Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Семенных канальцах Сквош техника для цитологического анализа с помощью мыши модель сперматогенеза

15.4K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/56453

⸱

6 февраля 2018 г.

 ,  , 
1Department of Biochemistry and Molecular Biology, Johns Hopkins Bloomberg School of Public Health

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Цель этой техники Сквош трубочку является быстро оценить цитологические особенности развивающихся сперматоцитах мыши при сохранении целостности клеточных. Этот метод позволяет для изучения всех этапов сперматогенеза и могут быть легко реализованы вместе с другими биохимических и молекулярных биологических подходов для изучения мыши мейоз.

Аннотация

Meiotic прогрессии в мужчины является процессом, который требует согласованных действий ряда жестко регулируемых сотовой событий. Ошибки, возникающие во время мейоза может привести к бесплодию, потери беременности или генетические дефекты. Начиная с наступлением полового созревания и продолжается в зрелом возрасте, непрерывной полусинхронные волны сперматоцитах пройти сперматогенеза и в конечном счете формируют гаплоидным спермы. Первая волна мыши сперматоцитах переживает meiotic инициации появляются на 10 день после родов (10 ДПП) и выпускаются в просвете семенных канальцев как зрелые сперматозоиды в 35 dpp. Таким образом это выгодно использовать мышь в этой области развития промежуток времени с целью получения высокообогащенного населения интерес. Анализ этапов редких клетки является более сложным в старых мышей за счет вклада последовательных генерациями волн, которые увеличивают разнообразие клеточных популяций в трубочки. Метод, описанный здесь легко реализована методика для цитологического оценки клетки, находящиеся в пределах семенных канальцев мышей, в том числе сперматогонии, сперматоцитах и сперматид. Трубочка Сквош техника обеспечивает целостность изолированные мужские половые клетки и позволяет изучение клеточных структур, которые не визуализируются легко с другими методами. Чтобы продемонстрировать возможности применения этой техники Сквош трубочку, шпинделя Ассамблея контролировали в сперматоцитах прогрессирует через профаза до метафазы, которую я переход (G2/ми переход). Кроме того Центросома дублирования, инактивирование meiotic секс хромосомы (МСКИ) и хромосомы букет формирования были оценены как примеры цитологического структур, которые можно наблюдать с помощью этого метода Сквош трубочку. Этот метод можно использовать для определить конкретные дефекты в ходе сперматогенеза, которые вызваны мутации или внешних возмущений, и таким образом, вносит вклад в наше понимание молекулярных сперматогенеза.

Введение

Мейоз представляет собой комплекс сотовой событие, в котором один раунд репликации ДНК следуют два последовательных раундов клеточного деления. Несколько конкретных мейоз события должны быть скоординированы на начальных этапах мейоз для обеспечения точной хромосома сегрегации. Эти мероприятия включают в себя завершение гомологичных рекомбинации, Сопредседатель ориентации сестры kinetochores во время первого дивизиона meiotic и поэтапного потери когезинов комплексов для устранения chiasmata между гомолог. Точное регулирование этих процессов является необходимым для поддержания плодородия и предотвращения хромосоме missegregation события, которые могут привести к генетическими отклонениями и самопроизвольный выкидыш1.

Хотя основные события мейоз происходят у самцов и самок, значительные временные и механистические различия существуют между сперматогенеза и женских2. Например во время женского мейоз, профазе I происходит во время эмбрионального развития и аресты на dictyate этапе до полового созревания. В отличие от сперматогенез начинается в период полового созревания и прогрессирует в волны по всей взрослой жизни без ареста. Различия между мужской и женской мейоз подчеркивает необходимость разработки методов, которые специально рассчитаны на оценку этих процессов в сперматоцитах и яйцеклеток. В настоящее время оценки meiotic прогрессии во многом основывается на использовании хроматина распространяется3,4,5. Хотя хроматина спреды являются полезными для изучения meiotic хромосом, они сумеют сохранить целостность клеточных, предотвращая оценки клеточных структур, таких как шпинделя микротрубочек, большое, ядерная оболочка и теломер вложения. Живут изображений и долгосрочные культивирования методов значительно продвинулись нашего понимания женской мейоз; аналогичные подходы к визуализировать всю ячейку нетронутыми, однако, менее часто реализуются для исследования сперматогенеза6,7. Для того, чтобы визуализировать динамических событий всей мужской мейоз, мы адаптировали установленных трубочку Сквош методы быстро оценить цитологические особенности разработки мыши сперматоцитах8,9. Метод, описанный здесь поддерживает целостность клетки, позволяя изучение нескольких клеточных структур на различных этапах сперматогенеза.

