Моноциты являются важными посредниками arteriogenesis в контексте болезнь периферических артерий. С помощью базальной мембраны как матрица и прижизненной микроскопии, этот протокол расследует Моноцит самонаведения и связанных с ними опухоли ангиогенеза после инъекции Моноцит в бедренной артерии лигирование мышиных модели.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Прижизненной микроскопии Моноцит самонаведения и связанных с опухоли ангиогенеза в мышиных модели болезнь периферических артерий
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Терапевтические цель для периферической артериальной болезни и ишемической болезни сердца является увеличить приток крови к ишемической районах, вызванные гемодинамики стенозом. Сосудистая хирургия является жизнеспособным вариантом в отдельных случаях, но для пациентов без показания для операции, такие как прогрессии для отдыха боль, ишемии нижних конечностей или крупных срывов для жизни и работы, существует несколько возможностей для смягчения их болезни. Клеточная терапия через Моноцит повышенной перфузии путем стимулирования обеспечения формирования является одним из нескольких неинвазивные вариантов.
Наша группа рассматривает arteriogenesis после трансплантации Моноцит в мышей, с использованием модели ишемии задних конечностей. Ранее мы продемонстрировали улучшение перфузии задних конечностей с использованием столбняка стимулирует сингенных Моноцит трансплантации. Помимо последствий для обеспечения формирования роста опухоли могут быть затронуты этой терапии. Расследовать эти эффекты, мы используем базальной мембраны как матричная модель мыши путем впрыскивать внеклеточного матрикса саркомы Engelbreth-холм-Рой в бочку мыши, после окклюзии бедренной артерии.
После исследования искусственных опухоли мы используем прижизненной микроскопии для изучения в vivo опухоли ангиогенеза и Моноцит самонаведения в залог артерий. Предыдущие исследования описал гистологическом Животные модели, которая предполагает последующий анализ в посмертный артефактов. Наш подход визуализирует Моноцит самонаведения районы обеспечение в режиме реального времени последовательностей, легко выполнить и исследует процесс arteriogenesis и опухоли ангиогенеза в естественных условиях.
Введение
Сердечно-сосудистые заболевания, в том числе ишемической болезни сердца или болезнь периферических артерий, являются наиболее распространенными причинами смерти во всем мире1. Клеточная терапия-это перспективный подход для лечения сердечно-сосудистых заболеваний, особенно для людей, которые не могут пройти хирургических вмешательств. Существует несколько подходов для использования ячеек или их выделяется веществ как терапевтическое средство2,3, с учетом общей цели улучшения перфузии и поддерживать функции ишемического и underperfused ткани. Одна попытка достичь этой цели – улучшить arteriogenesis, который стимулирует развитие залога артерий. Моноциты являются важным ячейки тип, связанный с обеспечение. Наша группа была сосредоточена на изучение последствий моноцитов в области воспаления4,5, в частности с помощью модели ишемии задних конечностей вызывают ишемию и последующего воспаление6. Моноциты дома в области воспаления и вызвать сложные системные ответы, которые приводят к развитию обеспечение7.
С использованием прижизненной микроскопии мы можем изучить поведение этих клеток в естественных условиях и наблюдать самонаведения вводят моноцитов в области воспаления. Большинство бывших исследования только описывают посмертное анализов, которые держат недостатки, включая введение гистологические артефакты и большое количество животных, необходимых для подготовки. С нашим подходом мы можем исследовать иммунологических процессов и обеспечения формирования через жить изображений в нескольких точках времени.
Помимо разработки сопутствующего артерий в ишемических зонах моноцитов также влияют на рост опухоли. Для расследования этих процессов, мы придать базальной мембраны как матрица, извлеченные из Engelbreth-холм-Рой мыши саркомы, опухоли богаты белков внеклеточного матрикса8и анализировать с помощью прижизненной микроскопии. Эта матрица используется для экрана теста молекул для формирования сети эндотелиальных клеток или противораковых терапий путем ингибирования ангиогенных; в этом случае мы будем оценивать потенциал ангиогенных опухоли моноцитов клетки терапии9,10,11.
