Методическая статья

Обработка тканей человека сердца к внеклеточного матрикса самостоятельной сборки Гидрогель для In Vitro и In Vivo приложений

DOI:

10.3791/56419

⸱

4 декабря 2017 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Charité - Universitätsmedizin Berlin, corporate member of Freie Universität Berlin, Humboldt-Universität zu Berlin, and Berlin Institute of Health, 2Berlin-Brandenburg Center for Regenerative Therapies (BCRT), 3German Center for Cardiovascular Research (DZHK), 4Deutsches Herzzentrum Berlin (DHZB), 5Department of Cardiovascular Surgery, Charité - Universitätsmedizin Berlin, corporate member of Freie Universität Berlin, Humboldt-Universität zu Berlin, and Berlin Institute of Health

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот протокол описывает полный decellularization человека миокарда при сохранении его компонентов внеклеточного матрикса. Дальнейшая обработка внеклеточная матрица результатов в производстве микрочастиц и цитопротективного самостоятельной сборки гидрогеля.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Бесклеточной внеклеточного матрикса препараты являются полезными для изучения взаимодействия клеток матрица и облегчения применения терапии регенерации клеток. Ряд коммерческих внеклеточного матрикса продукты доступны как гидрогели или мембраны, но они не обладают биологической активности тканей конкретных. Потому что decellularization перфузии обычно не возможно с человеческой ткани сердца, мы разработали процесс погружения 3-шаг decellularization. Человека миокарда ломтиками, приобретенных во время операции сначала лечатся буфера lysis бесплатный стиральный порошок hyperosmolar, следуют инкубации с ионной стиральный порошок, лаурилсульфат натрия, и процесс завершится, используя встроенные DNase деятельность плода бычьим сывороточным. Этот метод приводит к листы клеток сердечной внеклеточной матрицы с во многом сохранились фиброзной ткани архитектуры и биополимерные состав, были продемонстрированы предоставлять конкретные экологические сигналы сердца клеточных популяций и плюрипотентных стволовых клетки. Сердца внеклеточного матрикса листов может затем быть далее перерабатывается в тонкодисперсный порошок без дальнейшей химической модификации, или, через краткосрочные пепсин пищеварение, в самостоятельной сборки сердца внеклеточного матрикса гидрогеля с консервированные биологическую.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Внеклеточная матрица (ECM) обеспечивает не только структурной поддержки, но также имеет важное значение для биологических клеток и тканей функции1. В самом сердце ECM участвует в регуляции патофизиологические реакции например фиброз, воспаление, ангиогенез, cardiomyocyte сократительной функции и жизнеспособности и резидентов прогениторных клеток судьбы. В дополнение к его основных компонентов - волокнистые гликопротеинов, гликозаминогликанов и протеогликаны - он содержит целый ряд секретируемые факторов роста и цитокинов, мембранные везикулы, содержащие нуклеиновых кислот и белков2,3.

Недавно стало ясно, что бесклеточной ECM препараты не только бесценным для изучения взаимодействия клеток матрицы, но и для потенциальных терапевтических клеток-приложений на основе. В настоящее время широко признается важность обеспечения надлежащих условий для терапевтического клеточных продуктов или инженерии тканей. Были предприняты попытки объединить клеточных суспензий или активных соединений с определенными Биополимерное гидрогели4,5,6 или коктейлей белка выделяется клетками мышиных саркома (т.е. Matrigel, Geltrex) 7. Однако, бывший имеют ограниченные биологическую, последние являются проблематичными в процессах GMP-сорт, и оба не хватает биологическую ткань конкретных сердца ECM (СКВ)8,9,10, 11,12,13.

Decellularization миокарда ранее выполнялись перфузии всего сердца через коронарные сосудистую14,15. Хотя это возможно в сердцах животных, нетронутым человеческие сердца редко доступны. Таким образом процесс погружения, который позволяет для обработки образцов тканей, полученных в операционной комнате было оказано. Наши «3-шаг» протокол содержит 3 отдельных инкубации шаги, а именно лизиса, солюбилизация и удаления ДНК. Он дает человека миокарда ECM с во многом сохранились белка и Глюкозаминогликан состав16,17. Эти фрагменты СКВ позволяют в vitro исследования взаимодействий клеток матрица, но плохо подходят для потенциальных человека масштабе терапевтического применения. Производственный процесс был затем продлен до производства лиофилизированный СКВ микрочастицы или СКВ гидрогеля18.

