Метод для получения последовательного ультратонких разделы микроорганизмов в просвечивающей электронной микроскопии

Masashi Yamaguchi; Hiroji Chibana

doi:10.3791/56235

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Метод для получения последовательного ультратонких разделы микроорганизмов в просвечивающей электронной микроскопии

14.6K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/56235

⸱

17 января 2018 г.

Masashi Yamaguchi¹ , Hiroji Chibana¹

¹Medical Mycology Research Center, Chiba University

В этой статье

Краткое содержание

Это исследование представляет надежный и простой процедуры получения последовательного ультратонких секции микроорганизмов без дорогостоящего оборудования в просвечивающей электронной микроскопии.

Аннотация

Наблюдения клеток и клеточных компонентов в трех измерениях с высоким увеличением в просвечивающей электронной микроскопии требует подготовки серийный ультратонких секции образца. Хотя подготовка серийный ультратонких секции считается очень сложно, это довольно легко, если используется правильный метод. В этой статье мы покажем пошаговые процедуры для безопасного получения последовательного ультратонких разделы микроорганизмов. Ключевые моменты этого метода являются: 1) чтобы использовать большую часть образца и отрегулировать краю образца поверхности и нож, так что они параллельны друг другу; 2) для резки серийный секции в группах и избежать трудностей в отделять разделы, используя пару пряди волос при извлечении группа последовательных секций на щели сетки; 3) использовать петлю раздел Холдинг и избегать смешивания порядок групп разделов; 4) чтобы использовать поверхность водоподъёмного цикл и убедитесь, что разделы располагаются на вершине воды и что они touch сетки во-первых, чтобы поместить их в нужное положение на сетках; 5) использовать поддержку фильма на алюминиевой стойке и сделать его легче восстановить разделы сетки и избежать складок фильма поддержки; и 6) использовать трубу окрашивание и избежать случайного нарушения поддержки фильмов с помощью пинцета. Этот новый метод позволяет получить серийный ультратонких разделы без затруднений. Этот метод делает возможным для анализа структуры клетки микроорганизмов с высоким разрешением в формате 3D, который не может быть достигнуто с помощью автоматического сбора ленты ultramicrotome метода и последовательный блок лицо или сфокусированные ионные пучка сканирующая электронная микроскопия.

Введение

Надлежащего последовательного ультратонких секущей техника является необходимым для изучения клеток и клеточных компонентов трехмерно на микроскопическом уровне электрона. Мы изучили динамику шпинделя полюс тела в клеточный цикл дрожжевых клеток и выявили морфологические изменения их ультраструктуру во время дублирования¹^,²^,³^, и клеточный цикл⁴^,⁵. В 2006, мы придумали новое слово «structome» путем объединения «структура» и '-ome' и определил его как «количественные и трехмерных структурная информация всей ....