Эта трубочка Сквош техника является клеточных подход, который позволяет для оценки клеточных структур через иммунофлуоресценции. Общие подходы гистологические визуализировать meiotic прогрессии у мышей-самцов, такие как гематоксилин и эозином парафина встроенных яичек, и immunofluorescent маркировки cryosections позволяют широкий обзор meiotic прогрессии. Однако эти методы не удается урегулировать отдельные ячейки в необходимом для детального анализа событий, происходящих на протяжении мейоз10,11. Альтернативные методы для визуализации meiotic процессов полагаться на значительные Хемиосмотическая нарушения Сперматоцит изолировать и исправить ядерных материалов3,4,5. Эти присадки препятствуют наблюдения клеток типов, отличных от основного сперматоцитах. Недавно описан метод Namekawa позволило исследовательского сообщества для сохранения ядерной Архитектура изолированных сперматоцитах, но требует использования cytospin и аксессуары, которые не могут быть легко доступны для некоторых лабораторий4. В противоположность этому техника Сквош трубочку только требует оборудования, обычно стандартный в большинстве лаборатории биологии клетки.

Трубочка Сквош метод, описанный здесь может использоваться для визуализации различных клеток типов, найденные в пределах семенных канальцах, включая клеток Сертоли, сперматогонии, первичных и вторичных сперматоцитах и сперматид. Путем соединения эту технику с рядом синхронная первой волной сперматогенеза у несовершеннолетних мышей, можно получить обогащенного популяции сперматогенных клеток, как они прогресс через мейоз12. Этот процесс позволяет подробный анализ процессов на протяжении сперматогенез, таких, как ранние события профаза, G2/ми и метафаза анафазе переходы, и spermiogenesis. Кроме того трубочка Сквош препаратов может использоваться для визуализации цитологические особенности хромосом (например, interchromatid домены (ВТС) и kinetochores) и большое (centrioles и pericentriolar материал/матрицы). Сквош метод может легко выполняться параллельно с другими экспериментальные подходы, такие как хроматина спреды и извлечения белков. Кроме того этот метод успешно изменен депозита живых сперматогенных клеток на слайдах для прямой визуализации13.

Метод, описанный здесь включает клеточных семенных канальцах Сквош способ анализа G2/ми переход в мышей C57BL/6J одичал типа. Цитологические особенности первичной сперматоцитах, введя в первый дивизион meiotic были визуализированы с иммунофлуоресценции соблюдать meiotic шпинделя. Этот универсальный метод могут быть легко изменены для визуализации другие meiotic этапов и различных типов клеток. Метод также поддаются стратегии альтернативных визуализации, такие как ДНК и РНК рыбы подходов.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Использование мыши был одобрен институциональный уход животных и использовать Комитет из университета Джона Хопкинса. Были проведены эксперименты по делам несовершеннолетних (20-26 дней после родов, dpp) мышей C57BL/6J, воспользовавшись полусинхронные первой волны сперматогенеза. Однако этот метод можно также выполнить с помощью взрослых мышей.