Этот протокол позволяет для decellularization человека миокарда, полученные из хирургической образцов, сохраняя основные компоненты и их биологическая активность миокарда внеклеточного матрикса (ECM). Этот протокол рекомендуется, когда человеческие сердца ECM с сохранившихся биологическую ткань конкретных требуется для экспериментальных исследований взаимодействия клеток матрицы, или когда подходящей среды необходима для подходов, основанных на клетки миокарда регенерации. В принципе возможна также адаптировать этот протокол в условиях GMP-класса, так что использование обработанных СКВ должно быть возможным в будущем терапевтического применения.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Протокол исследования соответствует этические принципы, изложенные в Хельсинкской декларации и был одобрен Комитетом Совета и этики институциональный обзор Charité медицинского университета. Все пациенты условии написано, информированное согласие на использование ткани сердца для экспериментальных исследований.

1. Подготовка человека миокарда для разрезания

  1. Получения миокарда левого желудочка (размер варьируется в зависимости от вида операции) непосредственно из операционной комнате и транспорт в холодной PBS в стерильный контейнер.
  2. Удалите все жировой ткани с стерильным скальпель с лезвием № 10 в стерильных условиях.
  3. Нарезать кубиками примерно 1 x 1 x 1 см с помощью скальпеля миокарда.
  4. Поместите кубики в стерильных 50 мл трубки.
    Примечание: Чтобы приостановить, выполните шаг 1.5, в противном случае продолжите с шага 2.2. Избегайте повторного замораживания оттаивания циклов для предотвращения деградации белков и снижение качества ткани.
  5. Хранить пробирки, содержащие кубов в-80 ° C. Ткани могут храниться в течение нескольких месяцев.

2. Вырезание из кубов, миокарде ломтиками

  1. Возьмите трубки, содержащий подготовленный кубов из морозильника.
  2. Транспорт на льду для криостата.
  3. Выберите объект и камеры температуру до-15 ° C.
    Примечание: Нужной температуры имеет решающее значение для обеспечения идеальной секционирование.
  4. Холод пустой 50 мл трубки и марок в камере или на сухой лед.
  5. Добавьте слой (примерно 0,5 - 1,0 мл) cryosection среды на холодной штамп и пусть он заморозить до тех пор, пока это белые и твердые.
  6. Добавить второй слой cryosection среды и место в миокарде куб на этот слой.
  7. Убедитесь, что средство cryosection и миокарде полностью заморожены, прежде чем продолжить.
    Примечание: Когда среднего образца и cryosection не заморожен секционирование будет нарушением. Полностью заморожены cryosection среднего превращается из жидкости и прозрачной твердых, белый и непрозрачные. Миокарда кубики нужно по крайней мере 30 минут до 1 h полностью заморозить, если продолжение сразу от шага 1.4. Когда ткань заморожен должен не деформируются, когда коснулся/обрабатываются с помощью пинцета.
  8. Вставьте штамп с замороженных миокарда в держатель и затяните все винты.
  9. Отделка поверхности ткани, пока не получается даже секущей поверхности.
  10. Задайте, секционирование толщиной до 300 мкм.
  11. Раздел замороженных миокарда с автоматическое секционирование. Это гарантирует равномерное сократить разделы. Приблизительно 30-40 секций можно нарезанные из одного куба.
  12. Поместите каждый ломтик после разрезания слабо в помощи 50 мл трубки.
    Примечание: Не нажимайте ломтиками или пакет плотно. Около 40 фрагментов может поместиться в одну трубу.
  13. Закройте заполненных трубок и место на льду.
    Примечание: Чтобы приостановить идти на шаг 2.14, в противном случае продолжите с шага 3.2.
  14. Хранить фрагменты миокарда при температуре-80 ° C. Фрагменты могут храниться в течение нескольких месяцев.

