотв...

Обсуждение

Хотя сравнительно простой, некоторые проблемы могут возникнуть при использовании этой техники. Во-первых, должна быть точной стереотаксического размещение зондов: в отличие от микродиализом, что образцы широкого радиуса внеклеточных среды вокруг зонд, эта техника позволяет только измерение нейромедиатора, который вступает в непосредственный контакт с зондом. Во-вторых в случае записи углеродного волокна, из-за небольшой ширины волокна, может произойти обрыв, и зонд должен быть вставлен с преднамеренного ухода. В случае г...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Нембутал	Оук Фармасьютикалз Инк.	76478-501-50	Пентобарбитал натрия для инъекций, USP. В этой лаборатории используется 8,5 мг/100 г массы тела, вводимые внутриперотинально.
Анальгетик Loxicom	Лаборатории Норбрука	6451603670	НПВП противовоспалительный и анальгетик используется для послеоперационного обезболивания. Дженерик: мелоксикам.
Антибиотик Энрофлокс	Лаборатории Норбрука	5552915411	Антибиотик фторхинолонов для профилактики послеоперационных инфекций. Дженерик: Энрофлоксацин.
Beuthanasia-D	Merck Animal Health	00061047305	пентобарбитал натрия, фенитоин натрия средство для эвтаназии.
Костяные винты	Pinnacle Technologies, Inc.	8111-16	1/8" костяной винт (Pkg. of 16) используется для крепления тюбетейки к черепу.
Стоматологический акрил (Bosworth Duz-All)	Bosworth	166261C	Самоотверждающийся стоматологический акрил используется в конструкции тюбетейки для крепления канюли и крепления головы к черепу.
Настройка аппаратного биосенсора	Компания Pinnacle Technologies, Inc.	8400-K2	Pinnacle предлагает полный комплект оборудования для новых пользователей нашей привязной биосенсорной системы для крыс. Комплекты включают в себя коммутатор, предусилитель и систему кондиционирования и сбора данных
Base video computer package	Pinnacle Technologies, Inc.	9000-K1	В комплект поставки базового компьютера входит предварительно настроенный компьютер с большим объемом жесткого диска, монитор высокой четкости, клавиатура и мышь, источник бесперебойного питания, а также все необходимые кабели.
Видеокамера EQ700 EverFocus  упаковка	Pinnacle Technologies, Inc.	9000-K10	Корпусная камера ночного видения EQ700 с независимым ИК-источником была получена в составе пакета видеокомпьютера Pinnacle. Также доступны варианты купольной камеры (9000-K9) и HD-камеры (9000-K11).
Программное обеспечение для приобретения сирении	Pinnacle Technologies, Inc.	Бесплатно--доступно для скачивания с pinnaclet.com	Sirenia  Система сбора данных предоставляет единую платформу для записи данных с любой аппаратной системы Pinnacle. Программное обеспечение имеет синхронизацию всех потоков данных, настраиваемые пользователем параметры, консолидацию данных и несколько вариантов экспорта. Кроме того, программное обеспечение включает в себя базовые модули обзора и анализа для регистрации с помощью биосенсоров. Сирения  Предоставляет бесплатное программное обеспечение LL-in-one, которое идеально подходит для сбора и анализа данных.
Привязанная крыса  in vitro  Калибровочный комплект	Pinnacle Technologies, Inc.	7000-K2-T-BAS	Для того, чтобы связать текущие изменения, измеренные биосенсором, с фактическими изменениями концентрации аналита, необходимо откалибровать биосенсор перед имплантацией животному. Процесс также подтверждает целостность и селективность датчиков. Калибровочный набор включает в себя стакан с оболочкой объемом 20 мл (#7058), магнитную мешалку размером 1/2 на 1/8 дюйма (#7059), прямоугольный зажим (#7056), 2-контактный однорегулирующий зажим (#7055), 4-канальный калибровочный предусилитель (#7053) и калибровочный держатель (#7051).
Тарелка для перемешивания	Corning	6795-410D	Corning, 5" x 7", 120 В переменного тока, используется для вращения магнитной мешалки в стакане с оболочкой во время калибровки биосенсоров глутамата in vitro.
Водяная баня, способная к замкнутому контуру циркуляции	PolyScience	8006A11B	PolyScience 8006A11B 6L Стандартная цифровая циркуляционная баня с подогревом, водяная баня 120 В переменного тока была использована с пластиковой трубкой для нагрева стакана с рубашкой до физиологической температуры.
Датчик из углеродного волокна с крысиными канюлями BASi	Pinnacle Technology, Inc.	7002-CFS	Электрод из углеродного волокна, используемый для регистрации нейротрансмиссии дофамина.
Ag/AgCl электрод сравнения	Pinnacle Technology, Inc.	7065	Необходим для записи из углеродного волокна.
Биосенсоры глутамата	Компания Pinnacle Technology, Inc.	7001	Ферментативный биосенсорный зонд, используемый для регистрации глутаматергической нейротрансмиссии.
Канюли для направляющих BASi	Pinnacle Technologies, Inc.	7030	Направляющие канюли имплантируются в интересующую область мозга для направляющего зонда.
Канюльный пластиковый головной убор BASi для крыс	Компания Pinnacle Technologies, Inc.	7011	Наголовное крепление стабилизирует зонд и присоединяется к потенциостату.