1. Вскрытие и изоляции мыши семенных канальцев

  1. Подготовьте исправление/решения и антитела разрежения буфера lysis (ADB) описаны в таблице 1 и таблице 2.
  2. Подготовьте один из 35-мм Петри с 3 мл 1 x-фосфатный буфер (ПБС, рН 7,4) и еще 35-мм блюдо с 2 мл раствора исправить/лизиса на мышь.
  3. Пожертвовать мыши через шейки матки вывих или CO2 удушья и спрей вентральной живота с 70% этиловом спирте. Откройте abdominopelvic полости, используя стерильными ножницами, что делает V-образный открытия. Затем удалите семенников, потянув на эпидидимальных жировой ткани с помощью щипцов и не мешать белочной. Разместите яички в 35-мм Петри, содержащие ПБС.
    Примечание: Использование первой волны сперматогенез для того чтобы наблюдать обогащенных клеток населения интерес14. Конкретные этапы сперматогенеза обогащены мыши разных возрастов (Таблица 3).
  4. Удаление яичка белочной , проколов ткани с острым наконечником щипцы и собирать свободно семенных канальцев. Передать новый 35-мм Петри, содержащий 2 мл раствора исправить/лизис трубочки.
  5. Инкубируйте трубочки в решении исправление/лизис 5 мин при комнатной температуре.

2. Подготовка семенных канальцев

  1. Подготовьте слайд стекла с покрытием поли L-лизин, изложением края слайд с жидким блокатор ручкой.
  2. Обратиться в центр слайда стекла 100 мкл раствора исправить/лизис.
  3. С помощью стерильный пинцет и ножниц аккуратно задразнить врозь семенных канальцев. Вырезания долго отдельных трубочку сегменты около 20 мм в длину.
    Примечание: Визуализировать структур, которые являются чувствительными к фиксирующие длительного воздействия, такие как большое, сначала отделить трубочки в однократном ПБС, а затем непосредственно фарш трубочки на поверхности поли лизин слайды с покрытием в 100 мкл раствора исправить лизис.
  4. Передать подготовленные стекла с покрытием поли L-лизин слайд, содержащий исправления/лизис решение пять сегментов длиной семенных канальцах 20 мм.
  5. С помощью стерильными ножницами фарш семенных канальцев на сегменты 1,5 до 3,0 мм.
  6. С помощью стерильный пинцет организовать трубочку сегментов на слайде стекла, так что не ткани перекрывается, и трубочки распределяются равномерно.
    Примечание: Оптимальное количество сегментов трубочку на слайде стекла составляет от 20 до 40.

3. давя из семенных канальцев

  1. Передача стекла слайд, содержащий дисперсной семенных канальцах сегменты на benchtop. Удалите избыток жидкости с помощью Лаборатория очистки, чтобы избежать потери ткани во время шага Сквош.
  2. Применить coverslip (22 x 60-1,5 мм) на вершине стеклянное скольжение и применить давление с пятки ладони на 10-20 секунд. Важно применить достаточно силы для разгона сперматоцитах от семенных канальцев.
    Примечание: Наблюдать за трубочки с помощью микроскопа диссекции для того, чтобы оптимизировать интенсивное шаг так, что нарушены все сегменты трубочку.
  3. С помощью щипцов слайд, немедленно вспышки заморозить стеклянное скольжение в небольшой Дьюар жидкости N2 на 15 секунд, или до тех пор, пока жидкость перестает пузырь. Если immunolabeling немедленно, удалите coverslip с прямой край лезвия, хорошо подсказка щипцами или 21-иглы.
    Примечание: Для получения оптимальных результатов, immunolabel слайды немедленно (см. шаг 4). Однако на данный момент слайды могут быть сохранены на-80 ° C до двух недель. Чтобы максимизировать жизни белков и клеточных структур, немедленно хранить слайды на сухой лед или передачи в морозильной камере-80 ° C и держать coverslip на слайде. При immunolabeling хранении слайды, удалите coverslip, погружая слайды в жидком N2 на 15 секунд, как описано в пункте 3.3.