3. decellularization кусочков миокарда человека

  1. Возьмите необходимое количество 50 мл пробирки, содержащие разделы миокарда из морозильника-80 ° C и транспорта на льду.
  2. Передача замороженных секции всех 50 мл трубки от шаг 3.1 в один стакан стерильные. Около 40 фрагментов добавляются в стакан за Тюбик 50 мл. Стакан должно быть три раза объем 50 мл пробирок; например, для decellularization один тюбик 50 мл используйте 150 мл стакан.
  3. Добавьте 50 мл раствора лизис (10 мм трис, 0.1% w/v ЭДТА, рН 7,4 в H2O) за 50 мл трубки с ломтиками миокарда.
  4. Встряхните миокарда ломтики в стерильных стакан на 100-150 об/мин, непрерывно в течение 2 ч при комнатной температуре.
  5. Процедите жидкость с кусочками ткани через стрейнер грубый. Передать новым стерильным стакан ткани кусочки с тупыми пинцет. Добавьте 50 мл 0,5% SDS в PBS на первоначальный 50 мл трубки кусочков миокарда (например, использование 100 мл SDS решение, когда два 50 мл трубки разделы миокарда в настоящее время decellularized).
  6. Встряхните непрерывно в течение 6 часов при 100-150 об/мин при комнатной температуре.
  7. Процедите жидкость с кусочками ткани через стрейнер грубый. Передать новым стерильным стакан ткани кусочки с тупыми пинцет и мыть 3 раза с 50 мл PBS 10 мин при встряхивании в 150 об/мин. Далее, мыть на ночь в PBS с 1% пенициллина/стрептомицина и 1% Нистатин (PBS-P/S-N) в 100-150 об/мин и 4 ° C при встряхивании.
    Примечание: Тщательного мытья важно, чтобы полностью удалить любые остаточные SDS. Оставшиеся следы SDS являются токсичными, когда ECM используется в сочетании с ячейками.
  8. Удаление моющий раствор и добавить 25 мл разогретую FBS (37 ° C) с 1% пенициллина/стрептомицина и 1% Нистатин decellularized ломтики на первоначальный 50 мл трубки кусочков миокарда.
  9. Инкубируйте 3 ч при 37 ° C. В этом шаге любые оставшиеся ДНК удаляется из матрицы благодаря внутренней DNase деятельности FBS.
  10. Ломтики передать новым стерильным стакан и мыть 3 раза с 50 мл PBS 10 мин при встряхивании в 150 об/мин.
    Примечание: ECM фрагменты могут храниться в PBS-P/S-N на 4 ° C на несколько дней. Однако рекомендуется приступить немедленно.

4. обработка Decellularized СКВ в порошок

  1. Место ECM Ломтики слабо в новой пластинкой стерильным 6-хорошо. Заморозить ECM-80 ° c и lyophilize за 2 дня в лиофилизатор.
    Примечание: более чем один срез могут быть размещены в колодец. Устройте ломтики для полностью покрывают поверхность хорошо. Перекрывающиеся фрагменты не влияет на последующие пульверизация успех.
  2. Для измельчения фрагментов ECM использование конкретных фрезерования трубки (см. Таблицу материалы) содержащих 1,4 мм керамический бисер. Свободно заполните трубы с лиофилизированные ECM с помощью стерильных тупым пинцета. Для получения оптимальных результатов рекомендуется общий вес ECM между 10-20 мг.
    Примечание: Если ECM слишком плотно упакованы в трубки фрезы пульверизация процесс будет отрицательно сказываться.
  3. Трубы оснастки замораживание в жидком азоте.
    ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ: жидкого азота является крайне низкая температура, носить соответствующую личной защиты.
  4. Вставьте замороженные трубы в фрезерный станок и распылить ECM.
    1. Установить продолжительность 30 s и максимальная скорость и запустить устройство.
    2. После окончания, взять трубы и оснастки заморозить снова в жидком азоте.
    3. Повторите пять раз.
  5. Вымойте микрочастицы из трубок, добавив 1 мл ddH2O на трубу и поколебать или вихревые для полного растворяющие. Фильтр гетерогенных раствора через сетку 200 мкм в 50 мл трубки.
  6. Замораживание труб в-80 ° C или жидкого азота.
  7. Замените крышку стандартной трубки 0,22 мкм фильтром. Этот фильтр крышки предотвращает течет из трубки порошок, но позволяет циркуляции воздуха для испарения воды.
  8. Вставьте трубки в лиофилизатор и lyophilize снова, чтобы удалить воду из шаг (шаг 4.5)
    Примечание: Лиофилизации на этот шаг может занять до 3 дней.
  9. Хранить порошок-80 ° c до дальнейшей обработки или продолжить с шага 5.1.

