Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

AFM и микрореологию в ячейке желток Zebrafish эмбриона

8.2K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/56224

⸱

29 ноября 2017 г.

 ,  ,  ,  ,  , 
1Instituto de Biología Molecular de Barcelona, Consejo Superior de Investigaciones Científicas, 2Institute for Bioengineering of Catalonia, Universitat de Barcelona and CIBER Enfermedades Respiratorias

В этой статье

Краткое содержание

Отсутствие инструментов для измерения свойств материала и растягивающих параметров в vivo предотвращает проверку их роли в процессе разработки. Мы использовали атомно-силовой микроскопии (АСМ) и наночастиц отслеживание для количественного определения механических функций на cell желток нетронутыми zebrafish эмбриона во время epiboly. Эти методы являются надежными и широко применимые, избегая интрузивных мер.

Аннотация

Изучение факторов, которые направляют пространственно временной организации развиваются тканях является одной из основных целей в изучении развития. Различные предложения утверждают, что были важный вклад в понимание механических свойств клеток и тканей в их пространственно-временных Организации в различных процессах развития и морфогенетических. Однако из-за отсутствия надежных и доступных инструментов для измерения свойств материала и растягивающих параметров в естественных условиях, проверка эти гипотезы был сложной. Здесь мы представляем методы, используя атомно-силовой микроскопии (АСМ) и частица отслеживания с целью количественного определения механических свойств ячейки желток нетронутыми zebrafish эмбриона во время epiboly. Epiboly является ранних сохранившихся процесс развития которого исследование способствует прозрачности эмбриона. Эти методы являются простым в реализации, надежный и широко применимым, поскольку они преодолеть интрузивных мер, которые могут повлиять на ткани механика. Простая стратегия применяется для монтажа образцов, AFM записи и наночастиц инъекции и отслеживания. Этот подход делает эти методы легко адаптируется для других развития раз или организмов.

Введение

Физические принципы, лежащие в основе биомеханических контроля морфогенетических процессов являются во многом неопределенными. Хотя биомеханических исследований на молекулярном и клеточном уровне собирают значительный импульс, исследованию биомеханических параметров на уровне ткани/организм находится в зачаточном состоянии. Гидродинамические регрессии1 или видео силу микроскопии2 позволяют исследователям различать активные и пассивные силы, во время лазерной микрохирургии3или менее навязчивым атомно-силовой микроскопии (АСМ) диссоциированных клетки4 или в естественных условиях 5 или наночастиц микрореологию6 позволяют в преддверии механических свойств ткани и ответы.

AFM является трехмерных топографических техника с высоким разрешением атомной, шероховатости поверхности и соблюдение от отклонения кантилевера советы после контакта поверхности исследуемого7. Различные методики, используя AFM были разработаны для изучения свойств поверхности, включая измерения трения, силы сцепления и вязкоупругие свойства различных материалов. Недавно AFM стала мощным инструментом для получения информации о механических свойствах биологических образцов. В частности AFM неинвазивно можно извлечь модуль сдвига комплекс из единичных клеток путем применения колебательных отступы с микро Совет придает консольные известных изгиб постоянной8. Это позволяет нам выводить результирующие силы. Тем не менее, АСМ не является уникальным и разные методики позволяют извлечение данных реологических и механические свойства из отдельных клеток (например, микропипеткой стремление9магнитные скручивания цитометрии (MTC)10, или Одноосное растяжение Тестирование11).

Тем не менее применение этих новых методологий для сложных морфогенетических процессов не проста. Основные проблемы при определении механических свойств эмбриональных тканей являются малые (мкм до мм), мягкие (в 102 - 10-4 ПА диапазона) и вязко упругие (приводящее к возникновению явлений время зависимых) характер материала12. Поэтому важно адаптировать методы, используемые для определения механических свойств (жесткость, вязкость, адгезия) в конкретном случае эмбрионы и развивающихся организмов. Два важных вопросов необходимо учитывать при анализе реологических подходы к изучению развития: чтобы избежать навязчивой вмешательства и обеспечить доступность. В этом случае микропипеткой аспирации, MTC и испытания на растяжение выставлять ограничения. В первом случае высокой деформации, что страдает ячейки могут изменить его физиологические и механические свойства9. Во втором случае необходимо твердо придерживаться экспериментальной ткани к подложке для обеспечения, что подчеркивает применяется деформироваться цитоскелета локально предусмотреть также воздействие на состояние активации клеток и, следовательно, их механические характеристики10 . Последний, Одноосное растяжение подходов ограничиваются геометрии развивающихся организмов и доступность11.