4. Immunolabeling навесные семенных канальцев

  1. Погрузите слайд в 1 x PBS и мыть три раза за 5 мин в 50-мл Coplin jar, содержащий ПБС.
    Примечание: Никогда не позволяйте слайды для полностью сухой во время immunolabeling.
  2. Примените 1 мл буфера для разведения антител на стекло слайд для блокирования на 1-2 ч в камере увлажненной.
  3. Удалить в буфер разбавления антитела и применить 100 мкл основное антитело, разводили буфером для разбавления проб антитела в камере увлажненные.
    Примечание: Для достижения наилучших результатов Инкубируйте первичных антител на ночь при 4 ° C. Используйте меньшие объемы антител (например 50 мкл), покрывая слайд с coverslip или парафина. Проверить и оптимизировать первичного антитела15.
  4. Промывайте слайды три раза за 5 мин в опарник Coplin 50 мл, содержащие ПБС.
    Примечание: Для повышения моет, агитировать Coplin баночки с помощью малых магнитных перемешать бар и место на магнитные перемешать пластины на низкой скорости или место опарник Coplin на Настольный миксер на низкой скорости.
  5. Примените 100 мкл вторичные антитела, разводили буфером для разбавления проб антитела для 1-1,5 ч в камере увлажненной при комнатной температуре. Инкубируйте слайды в темной коробке, чтобы избежать фото отбеливание Флюорофор конъюгированных антител.
    Примечание: Используйте меньшие объемы антител (например 50 мкл), покрывая слайд с coverslip или парафина.
  6. Промойте слайды в два раза за 5 мин в 50-мл Coplin jar, содержащий ПБС.
  7. Маунт слайды монтажа носитель, содержащий 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI, 1,5 мкг/мл) и применить coverslips (22 x 60-1,5 мм).
  8. Уплотнение coverslips слайды с четкой Лак для сохранения слайды и предотвратить перемещение coverslips.

5. анализ и изображений препаратов Сквош трубочка

  1. Используйте помощью эпифлуоресцентного микроскопа с автоматизированной стадии, который позволяет точное движение по оси z и с высоким разрешением камеры для захвата изображения. Кроме того использование лазерного конфокального микроскопа.
    Примечание: Используйте любые имеющиеся аппаратное и программное обеспечение для этого шага. Например изображения в Рисунок 1 и 2 были захвачены с помощью Zeiss клеток наблюдателя Z1 связана с ORCA-Flash 4.0 КМОП-камера и проанализированы с программным обеспечением образ издание Zeiss Дзэн 2012 синий.
  2. Оцените с помощью 20 X цель определить качество подготовки Сквош слайды. Хорошее качество слайды имеют монослоя ядер, которые равномерно распределены.
    Примечание: Некоторые разделы слайда может быть лучше, чем другие, это полезно отметить координаты где можно найти лучшие регионы слайд для дальнейшего анализа с использованием увеличение.
  3. Использование выше увеличение цели (например 63 X или 100 X), захват регионов слайда, которые последовательно монослоя ядер. После того, как выбран регион, установите верхний и Нижняя Z-стеки обеспечить, что все в фокусе свет улавливается.
    Примечание: Оптимальное количество Z-стеки, захватили между верхний и нижний предел обычно обозначается приобретения изображений программное обеспечение и различны для каждой цели.
  4. Используйте программное обеспечение для обработки изображений для компиляции увеличенной глубины фокуса изображения. Программное обеспечение сочетает в себе свет в фокус от каждого Z-стека и имеет важное значение для оптимального изображения трубочку Сквош препаратов.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Здесь, мы использовали метод Сквош трубочку для визуализации лицевой клеточных популяций, претерпевает профаза до метафазы I (G2/MI) переходного периода, которые были обогащенный уборки семенников из несовершеннолетних мышах одичал тип проходит первая волна сперматогенеза (24 DPP). Рисунок 1 изображает представитель изображений на различных этапах клеток, которые могут быть визуализированы с помощью метода Сквош трубочку. Обогащенный популяций метафаза я спер...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Мышей оказались организм полезной моделью для изучения клеточных события, которые управляют meiotic прогрессии в ходе сперматогенеза. Кроме того это необходимо разработать инструменты, обслуживали исследования сперматогенеза, потому что многие события, такие как выход из meiotic профаза, сексуально диморфизм. Этот протокол описывает метод Сквош семенных канальцах для визуализации и изучения различных этапов мыши сперматогенеза. Этот метод сохраняет целостность клеточных и тем самым позволяет подробный анализ ядерных и ци...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