Цель настоящего Протокола заключается в демонстрации простой и эффективный способ изучения иммунологических процессов, вызванных ишемии в модели в естественных условиях . Мы можем создавать более реалистичные тестовой среде по сравнению с гистологическим реакционной посмертное мышечной ткани.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
наше исследование проводилось с разрешения государства, Landesverwaltungsamt Галле, Саксония-Анхальт согласно разделу 8 немецкого закона о защите животных. (§ 8, пункте 1 немецкого права для защиты животных от 18.05.2016 - BGBI. I S. 1206, 1313, § 31 TierSchVersV от 13.08.2013).
Примечание: для экспериментов здесь, были использованы 8-12 недельных самцов мышей BALB/c, и человека моноцитов крови доноров были использованы для визуализации моноциты через прижизненной микроскопии.
1. Подготовка клетки
Примечание: для изоляции моноцитов, смотрите наши предыдущие опубликованных видео на JoVE инструкции: " изоляции и внутривенных инъекций мышиных производные костного мозга Моноциты ", Вагнер и др. 4
Примечание: при работе с клетками все шаги должны быть стерильные, чтобы избежать загрязнения.
- Окрашивания клеток с 3,3 '-перхлорат Dioctadecyloxacarbocyanine
- Ресуспензируйте клеток в сыворотке крови бесплатно питательной среды с плотностью 1 х 10 6 клеток/мл.
Примечание: Только сыворотка бесплатно среднего позволяет эффективно окрашивание, поскольку липофильных краситель бы в противном случае уже захвачен липофильных компонентов сыворотки. - Добавить 5 мкл 1 мм 3,3 '-Dioctadecyloxacarbocyanine перхлората в диметилформамиде до 1 мл суспензии клеток и Ресуспензируйте тщательно.
- Инкубировать решение клеток при 37 ° C 20 мин
- Центрифуга клетки при 37 ° C и 500 g x 5 мин
- Выбить супернатант и Ресуспензируйте клетки с 37 ° C теплой плода теленка сыворотки дополнены среднего.
- Дважды повторить шаги 1.1.4 и 1.1.5.
- Подсчитать ячейки с формулой:
- Ресуспензируйте клетки с 150 мкл стерильного 0,9% раствор NaCl.
- Вставки ячейки в Вену хвост.
- Ресуспензируйте клеток в сыворотке крови бесплатно питательной среды с плотностью 1 х 10 6 клеток/мл.
2. Анестезия
- Ингаляционной анестезии
- изофлюрановая с помощью испарителем, используя 5% концентрации в закрытых бен под капотом химической безопасности испаряться.
- Осторожно мышь и положил его в мусорное ведро.
- Обрабатывать животного кожу задняя шеи после того, как она перестала двигаться.
- Внутрибрюшинного анестезии
Примечание: использование изофлюрановая анестезии, описанные в разделе Шаг 2.1, для выполнения внутрибрюшинной инъекции. С быстрого восстановления и короткого действия наркотического эффекта изофлюрановая анестезии это проще для обработки мыши и придать внутрибрюшинного анестезии.- Использовать раствор 2.4 кетамин (10%), 0,8 мл Ксилазина (2%) до 6,8 мл NaCl (0.9%) для внутрибрюшинной инъекции.
- Вес животного до применения анестезии.
Примечание: Формула для анестезии является:
- использовать инсулин шприц 1 мл с иглой 30 G для вставки решение в левой подбрюшье.
- Место мыши в его клетке и ждать наркотического эффекта.
Примечание: Наркотического эффекта обычно появляется в течение 5 мин, если инъекции был успешным. Правильной глубины анестезии может определяться отсутствие крышки рефлекс или реакция на мыс пинча, а также регулярные, контролируемых скорость дыхания.
3. Имплантация базальной мембраны как матрицы
Примечание: Этот метод используется нашей группой для изучения после инъекции Моноцит ангиогенез опухоли. В зависимости от экспериментов факторы роста могут добавляться к матрице базальной мембраны как. Мы исполняли бедренной артерии лигирование перед инъекцией опухоль на фланге мыши. Матрицы должны иметь температуре 4 ° C для инъекций. На этой температуре матрица является жидкость; гель затвердевает в тело при температуре тела (37 ° C). Для лучшей видимости подкожной матрицы вилка, брить кожу мыши в месте инъекции.
Примечание: необязательно: добавить 100 нг основные фибробластический фактор роста, 300 нг Сосудистый эндотелиальный фактор роста и 26 И.Ю гепарина в стерильных условиях к базальной мембраны как матрица.