AFM, кажется, быть лучше подходят для изучения процессов развития, как изучение биологических образцов позволяет непосредственно в их естественной среде без каких-либо обременительных пробоподготовки. Кроме того как диссоциации эмбриональных тканей как правило, трудно, уменьшение размера АСМ зондов обеспечивает высокую степень универсальности без ограничения в выборе типа среднего (водный или безводным), температура образца или химического состав выборки. AFM достаточно универсален, чтобы применяться в больших доменах и времени весы и был нанят для извлечения свойств материала тканей в различные этапы развития или физиологических условиях. Всей родной тканей такие как артерий13 или кости14 были изучены с точки зрения топографических и в некоторых случаях, как склеры, механические свойства были также проверено15. Топография была также изучена в живой эмбрионов, позволяя визуализации, например, клетки перегруппировки в ходе морфогенеза в Xenopus16. Последние, всеобъемлющие образца подготовка протоколов были разработаны для определения механических параметров в ходе различных процессов развития. Наноиндентирование карты были созданы на родной незаписанных тканей секции для Чик эмбриональных пищеварительного тракта11; клей и механических свойств, извлекаемых для отдельных ячеек прародитель эктодермы, мезодермы и энтодермы изолированы от gastrulating zebrafish эмбриона4; жесткость измерений для Эпибласт и примитивных полоска на эксплантов от птичьего эмбрионов17; и собственный шаблон жесткость градиенты непосредственно определен в эмбриональных мозга Xenopus5.

Значительный качественный скачок для применения AFM для изучения развития эмбриона может исходить от приближается к простой доступной морфогенетических процессов. Данио рерио epiboly является важным и сохраняется событие, в котором различные ткани координировать в ограниченном пространстве сферических прямого расширения бластодермы в течение нескольких часов. В начале данио рерио epiboly (сферические этап) поверхностный слой клеток, обволакивающий слой (EVL), охватывает полусферических Кап бластомеров сосредоточены на животное полюс сидя на массивных желток-синцитиальный клеток эмбриона. Epiboly состоит из кортикального слоя растительного Уорд расширения EVL, глубокие клетки (DCs) бластодерма, и наружный слой клеток-синцитиальный желток (E-YSL) вокруг желтка. Epiboly концы с закрытием EVL и DCs на19,18,растительных полюса20. Как и где силы создаются во время epiboly, и как они соединены в глобальном масштабе не ясно еще1,21.

Здесь мы подробно описать как применять AFM заключить, что свойства пассивной механических тканей во время epiboly прогрессии в желтке данио рерио ячейки в естественных условиях. Сделать это, мы используем небольшие микросферы, придает AFM кантилеверы как зонды. Это позволяет поиск точных местной информации в пределах желток неоднородной поверхности клетки и учиться напряжённая градиентов и их динамику с течением времени. Альтернативные AFM подходы например, с использованием клин кантилеверы22, будет не визуализации локальных данных, который является достаточно точным. Клин технику, которая требует очень тщательного манипуляции навыки клеить клин больше, чем размер выборки в конце кантилевера, не хорошо подходит для исследования эмбриона (~ 2 раза больше, чем длина консольные) механика.