5. фермент основе гомогенизаторы СКВ микро-частицы

  1. Растворите свинину пепсин в 0,01 М HCl (рН 2.0) до концентрации 1 мг/мл. Место на роторный шейкер при комнатной температуре до тех пор, пока он полностью не растворится.
  2. Растворите лиофилизированный порошок человека ECM (шаг 4.8) в решении пепсин в конечной концентрации 10 мг/мл. Тщательно перемешать через закупорить. Общий объем зависит от суммы необходимо решение ECM. Например Растворите 10 мг порошка ECM в 1 мл раствора пепсина.
    Примечание: Растворение частиц может поддерживаться через нежный vortexing (1000-1500 об/мин). Оставшиеся куски микрочастиц негативно повлияет на пищеварение.
  3. Решение передать 2 мл пробирок с объемом 1 мл на трубу.
  4. Место труб в шейкере трубки для 48 ч при 27 ° C и 1200 об/мин.
  5. Возьмите трубы из шейкер и место на льду или предварительно охлажденным трубодержатель.
  6. Смесь 1/9 объема решение ECM холодной 10 x PBS (рН 7,4) с 1/10 объема решение ECM холода 0,1 М NaOH в помощи трубки и место на льду. Эта смесь будет нейтрализовать переваривается решение ECM и необратимо Инактивирует пепсин.
  7. Добавьте решение ECM для нейтрализации смеси и перемешать тщательно через закупорить или vortexing.
  8. Установите ECM желаемой концентрации с ПБС (рН 7,4). РН раствора может быть проверена с рН бумагой.
    Примечание: Пример расчета для 10 мл переваривается решение ECM:
    Добавьте свинину пепсин 10 мг в 10 мл HCl (рН 2.0).
    Добавьте порошок 100 мг ECM пепсин решение.
    Примечание: Пример расчета для нейтрализации 10 мл переваривается решение ECM и установка с концентрацией до 8 мг/мл:
    Volокончательный = cначать x Vol,Начало / cокончательный = 10 мг / мл х 10 мл / 8 мг/мл = 12,5 мл
    Том10xPBS = Volначать / 9 = 1/9 от PBS 10 x 10 = 1,11 мл
    VolNaOH = Volначать / 10 = 1/10 от 10 мл = 1 мл
    Том1xPBS = Volокончательный - Volстарт - Vol10xPBS - VolNaOH = 12,5 мл - 10 мл-.11-1 мл = 0.39 мл

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Протокол 3-шаг для decellularization миокарда человека здесь представлены результаты в почти полное удаление клеточным материалом, сохраняя основные компоненты ECM и фибриллярного структуры ECM. После decellularization брутто удаление клеток из ткани свидетельствует изменение цвета (рис. 1A). Гистологический анализ с H & E и Masson Trichrome пятна показали полное отсутствие остаточного нетронутым клеток (рис. 1B). Количествен...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