- Загрузить 1 мл матрицы в 30 G инсулина шприц и магазин на льду до использования.
- Положите животное на стол и держать кожу мыши рядом с инъекции на фланге.
- Придать 500 мкл базальной мембраны как матрицы подкожно.
Примечание: По практическим соображениям необходимо придать базальной мембраны как матрица компактно в одном месте, чтобы избежать подкожной дисперсии. Это будет проще выбить искусственного опухоль из ткани после принесения в жертву мыши в конце эксперимента.
4. Хвост вен инъекций
Примечание: практика инъекции Вену хвост с раствором NaCl на подопытных животных до экспериментов. Если моноциты нельзя адекватно вводят в Вену хвост, будет существовать не системный эффект на обеспечение. В этом протоколе мы вводили 2,5 миллионов моноцитов. Попробуйте вводить не более чем 5 мкл/г веса.
- Использовать решение Моноцит, подготовленный под шаг 1.1.8, содержащие 2,5 миллионов моноцитов.
- Использовать иглой 30 G и шприц 1мл инсулин для инъекций.
- Тщательно обрабатывают мыши, удержать животное в фиксатор и убедитесь, что мышь не повредило и имеет достаточное пространство для дыхания.
- Поместить фиксатор на грелку, чтобы хвост можно связаться пластину.
- Идентифицировать хвост вен, которые расположены на боковой стороне хвоста.
- Превратить хвост 90 °, поэтому хвост вен появляется на верхней стороне хвоста.
- Лечить стороне инъекции перед инъекцией моноцитов.
- Пытаются придать Моноцит решение в плоский угол с скос иглы перед макияж
Примечание: Остановите инъекции, если появляется волдырь, поскольку это является признаком неудачных инъекций. Попытка снова процедура более проксимально. - Остановить кровотечение в месте инъекции, применяя мягкое давление на хвост для около 60-х.
- Наблюдать животных для 30 мин для мониторинга системных побочных эффектов и поместите курсор мыши в своей клетке, после того, как животное полностью выздоровел.
5. Прижизненной микроскопии
- Подготовка
- место наркотизированных мыши на грелку (37 ° C) для поддержания постоянной температуры и исправить лапы на месте с помощью скотча.
- Дезинфекции кожи в месте ноги или бочку, которая используется для микроскопии.
- Бритья региона интерес для лучшей управляемости и во избежание помех с волосами.
- Акциз кожу стерильным скальпель и тонкой щипцами в площадь 0,5 х 0,5 см.
Примечание: Важно сохранить региона интерес влажной; в противном случае будут подорваны качество изображений и ткани. Раствор NaCl может использоваться для смочите области. - Поместить ноги между двумя регулируемыми марок и положение покровным стеклом на вершине марки.
- Ткани мокрый и контактирует с стекло.
- InjECT 50 мкл родамин декстрана ретробульбарная в венозной системы для лучшей видимости судов.
- Начать микроскопии и отрегулировать положение ноги при необходимости.
- Прижизненной микроскопии параметры
- включите Микроскоп, компьютеров, электронных интерфейсов и лазеров.
- Включения обогрева инкубационного палаты и/или Отопление этап (плита/pad) и установите температуру до 37 ° C.
- Начать приобретение программного обеспечения. Если микроскоп оснащен резонансный сканер, выберите этот быстрый режим сканирования.
- Ждать до тех пор, пока температура достигает постоянного уровня (35-37 ° C)
Примечание: Стабильная температура имеет важное значение для: (a) мышь, которая под наркозом не может контролировать свою температуру тела и (b) избежать или по крайней мере минимизировать фокуса дрейфа. Это может занять 1 h до нескольких часов, в зависимости от окружающих условий (например, системы кондиционирования воздуха и количество источников тепла в комнате, в том числе людей). Если используются цели погружения, контактной зоны между объективом и Стекло покровное (или ткани) является типичным источником нестабильности. Отопление объектив с объективной нагреватель может помочь; Кроме того, настоятельно рекомендуется микроскопа с системой автофокусировки. - Выберите увеличение объектива с высокой цифрой диафрагмы, которая отвечает требованиям резолюции эксперимента (см. Примечание в конце этого раздела).