Моделирование и характеризующие вязкоупругие свойства клеток в качественном и количественном отношениях позволяет для более глубокого понимания их биомеханики. С биомеханической точки зрения важно, чтобы понять epiboly, а не только спрос знание корковых напряжения измерения и динамики, которые могут быть извлечены AFM; Таким образом, существует потребность в информации о биофизических свойствах ткани. Для получения этой информации, различных методов реологические свойства ячейки были разработаны с годами для характеристики различных типов клеток при различных физиологических условиях23. Они включают в себя AFM, MTC и Оптический пинцет (OT). Эти методы, однако, как было доказано недостаточно для анализа мезоскопических в масштабе эмбрионов или органов. В качестве альтернативы мы успешно адаптировались6 наночастиц отслеживания микрореологию в vivo реологических измерений. Этот метод анализирует броуновского перемещений отдельных частиц и выводит местных микромеханические свойства.

Вместе AFM и наночастиц микрореологию позволяют определение динамики корковых растягивающих и внутренних механических свойств желток во время epiboly. Эта информация полностью поддерживает модель, в котором анизотропной стресс развивается вследствие различий в ответе деформации EVL и желток цитоплазматических слой (коммунистической) к сужению изотропной actomyosin E-YSL коры имеет важное значение для направленного движения чистой EVL и epiboly прогрессии1.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Уход за животными все описанные ниже шаги протокол придерживаться наших институтов.

1. данио рерио культура

  1. Породы и поддерживать взрослых рыбок данио при стандартных условиях.
    Примечание: AB и TL дикого типа эмбрионы использовались для этого исследования.
  2. Собирать эмбрионов и выращивать их на 28,5 ° C в E3 зародыш среднего24. Этапе их по морфологии как описано19.