При подготовке человека миокарда ECM, цель – добиться следующее: удаление соответствующих иммуногенность клеточного материала, сохранение целостности ECM и биологическую, бесплодие, нетоксичность конечного продукта, GMP-процесса совместимости, и пригодность продукта для данного приложения с точки зрения обработки. Объединив наши 3-шаг decellularization протокол с дальнейшей обработкой на микрочастицы или самостоятельной сборки гидрогеля, человеческого сердца ECM материала получается что обладает конкретным биологической ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Протокол исследования соответствует этические принципы, изложенные в Хельсинкской декларации. Обоснованного согласия пациентов предусмотрено использование ткани для исследовательских целей, а процесс сбора ткани был одобрен институциональных Наблюдательный Совет и Комитет по этике Шарите - этот Berlin (ΕΑ4/028/12).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
BalanceDR Precisa, Dietikon, ШвейцарияPrecisa XR 205SM
Лезвия Nr.10 Skalpell Nr.3InstrumenteNRW, Erftstadt, ГерманияSK-10-004
Клеточные культуральные планшеты (6-луночные)Greiner, Frickenhausen, Германия657160
Cryostat CMLeica, Wetzlar,Германия 3050S
EDTA CarlRoth, Karlsruhe, Германия8043.3
Eppendorf реакционные пробирки (1,5 или 2 мл)Greiner, Фрикенхаузен, Германия616201, 623201
Falcon 15мл, 50млGreiner, Фрикенхаузен, Германия188271, 227270
Фетальная бычья сыворотка (FBS)Biochrome, Берлин, ГерманияS 0115
Система сублимационной сушкиLabconco, Канзас-Сити, США7670520
Морозильная камера (-80°С; C)Thermo Scientific, Уолтем, Массачусетс, СШАForma 900 Series
HClCarl Roth, Карлсруэ, Германия281.1
Microtome Blades Type 819Leica, Вецлар, Германия14035838925
Minilys HomogeniserPEQLAB Biotechnologie GmbH, Эрланген, Германия91-PCSM
NaOHCarl Roth, Карлсруэ, ГерманияK021.1
НистатинPAN Biotech, Айденбах, ГерманияP06-07800
PBSThermo Scientific, Уолтем, Массачусетс, США14190-094
Пенициллин/стрептомицинLife Technologies, Дармштадт, Германия15140122
PepsinSigma-Aldrich, Тауфкирхен, ГерманияP6887-1G
Precellys Keramik-Kit 1,4 ммPeqlab Biotechnolgie, Эрланген, Германия91-PCS-CK14
Rotamax 120 ВибростендHeidolph, Швабах, Германия544-41200-00
SDSCarl Roth, Карлсруэ, ГерманияCN30.3
СтереомикроскопLeica, Вецлар, ГерманияM125
Steriflip-GP, 0,22 &; mMerck Millipore, Дармштадт, ГерманияSCGP00525
Стюарт аналоговые рокерные и роликовые миксерыSigma-Aldrich, Тауфкирхен, ГерманияZ675113-1EA
Tissue Tek O.C.T compoundHartenstein, Вюрцбург, ГерманияTTEK
Трансфузионный набор 200µ mSarstedt, Nü mbrecht, Германия798.200.500
TRISCarl Roth, Карлсруэ, Германия5429.3
vedena Skalpellgriff Fig. 3, Standard, 125 ммMedical Highlights, Rohrdorf, ГерманияCV102-003
Vortex-Genie2Scientific Industry, Нью-Йорк, СШАSI-0256