- Оптимизировать параметры микроскопа относительно усиления, настройки каналов, скорость сканирования, пикселей, глубина объем, размер шага и усреднения до размещения экспериментальных животных на сцене.
- Сканирования двунаправленно уменьшить время аэросъёмки.
- Место наркотизированных мышь на подогретую микроскопа, после того, как Микроскоп достиг стабильных условий и параметров были протестированы с помощью манекена.
- Принести региона интерес в матрице базальной мембраны как в фокус с помощью яркого света освещения и инспектировать кратко капилляров ультрафиолетового света с надлежащей фильтрации параметров для прикладной флуорофоров.
- Переключиться на режим; сканирования начать сканирование в режиме низкого разрешения 256 x 256 и повысить прибыль и мощность лазера до тех пор, пока сигнал наблюдается на мониторе.
- Внимание на структуре интерес. Увеличение до тех пор, пока все детали видны.
- Определить " начать " и " конец " позиции в осевом направлении.
- Остановить сканирование.
- Определить степпинг размер (например, 0,5 мкм) и количество фокальной плоскости (например, 10-20).
- Переключатель для окончательного пикселей резолюции (512 x 512 или 1024 x 1024) в зависимости от скорости движущихся внутриклеточных структур или клеток и выберите Проверка скорость (частота сканирования), который подходит лучше для движений. Двунаправленного сканирования рекомендуется ускорить приобретение стеков.
Примечание: Выберите самый высокий показатель сканирования сканирования, что дает достаточное качество изображения. Типичные точки сканеры обеспечивают скорости между 400 Гц и 1.4 кГц. Резонансные сканеры обеспечивают дополнительный 8 кГц или 12 кГц. Уменьшая количество линий в y направлении, можно увеличить скорость сканирования (типичные значения — 512 x 512, 512 x 256 или 512 x 200 пикселей резолюции). В зависимости от соотношения сигнал шум можно попытаться улучшить качество изображения путем добавления строки в среднем между 2 и 4. Как правило параметр 512 x 200 без усреднения результатов в приобретение/сроки 18 ms в двунаправленном режиме с 8 кГц резонансный сканер; с 512 x 200 и 4 x усреднения, он замедляет вплоть до 56 ms за кадр.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Прижизненной микроскопии для изучения опухоли и залога судов роста, вызванного моноцитов может помочь выявить новые аспекты в молекулярных механизмах по ангиогенез опухоли и arteriogenesis. Клетки должны быть подготовлены и вводили, тщательно с использованием действия протокола. Различия могут привести к вариации между одной экспериментов. Моноциты должны быть введены в венозной системы (рис. 1) для сохранения системных эффектов и избежание эмболии, которые м...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Метод, описанный здесь проливает свет на развитие залога артерий, поведение моноцитов в этих судов и процесс arteriogenesis. Шаги для применения этого протокола, легко учиться и может использоваться в других областях науки. Несмотря на эти преимущества есть некоторые недостатки. К примеру микроскопические оборудование требуется для выполнения описанных методов. Получение оборудования для одного эксперимента является неустойчивым, поэтому очень важно сотрудничать с другими учреждениями, чтобы поделиться устройства.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют, что они не имеют никаких финансовых интересов.