2. атомно-силовая микроскопия

  1. Вручную dechorionate устроили данио рерио эмбрионов (из разных возрастов согласно индивидуальных интересов). Удалите chorions с двумя тонкие и острые щипцы (см. Таблицу материалы).
    1. Сцепление хориона, используя один щипцами и сделать слеза в нем с другими щипцами. Затем держа хориона в регионе противоположно из слезы, нажмите эмбриона мягко через отверстие.
    2. Выполните dechorionation под рассечения стереомикроскопом с регулируемый диапазон увеличения между 50 X и 8 X.
  2. Гора эмбрионы для AFM
    1. Подготовить раствор 2% агарозы в среде эмбриона и заполнить чашку Петри 35-мм с этим. Пусть это закрепить. Сделайте небольшие отверстия 1,5 мм в диаметре (дважды размер эмбриона) и примерно 350 мкм глубина (зародыша вдвое) тонким пинцетом в постели агарозы.
    2. Эмбрионы в тычет в слоя агарозы и заверить, что они в месте, распространяя вокруг раствор 0,5% низкий плавления агарозы в зародыш среднего. Налейте это решение вокруг только эмбрионы для обеспечения их в отверстия.
    3. Прежде чем низкой температурой плавления агарозы затвердевает при комнатной температуре, поверните эмбрионов в таким образом, что интерес к быть исследован AFM столкнется регион вверх (Рисунок 1A).
  3. Изучить эмбрионов с AFM
    1. Найдите и изображения эмбрионов в чашке Петри занято 20 X цель в Перевернутый атомно-силового микроскопа (см. Таблицу материалы25) при комнатной температуре (23-24 ° C).
      Примечание: Эмбрионы хранятся живы погружен в зародыш среднего и прилагается к постели агарозы.
    2. Зонд желток клеточной поверхности литые эмбрионов, используя сферическая шарики полистироля 4,5 мкм в диаметре, придает консольные с константой номинального весной 0,01, заданные N/м. пик пик амплитуда консольные колебаний 5 мкм и его частотой 1 Гц.
    3. Сбор данных для каждого региона испытываться в разных позициях и несколько эмбрионов, как обычные, для усреднения данных.
      Примечание: Хорошей отправной точкой является зонд пять позиций, расположенных в середине и по углам квадрата 10 мкм x 10 мкм, контролируя консольные позицию с пьезо приводы XY AFM микроскопа. Изображений и сбора данных занимает около 20 мин за эмбриона. Запись данных в различных регионах поверхности клеток эмбриона желток, например, полюса растительный или различных регионов рядом EVL клетки поля (рис. 1B и 1 C), может быть сделано только путем использования различных образцов, ориентированной по-разному.
  4. Рассчитайте силы
    1. Измерить вертикальное смещение AFM консольные (z) с тензометрических датчиков сочетании пьезо приводы, и ее прогиб (d) с помощью фотодиода квадрант методом оптической рычаг с программным обеспечением управления микроскопа (см. Таблицу материалы 25).
    2. Наклон кривой d-z, полученные из данных, собранных из голой региона стекла coverslip используйте для калибровки корреляции между сигнал фотодиода и отклонения кантилевера (d).
      Примечание: Измеренная вертикальное смещение равно отклонения кантилевера и склон представляет собой отклонение чувствительности оптической рычаг26.
    3. Сделать вывод, что консольные весной константа (k) из тепловых колебаний как описано27.
    4. Как вычислить отступ образца (h):
      h = (z - zc) -(d - dот)          (1)
      Примечание: Здесь zc положение точки контакта и dпокинуть является смещение фотодиод.
    5. Вычислите силу (F) на консольные как:
      F = k · d (2)
  5. Вычислите напряженность коры с точки зрения жидкость шар модель, состоящая из эластичного слоя корковых напряжения Tc ограждающих вязкой жидкости. В этой модели для мелких углублений (по сравнению с размером эмбриона), силы увеличивается пропорционально28 4,как:
    F = 4π Tc[(Rb / Re) + 1)] h (3)
    Примечание: Здесь Rb представляет радиус шарик и Re представляет радиус эмбриона. Для zebrafish эмбриона как радиус эмбриона (400 мкм) на два порядка больше, чем из бисера (2,25 мкм), это уровнение можно аппроксимировать как:
    F = 4π Tc h (4)
    1. Вычислить напряженность силы отступ (F-h) кривых в каждом регионе клеток эмбриона желток для пяти различных точки измерения.
    2. Вычислите Tc для каждого F-h кривой, нелинейный монтаж наименьших квадратов. Для статистического анализа, корковые напряжение Tc вычисляется должны усредняться с различными F-h кривых.
  6. Измерить вязкоупругие свойства (реология) коры, применяя малой амплитуды (100 Нм) многочастотных колебаний во время AFM состоит из синусоидальных волн различных частот25.
    1. Вычисление эффективной комплексный модуль g*(ƒ) в частотной области от силы отступ кривых как:
      g * (f) = [F(f) / h(f)]- ifb (5)
      Здесь я это мнимая единица, и F(f) и (f) hспектров частот (f) силы и отступы. b это исправление для вязкой перетащить на консольные, извлеченные из колебаний, применяется на поверхности.
    2. Отдельные g*(ƒ) в действительную и мнимую части, как:
      g * (Ƒ) = g' (f) + ig'' (f)          (6)
      ет > g' (f) является упругости и мера упругая энергия хранится и восстановлены за цикл колебаний. g'' (f) является вязкой модуль, обеспечивающий dissipated энергии.
    3. Вычислить тангенс угла диэлектрических потерь, который обеспечивает индекс твердых-как (< 1) или жидкость как (> 1) поведение материала, как:
      g'' (f) / g' (f)          (7)
      Примечание: С этим типом измерения, его можно извлечь параметры индикации как вязкой и как эластичный исследуемого материала. Хотя b слегка зависит от расстояния к концу кантилевера на поверхности, учитывая очень низкие значения g´´ выставлены желток ячейки (см. ниже Рисунок 2D ), небольшие вариации в b имеют незначительное влияние в 29измерений.

