Вскрытие и подготовка корональных срез развития гипофиза мыши

Summary

Мы представляем протокол вскрыть гипофиза и подготовить гипофиза коронковой части из развивающихся мышей.

Abstract

Гипофиза или гипофиза является важным органом эндокринной секреции гормонов, необходимых для гомеостаза. Он состоит из двух желез с отдельным эмбриональное происхождение и функций — neurohypophysis и adenohypophysis. Развивающихся гипофиза мыши маленькие и тонкие с удлиненной овальной формы. Корональных разделе предпочтителен для отображения в adenohypophysis и neurohypophysis в один срез гипофиза мыши.

Целью настоящего Протокола является достижение надлежащего гипофиза корональных секции с архитектурами хорошо сохранившиеся ткани из развивающихся мышей. В этом протоколе мы подробно описывают, как анализировать и обрабатывать гипофиза правильно из развивающихся мышей. Во-первых мыши фиксируются transcardial перфузии формальдегида до вскрытия. Затем три различных рассечения методы применяются для получения нетронутыми гипофиза в зависимости от возраста мышей. Для плода мышей возрасте от новорожденных и эмбриональных дней (E) 17.5-18,5 до 4 дней, разделяются всей Селла регионов, включая клиновидной кости, железы и тройничного нервов. Для щенков возрасте послеродовой (P) 5-14 дней, гипофиза связано с тройничного нервов разделяются в целом. Для мышей более 3 недель гипофиза тщательно расчлененный бесплатно от окружающих тканей. Мы также отображать как внедрять гипофиза в надлежащей ориентации с помощью окружающих тканей как ориентиры для получения удовлетворяющих корональных секций. Эти методы полезны при анализе гистологические и развития функции гипофиза в разработке мышей.

Introduction

Гипофиза или гипофиза является важным органом эндокринной секреции гормонов, необходимых для гомеостаза^1,2. Анатомически гипофиз является '' два в одном '' структура, состоящая из neurohypophysis и adenohypophysis. Эти компоненты имеют разные эмбриональное происхождение и функции очень по-разному. Neurohypophysis является производным от нейронных эктодермы и выделяет окситоцина и антидиуретического гормона. Adenohypophysis происходит от Ратке в мешочек и несет ответственность за освобождение гормонов, в том числе гормон роста, пролактина, тиреотропный гормон, фолликулостимулирующего гормона, лютеинизирующего г....

Protocol

мышей C57BL/6 разводят в конкретных условиях возбудителя бесплатно. Всех животных экспериментальные методы в соответствии с руководящими принципами, утвержденными животное уход и Комитета по этике на второй военный медицинский университет.

1. рассечение из послеродового развития гипофиза

1. выполнения анестезии: состоится дробленый лед, чтобы побудить гипотермии новорожденных мышей (P0 - P5). Для мышей старше 5 дней возраста придать 5% уретана (30 мкл/г веса тела) внутрибрюшинно побудить анестезии. Оценка ответов на хвост/мыс щепотки. Только после того, как мышь не реагирует на раздражители вредных.
2. Обеспечения мыши в леж....

Results

Этот протокол предоставляет метод для того чтобы рассечь гипофиза из развивающихся мышей. Для новорожденных мыши, регионов всей Селла, содержащей гипофиза, тройничного нервов и под клиновидной кости были расчленены от основания черепа. Крошечные и деликатный гипофиза остались нетронутыми во время процесса (рис. 1A). Для мышей старше 5 дней, гипофиза, прилагается к боковой тройничного нервов затем были изолированы. Валового структура гипофиза, изолированы от P.......

Discussion

Для разработки мышиных pituitaries, он был технически трудно получить правильное корональных секции из-за их маленькие и хрупкие особенности и уникальные анатомические характеристики^6,8. Таким образом, некоторые исследовательские группы выбрал середине сагиттальной разделы для анализа морфологии гипофиза эмбрионов и новорожденных в^11,12. Хотя в середине сагиттальной части гипофиза способен также показаны .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
инструменты/оборудование
Хирургические ножницы-прямые	JinZhong	J21010	можно приобрести у других продавцов
Тонкие ножницы-стрейнгт	JinZhong	WA1010	можно приобрести у других продавцов
Тупые щипцы	JinZhong	JD1020	можно приобрести у других продавцов
Тонкие щипцы	Dumont	RS-5015	для выделения гипофиза
26G (0,45 мм) игла	HongDa		для транскардиальной перфузии
Шприц (1 мл)	BD	300841	можно приобрести у других производителей
Шприц (10 мл)	BD		можно приобрести у других производителей
Чашка 35 мм	Corning	430165	можно приобрести у других продавцов
Бумага для чистки линз	ShuangQuan		можно приобрести у других производителей
Анатомический микроскоп	OLYMPUS	SZX-ILLB2-200	можно приобрести у других производителей
Встраиваемая кассета	Thermo Fisher	22-272423	можно приобрести у других производителей
Система встраивания салфеток	KEDEE	KD-BM11	можно приобрести у других производителей
Микротом	Thermo Fisher	HM315R	можно приобрести у других производителей
Горки Superfrost-Plus	Thermo Fisher	22-037-246	можно приобрести у других производителей
Защитное стекло	Thermo Fisher	12-543	можно приобрести у других производителей
Флуоресцентный микроскоп	OLYMPUS	BH2-RFCA	можно приобрести у других
<производителей>Название	>Company	Номер в каталоге	Комментарии<
strong>Реагенты
Уретан	BBI	EB0448
NaCl	Sigma	S9625	для PBS
KCl	Sigma	P9541	для PBS
Na2HPO4.12H2O	Sigma	71650	для PBS
K2HPO4	Sigma	P2222	для PBS
NaNO2	Sigma	237213
гепарин натрия для инъекций	SPH	H31022051	для перфузии физиологического раствора
параформальдегида (PFA)	Sigma	P6148
Этанол	SCR	10009218
Ксилол	SCR	10023418
парафин	Thermo Fisher	8330
Гематоксилин	Sigma	H9627	для H& E окрашивание
Eosin Y	Sigma	E4009	for H& E окрашивание
кролика против гормона роста (GH)	Национальный гормон		для иммуноокрашивания
антител	Программа гипофиза
Кролик против мышей GFAP антитела	Sigma	G9269	для иммуноокрашивания
Козий антикролик IgG, HRP	Jackson	111-035-003	для иммуноокрашивания
TSA система	NEN Life Science Products	NEL700	для иммуноокрашивания
стрептавидин, Alexa Fluor 594	Thermo Fisher	S32356	для иммуноокрашивания
Anti-FITC Alexa Fluor 488	Thermo Fisher	A11090	для иммуноокрашивания