Благодарности
Эта работа была поддержана ELSE-Kröner-Stiftung и DFG (Deutsche Forschungsgemeinschaft, Немецкий исследовательский фонд) SFB 854 (Sonderforschungsbereich, совместный исследовательский центр). Особая благодарность Ханс-Хольгер Гёртнер, Audiovisuelles Medienzentrum, Otto-von-Guericke университет Магдебург, Магдебург, Германия, для технической поддержки.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 10% фетальная сыворотка теленка (FCS) | Sigma Aldrich, Гамбург, Германия | ||
| 1% пенициллин/стрептомицин | Sigma Aldrich, Гамбург, Германия | ||
| 1мл инсулинового шприца Omnifix -F | . Braun, Melsungen AG, Melsungen, Германия | ||
| 50 мл шприц | Fresenius Kabi AG, Бад Хомбург, Германия | Инъекционный шприц 50 мл с канюлей | |
| 6-луночные-ультра-низкоатташементные пластины | Corning Incorporated, Нью-Йорк, США | ||
| 8-12 недель, кобель, C57BL/6, BalbC мыши | Charles River, Зульцфельд, Германия | ||
| Клейкая лента | TESA SE, Гамбург, Германия | ||
| Программное обеспечение | для закупок Leica, Wetzlar, Deutschland | Leica Application Suite Advanced Fluorescence (LAS AF); Версия: 2.7.3.9723 | |
| Canules | B. Braun, Melsungen AG, Мельзунген, Германия | 29G, 30G | |
| Чашка для клеточных культур | Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Германия | ||
| Среда для клеточных культур | Изготовлена нашей группой с использованием отдельных компонентов | Medium199, 10% Сыворотка теленка плода, 1% Антибиотик (пенициллин/стрептомицин) | |
| Центрифуга | Beckman Coulter GmbH, Krefeld, Германия | Центрифуга Allegra X-15R Крем | |
| депиляции Veet | , Мангейм, Германия | ||
| DiO | Invitrogen Eugene, Орегон, США | ||
| Дезинфицирующее средство | Schü lke& Mayr GmbH, Нордерштедт, Германия | ||
| Одноразовый скальпель No10 | Безопасная бритва для перьев Co.Ltd, Осака, Япония | ||
| EDTA | Sigma Aldrich, Гамбург, Германия | ||
| Erlenmeyer flask | GVB, Херцогенрат, Германия | ||
| Этанол 70% | Otto Fischar GmbH und Co KG, Saarbrü cken, Германия | ||
| Фетальная сыворотка для теленка | Sigma Aldrich, Гамбург, Германия | ||
| Тонкие щипцы | Rubis, Stabio, Швейцария | ||
| Flurophor/Rhodamindextran | Thermo Fischer Scientific, Уолтем, Массачусетс США | Katalognummer: D-1819 | |
| Перчатки | Rö sner-Matby Meditrade GmbH, Киферсфельден, Германия | ||
| Грелка | Labotect GmbH, Gö Тинген, Германия | Hot Plate 062 | |
| Человеческий макрофаг-колониестимулирующий фактор | Sigma Aldrich, Гамбург, Германия | SRP3110 | |
| Гуманные фильтры для лейкоцитов | Инкубатор для сохранения | ||
| Ewald Innovationstechnik GmbH, Бад Ненндорф, Германия | |||
| Isoflurane | Baxter Deutschland GmbH, Унтершлейß heim, Германия | ||
| Кетамин (10%) | Ketavet, Pfizer Deutschland GmbH, Берлин, Германия | ||
| Пробирки для разделения лейкоцитов (пробирки с фильтром) | Bio one GmbH, Фрикенхаузен, Германия | ||
| Световой микроскоп | Carl Zeiss SMT GmbH, Оберкохен, Германия | Axiovert 40 C | |
| Среда для разделения лимфоцитов LSM1077 | GE Healthcare, Пашинг, Австрия | ||
| Matrigel | Becton, Dickinson and Company, Франклин Лейкс, Нью-Джерси, США | ||
| Medium M199 | PAA Laboratories GmbH, Пашинг, Австрия | ||
| Микробиологический верстак | Thermo Electron, LED GmbH, Лангензельбольд, Германия | Безопасное | |
| предметное стекло для микроскопа | Hera Carl Roth GmbH + Co. KG, Karlsruhe | Art. Nr. 1879 | |
| Подставка для микроскопа с инкубатором и нагревательным блоком | Leica DMI 6000, Pecon, Германия | ||
| Буфер для промывки моноцитов | Производится нашей группой с однокомпонентными | PBS, 0,5% BSA, 2mM EDTA | |
| Удерживатель мыши | Различные | ||
| многофотонные микроскопы | Leica, Wetzlar, Deutschland | Конфокальный микроскоп Leica SP5, Cameleon, когерентный | |
| NaCl (0,9%) | Berlin Chemie AG, Берлин, Германия | ||
| Счетная камера Neubauer | Paul Marienfeld GmbH und Co.KG, Lauda-Kö nigshofen, Германия | ||
| Objective | Leica, Wetzlar, Deutschland | Leica HC PL APO 10x/0.4 CS | |