3. частица отслеживания микрореологию

  1. Выполнять микроинъекции частиц в ячейку желток
    1. Изготовления на заказ микроиглы, используя горизонтальный микропипеткой съемник и капиллярной боросиликатное стекло (см. Таблицу материалы).
      1. Подготовить микроиглы, имеют наружный диаметр 1,00 мм, внутренний диаметр 0,58 мм и длиной 10 см, с помощью съемника параметров: давление: 500; Жара: 510; Тяга: 65; Скорость: 25; Время: 50.
    2. Подготовьте инъекции Петри пластины, создавая прямой отступ полос в агарозы 1% в зародыш среднего кровати, используя пользовательские сделал прессформы (см. Таблицу материалы).
      1. Переверните формы и разместить их на вершине жидкого агарозном геле и удалить формы после затвердевшим геля. Пипетка эмбрионы в пазах, сделанное плесень в агарозном под рассечения стереомикроскопом в 1.2 X увеличением.
        Примечание: В ширину и дизайн формы позволяют эмбрионов для самостоятельной выравнивания.
    3. Перед инъекцией почти полностью удалите средство для облегчения инъекции (поверхностное натяжение предотвращает Хорион эмбриона от прилипания к иглы при удалении после инъекции).
    4. Microinject флуоресцентные наночастиц (радиус = 100 Нм, смотрите Таблицу материалы) разводят в воде (1:1, 000) в части растительной клетки эмбриона желток (рис. 3A).
    5. Отрегулируйте микропипеткой с точностью микроманипуляторов и придать бисер с автоматической microinjector с давления и времени управления (см. Таблицу материалы). Значение давления между 10 и 20 psi.
    6. Перед инъекцией решение шарик, калибровки объем придать (0,5 nL) путем измерения размера капли выступил microinjector микрометром этап 1 x 0.01 мм (см. Таблицу материалов).
    7. Использовать масштаб 1.6 X в рассечения стереомикроскопом визуализировать эмбрионов во время инъекции, которые выполняются при комнатной температуре.
  2. Оценить поведение вязкоупругих желток путем записи термические флуктуации
    1. Dechorionate microinjected эмбрионов как в шаг 2.1 и вставлять их в 0,5% Температура плавления точки агарозы в решение средних эмбриона при 30 ° C. Впоследствии передавать их на стекло нижней плиты (см. Таблицу материалы) и ориентировать и подтолкнуть их к coverslip, когда агарозы еще жидкости.
      Примечание: Когда агарозы затвердевает при комнатной температуре, эмбрионы готовы к записи образа.
    2. Место эмбрионов, монтируется в нижней стекла на сцене конфокальный инвертированным микроскопом 2 ч после микроинъекции. Захват изображения наночастиц для 26 s на дискретизации 25 Гц с 63 X цель при комнатной температуре в Перевернутый конфокального микроскопа, используя стандартные коммерческие Микроскоп программного обеспечения (размер пикселя = 166 Нм, снимках каждые 40 мс).
    3. Вычислить положение частицы центроиды и определить их траекторий с течением времени с TrackMate плагин с открытым исходным кодом программное обеспечение ImageJ (рис. 3B).
    4. Расчета двумерных среднеквадратичной перемещения (MSD) каждой частицы с6,на заказ программного обеспечения30 , как:
      < Δr2 (τ) > = < [x(t + τ) - x(t)]2 + [y(t + τ) - y(t)]2>           (8)
      Примечание: Здесь t -затраченное время и время запаздывания. В чисто вязкие жидкости Урс увеличивается обратно с вязкость (ν) согласно Стокса-Эйнштейна отношения:
      < Δr2 (τ) > = 4kB Tτ/ 6πνa,          (9)
      где T — абсолютная температура.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Корковых напряжение измерения
Для каждой точки измерения, пять кривых сила смещение (F-z) были приобретены AFM, наращивает консольные 1 Гц с амплитудой пик пик 5 мкм (скорость = 10 мкм/s) до Максимальный отступ ~ 2 мкм. Эта процедура принимает менее чем 20 минут и не был затронут прогрессии epiboly. Каждое условие экспериментальной был испытан в по крайней мере 5 эмбрионов.

Кривых сила смещение, записанные на...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Здесь мы покажем, что свойства материала и некоторые биомеханические параметры данио рерио желток ячейки во время epiboly может быть легко оценены AFM и наночастиц микрореологию.

В то время как AFM был нанят для получения реологических характеристик клеток и тканей в физиологических условиях4,5,25,28, здесь мы разработали протокол для применения AFM нетронутыми разви...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что без финансовых интересов или другие конфликты интересов.