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Elliott, R., Hoehn, J. Use of Commercial Porcine Skin for Wound Dressings. Plastic and reconstructive surgery. 52 (4), 401-405 (1973).
  2. Rienks, M., Papageorgiou, A. -P., Frangogiannis, N. G., Heymans, S. Myocardial Extracellular Matrix: An Ever-Changing and Diverse Entity. Circulation Research. 114 (5), 872-888 (2014).
  3. Prabhu, S. D., Frangogiannis, N. G. The Biological Basis for Cardiac Repair After Myocardial Infarction. Circulation Research. 119 (1), 91-112 (2016).
  4. Boopathy, A. V., Martinez, M. D., Smith, A. W., Brown, M. E., Garcia, A. J., Davis, M. Intramyocardial Delivery of Notch Ligand-Containing Hydrogels Improves Cardiac Function and Angiogenesis Following Infarction. Tissue Eng Part A. 21 (17-18), 2315-2322 (2015).
  5. Gaetani, R., Yin, C., et al. Cardiac derived extracellular matrix enhances cardiogenic properties of human cardiac progenitor cells. Cell Transplant. , (2015).
  6. Kraehenbuehl, T. P., Ferreira, L. S., et al. Human embryonic stem cell-derived microvascular grafts for cardiac tissue preservation after myocardial infarction. Biomaterials. 32 (4), 1102-1109 (2011).
  7. Zhang, J., Klos, M., et al. Extracellular matrix promotes highly efficient cardiac differentiation of human pluripotent stem cells: The matrix sandwich method. Circulation Research. 111 (9), 1125-1136 (2012).
  8. Fong, A. H., Romero-López, M., et al. Three-Dimensional Adult Cardiac Extracellular Matrix Promotes Maturation of Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes. Tissue Engineering Part A. 22 (15-16), 1016-1025 (2016).
  9. DeQuach, J. A., Mezzano, V., et al. Simple and High Yielding Method for Preparing Tissue Specific Extracellular Matrix Coatings for Cell Culture. PLoS ONE. 5 (9), e13039(2010).
  10. Saldin, L. T., Cramer, M. C., Velankar, S. S., White, L. J., Badylak, S. F. Extracellular matrix hydrogels from decellularized tissues: Structure and function. Acta Biomaterialia. 49, 1-15 (2017).
  11. Tukmachev, D., Forostyak, S., et al. Injectable extracellular matrix hydrogels as scaffolds for spinal cord injury repair. Tissue Eng Part A. , (2016).
  12. Freytes, D. O., Martin, J., Velankar, S. S., Lee, A. S., Badylak, S. F. Preparation and rheological characterization of a gel form of the porcine urinary bladder matrix. Biomaterials. 29 (11), 1630-1637 (2008).
  13. Singelyn, J. M., Sundaramurthy, P., et al. Catheter-deliverable hydrogel derived from decellularized ventricular extracellular matrix increases endogenous cardiomyocytes and preserves cardiac function post-myocardial infarction. Journal of the American College of Cardiology. 59 (8), 751-763 (2012).
  14. Wainwright, J. M., Czajka, C. A., et al. Preparation of cardiac extracellular matrix from an intact porcine heart. Tissue Eng Part C Methods. 16 (3), 525-532 (2010).
  15. Ott, H. C., Matthiesen, T. S., et al. Perfusion-decellularized matrix: using nature's platform to engineer a bioartificial heart. Nature Medicine. 14, 213-221 (2008).
  16. Oberwallner, B., Anic, B. A., et al. Human cardiac extracellular matrix supports myocardial lineage commitment of pluripotent stem cells. Eur J Cardiothorac Surg. 47, 416-425 (2015).
  17. Oberwallner, B., Brodarac, A., et al. Preparation of cardiac extracellular matrix scaffolds by decellularization of human myocardium. Journal of Biomedical Materials Research Part A. 102 (9), 3263-3272 (2014).
  18. Kappler, B., Anic, P., et al. The cytoprotective capacity of processed human cardiac extracellular matrix. Journal of Materials Science: Materials in Medicine. , (2016).
  19. Bashey, R. I., Martinez-Hernandez, A., Jimenez, S. A. Isolation, characterization, and localization of cardiac collagen type VI. Associations with other extracellular matrix components. Circulation Research. 70 (5), (1992).
  20. Wu, J., Ravikumar, P., Nguyen, K. T., Hsia, C. C. W., Hong, Y., Gorler, A. Lung protection by inhalation of exogenous solubilized extracellular matrix. PLOS ONE. 12 (2), e0171165(2017).
  21. Chen, W. C. W., Wang, Z., et al. Decellularized zebrafish cardiac extracellular matrix induces mammalian heart regeneration. Science Advances. 2 (11), e1600844(2016).
  22. Godier-Furnémont, A. F. G., Martens, T. P., et al. Composite scaffold provides a cell delivery platform for cardiovascular repair. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (19), 7974-7979 (2011).
  23. Sarig, U., Sarig, H., et al. Natural myocardial ECM patch drives cardiac progenitor based restoration even after scarring. Acta Biomaterialia. 44, 209-220 (2016).
  24. Singelyn, J. M., DeQuach, J. A., Seif-Naraghi, S. B., Littlefield, R. B., Schup-Magoffin, P. J., Christman, K. L. Naturally derived myocardial matrix as an injectable scaffold for cardiac tissue engineering. Biomaterials. 30 (29), 5409-5416 (2009).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Cardiac Extracellular MatrixDecellularization ProcessHydrogel FormationTissue ProcessingMicroparticle PreparationPepsin DigestionLyophilization TechniqueCell free ECM SheetsIn Vitro ApplicationsIn Vivo Applications

Похожие статьи