| PBS | Life technologies GmbH, Дармштадт, Германия | ph 7,4 стерильный | |
| пенициллин/стрептомицин | Sigma Aldrich, Гамбург, Германия | ||
| Percoll | Производится нашей группой с отдельными компонентами | 90 % Percoll, 10% 1,5M NaCl, ρ= 1,064 г см-3 | |
| раствор Percoll GE | Healthcare, Bio-Science AB, Уппсала, Швеция | ||
| Пипетки | Eppendorf AG, Гамбург, Германия | 10&микро; L/100&микро; L/200&микро; L/1000&микро; | |
| L Пипетки серологические | Greiner Bio-One GmbH, Фрикенхаузен, Германия | Cellstar2мл, 5мл, 10мл | |
| Дозаторные головки | Eppendorf AG, Гамбург, Германия | ||
| Pipetus | Eppendorf AG, Гамбург, Германия | ||
| Полистирольная трубка | Cellstar, Greiner Bio-One GmbH, Фрикенхаузен, Германия | ||
| Scissor | Word Precision Instruments, Inc., Сарасота, США | ||
| Весы | Серия Mettler PM4800 Delta, Mettler-Toledo GmbH, Gieß ru, Германия | ||
| Аспирационная установка | Integra bioscience, Фернвальд, Германия | Vacusafe comfort | |
| Хирургические ножницы | Word Precision Instruments, Inc., Сарасота, США | ||
| Трипановый синий раствор 0,4 % | Sigma Aldrich, Гамбург, Германия | ||
| Трубки с колпачком | Greiner Bio-One GmbH, Фрикенхаузен, Германия | 15мл, 50мл Cellstar | |
| Xylazine (2 %) | Ceva Tiergesundheit GmbH, Dü Ссельдорф, Германия |
Ссылки
- World Health Organization. WHO | The top 10 causes of death. World Health Organization. , http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs310/en/. (2017).
- Volz, K. S., Miljan, E., Khoo, A., Cooke, J. P. Development of pluripotent stem cells for vascular therapy. Vascular pharmacology. 56 (5-6), 288-296 (2012).
- Henry, T. D., et al. The VIVA trial: Vascular endothelial growth factor in Ischemia for Vascular Angiogenesis. Circulation. 107 (10), 1359-1365 (2003).
- Wagner, M., et al. Isolation and intravenous injection of murine bone marrow derived monocytes. Journal of visualized experiments JoVE. (94), (2014).
- Herold, J., et al. Transplantation of monocytes: a novel strategy for in vivo augmentation of collateral vessel growth. Human gene therapy. 15 (1), 1-12 (2004).
- Ito, W. D., Arras, M., Scholz, D., Winkler, B., Htun, P., Schaper, W. Angiogenesis but not collateral growth is associated with ischemia after femoral artery occlusion. The American journal of physiology. 273 (3 Pt 2), H1255-H1265 (1997).
- Herold, J., et al. Tetanus toxoid-pulsed monocyte vaccination for augmentation of collateral vessel growth. Journal of the American Heart Association. 3 (2), e000611(2014).
- Matrigel Matrix. , https://www.corning.com/au/en/products/life-sciences/products/surfaces/matrigel-matrix.html (2017).
- Eubank, T. D., Galloway, M., Montague, C. M., Waldman, W. J., Marsh, C. B. M-CSF induces vascular endothelial growth factor production and angiogenic activity from human monocytes. Journal of immunology (Baltimore, Md. 1950). 171 (5), 2637-2643 (2003).
- Fridman, R., et al. Enhanced tumor growth of both primary and established human and murine tumor cells in athymic mice after coinjection with Matrigel. Journal of the National Cancer Institute. 83 (11), 769-774 (1991).
- Woodman, S. E., et al. Caveolin-1 knockout mice show an impaired angiogenic response to exogenous stimuli. The American journal of pathology. 162 (6), 2059-2068 (2003).
- Francke, A., Weinert, S., Strasser, R. H., Braun-Dullaeus, R. C., Herold, J. Transplantation of bone marrow derived monocytes: a novel approach for augmentation of arteriogenesis in a murine model of femoral artery ligation. American journal of translational research. 5 (2), 155-169 (2013).
- Houthuys, E., Movahedi, K., Baetselier, P., de Van Ginderachter, J. oA., Brouckaert, P. A method for the isolation and purification of mouse peripheral blood monocytes. J. Immunol. Methods. 359 (1-2), 1-10 (2010).
- Berthold, F. Isolation of human monocytes by Ficoll density gradient centrifugation. Blut. 43 (6), 367-371 (1981).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