Благодарности

Мы благодарим Amayra Эрнандес-Вега и Филипп-Александр Пуй за участие в создании основы для этих протоколов. Мы также благодарим молекулярной визуализации платформы от IBMB-PCB, Xavier Эстебан и члены лаборатории для непрерывной поддержки. Сводной группы программа Женералитата Каталонии и DGI и Consolider грантов от министерства экономики и конкурентоспособности Испании наб и DN поддерживает эту работу.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Инвертированный оптический микроскопNikonTE2000Визуализация образца и АСМ кантилевер
Атомно-силовой микроскоп (АСМ)Изготовлен назаказ-можноиспользовать любую коммерческую АСМ
Инвертированный конфокальный микроскопZeissLSM780Сбор данных по нанореологии
Агароза D1 Low EEOConda8016.00Отливка эмбрионов
Сверхчистый LMP Agarose (с низкой плавкостью)Invitrogen16520-100Обеспечение эмбрионов Формы
для микроинъекций и трансплантации рыбок данио-рериоPrecision InstrumentsZ-MOLDSЛитье эмбрионов. На заказ с оригинальными размерами также могут быть использованы
щипцы Dumont 5FST11251-20диаметром 1,5 мм
Si3N4 консольNovascanPT. GSИзмерение эмбриона с помощью АСМ. Сферический наконечник: 4,5 и микро; m диаметр и k=0,01 Н/м
Флуоресцентные наночастицыLife TechnologiesFluoSpheres F8811,Дляотслеживания нанореологии
Съемник микропипетокSutter InstrumentsP-2000Изготовление специализированных микроигл
Боросиликатное капиллярное стеклоWarner InstrumentsG100TF-4Изготовление специализированных микроигл
МикроманипуляторNarishigeMN-153Манипулирование микропипеткой
МикроинъекторEppendorfFemtoJet ExpressКонтроль времени и давления инъекции
СтереомикроскопLeicaDFC365FXВизуализация эмбрионов во время инъекции
Программное обеспечение для анализаMathWorksMatlabАнализ данных АСМ и отслеживания частиц
Данио-рериоAB и TL дикого типа- Штаммы, используемые для сбора эмбрионов
Стеклянные донные пластиныMat TekP35G-0.170-14-CМонтаж эмбрионов для сбора данных нанореологии
Микрометр ступениFST29025-02Измерение объема инъекции
World

Ссылки

  1. Hernandez-Vega, A., et al. Polarized cortical tension drives zebrafish epiboly movements. EMBO J. 36, 25-41 (2017).
  2. Brodland, G. W., et al. Video force microscopy reveals the mechanics of ventral furrow invagination in Drosophila. Proc Natl Acad Sci U S A. 107, 22111-22116 (2010).
  3. Grill, S. W. Growing up is stressful: biophysical laws of morphogenesis. Curr Opin Genet Dev. 21, 647-652 (2011).
  4. Krieg, M., et al. Tensile forces govern germ-layer organization in zebrafish. Nat Cell Biol. 10, 429-436 (2008).
  5. Koser, D. E., et al. Mechanosensing is critical for axon growth in the developing brain. Nat Neurosci. 19, 1592-1598 (2016).
  6. Wirtz, D. Particle-tracking microrheology of living cells: principles and applications. Annu Rev Biophys. 38, 301-326 (2009).
  7. de Pablo, P. J., Carrión-Vázquez, M. Imaging Biological Samples with Atomic Force Microscopy. Cold Spring Harbor Protocols. 2014, 167-177 (2014).
  8. Roca-Cusachs, P., et al. Rheology of passive and adhesion-activated neutrophils probed by atomic force microscopy. Biophys J. 91, 3508-3518 (2006).
  9. Evans, E., Yeung, A. Apparent viscosity and cortical tension of blood granulocytes determined by micropipet aspiration. Biophys J. 56, 151-160 (1989).
  10. Fabry, B., et al. Time scale and other invariants of integrative mechanical behavior in living cells. Phys Rev E Stat Nonlin Soft Matter Phys. 68, 041914(2003).
  11. Kashef, J., Franz, C. M. Quantitative methods for analyzing cell-cell adhesion in development. Dev Biol. 401, 165-174 (2015).
  12. Chevalier, N. R., et al. Measuring the micromechanical properties of embryonic tissues. Methods. 94, 120-128 (2016).
  13. Reichlin, T., et al. Investigating native coronary artery endothelium in situ and in cell culture by scanning force microscopy. J Struct Biol. 152, 52-63 (2005).
  14. Rho, J. Y., Tsui, T. Y., Pharr, G. M. Elastic properties of osteon and trabecular bone measured by nanoindentation. J Biomech. 31, 21(1998).
  15. Grant, C. A., et al. Surface characterisation and biomechanical analysis of the sclera by atomic force microscopy. J Mech Behav Biomed Mat. 4, 535-540 (2011).
  16. Efremov, Y. M., et al. Atomic force microscopy of living and fixed Xenopus laevis embryos. Micron. 42, 840-852 (2011).
  17. Henkels, J., et al. Spatiotemporal Mechanical Variation Reveals Critical Role for Rho Kinase During Primitive Streak Morphogenesis. Ann Biomed Eng. 41, 421-432 (2013).
  18. Solnica-Krezel, L. Gastrulation in zebrafish -- all just about adhesion? Curr Opin Genet Dev. 16, 433-441 (2006).
  19. Kimmel, C. B., et al. Stages of embryonic development of the zebrafish. Dev Dyn. 203, 253-310 (1995).
  20. Rohde, L. A., Heisenberg, C. P. Zebrafish gastrulation: cell movements, signals, and mechanisms. Int Rev Cytol. 261, 159-192 (2007).
  21. Campinho, P., et al. Tension-oriented cell divisions limit anisotropic tissue tension in epithelial spreading during zebrafish epiboly. Nat Cell Biol. 15, 1405-1414 (2013).
  22. Fischer-Friedrich, E., et al. Quantification of surface tension and internal pressure generated by single mitotic cells. Sci Rep. 4, 6213(2014).
  23. Moeendarbary, E., Harris, A. R. Cell mechanics: principles, practices, and prospects. Wiley Interdiscip Rev Syst Biol Med. 6, 371-388 (2014).
  24. Westerfield, M. The Zebrafish Book: A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio). , University of Oregon Press. Eugene, OR. (2000).
  25. Alcaraz, J., et al. Microrheology of human lung epithelial cells measured by atomic force microscopy. Biophys J. 84, 2071-2079 (2003).
  26. Jorba, I., et al. Probing Micromechanical Properties of the Extracellular Matrix of Soft Tissues by Atomic Force Microscopy. J Cell Physiol. 232, 19-26 (2017).
  27. Hutter, J. L., Bechhoefer, J. Calibration of atomic-force microscope tips. Review of Scientific Instruments. 64, 1868-1873 (1993).
  28. Lomakina, E. B., et al. Rheological analysis and measurement of neutrophil indentation. Biophys J. 87, 4246-4258 (2004).
  29. Alcaraz, J., et al. Correction of Microrheological Measurements of Soft Samples with Atomic Force Microscopy for the Hydrodynamic Drag on the Cantilever. Langmuir. 18, 716-721 (2002).
  30. Daniels, B. R., Masi, B. C., Wirtz, D. Probing single-cell micromechanics in vivo: the microrheology of C. elegans developing embryos. Biophys J. 90, 4712-4719 (2006).
  31. Kalwarczyk, T., et al. Comparative analysis of viscosity of complex liquids and cytoplasm of mammalian cells at the nanoscale. Nano Lett. 11, 2157-2163 (2011).
  32. Soroldoni, D., et al. Genetic oscillations. A Doppler effect in embryonic pattern formation. Science. 345, 222-225 (2014).
  33. He, B., et al. Apical constriction drives tissue-scale hydrodynamic flow to mediate cell elongation. Nature. 508, 392-396 (2014).
  34. Johansen, P. L., et al. Optical micromanipulation of nanoparticles and cells inside living zebrafish. Nat Commun. 7, 10974(2016).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

атомно-силовая микроскопияэпиболиямеханические свойстватрекинг частицконфокальная микроскопияинъекция наночастициндентационный анализ сил
AFM и микрореологию в ячейке желток Zebrafish эмбриона
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.