Эта работа была поддержана NIGMS (R01GM11755) для P.W.J. и обучения Грант стипендий от Института национального рака (НИЗ) (CA009110) S.R.W. и. г.
 

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
16% параформальдегид воднаяэлектронная микроскопия Sciences (EMS)15710
10x PBSКачество Биологический119-069-161
Triton X-100SigmaT8787
BSASigmaA1470
Лошадиная сывороткаSigmaH-1270
35 мм x 10 мм Чашка Петри, стерильная, необработаннаяCellTreatP886-229638
Стеклянные стекла с покрытием из поли-L-лизинаSigmaP0425-72EA
Жидкий блокатор Ручкадля электронной микроскопии Sciences (EMS)71310
Влажная коробкаEvergreen240-9020-Z10
Wheaton Coplin Стеклянная тарелка для окрашивания на 5 или 10 слайдовFisher08-813E
VECTASHIELD Antifade Mounting Средний с защитнымиVector LabsH-1200
(22 ммx60 мм)Прозрачный12-544-G
AmazonN/A
Microsopes
NameCompanyНомер в каталоге Comments
SteREO Discovery.V8Zeiss495015-0001-000 
Observer Z1Zeiss4109431007994000
Zeiss ZEN 2012 blue edition программное обеспечение для обработки изображенийZeiss
ORCA-Flash 4.0 CMOS-камераHamamatsu
Primary Antibodies
NameCompanyКаталожный номерComments
Mouse anti-SYCP3Santa Cruzsc-745691 из 50
Rabbit anti-SYCP3Fisher (Novus)NB300-2311 из 1000
Goat anti-SCP3Santa Cruzsc-208451 из 50
Антитела к антицентромерному белку человекаIncorporated15-2351 из 100
Мышь анти-альфа тубулинSigmaT90261 из 1000
Мышь анти-AIM1BD Biosciences6110821 из 200
Мышь анти-& H2AXThermo FisherMA1-20221 из 500
Мышь анти-CENT3AbnovaH00001070-M011 из 200
Кролик антиперицентринAbcamab44481 из 200
Кролик анти-REC8Любезно предоставлено  Доктор Карен ШиндлерН/Д1 из 1000
стеклами для микроскопа DAPI лак для ногтей Fisher

Ссылки

  1. Nagaoka, S. I., Hassold, T. J., Hunt, P. A. Human aneuploidy: mechanisms and new insights into an age-old problem. Nature Rev Genet. 13 (7), 493-504 (2012).
  2. Morelli, M. A., Cohen, P. E. Not all germ cells are created equal: Aspects of sexual dimorphism in mammalian meiosis. Reproduction. 130 (6), 761-781 (2005).
  3. Sun, F., Handel, M. A. Regulation of the meiotic prophase I to metaphase I transition in mouse spermatocytes. Chromosoma. 117 (5), 471-485 (2008).
  4. Namekawa, S. H. Slide preparation method to preserve three-dimensional chromatin architecture of testicular germ cells. J Vis Exp. (83), e50819(2014).
  5. La Salle, S., Sun, F., Handel, M. A. Isolation and short-term culture of mouse spermatocytes for analysis of meiosis. Methods Mol Biol. 558, 279-297 (2009).
  6. Galdon, G., Atala, A., Sadri-Ardekani, H. In vitro spermatogenesis: how far from clinical application? Curr Urol Rep. 17 (7), (2016).
  7. Staub, C. A century of research on mammalian male germ cell meiotic differentiation in vitro. J Androl. 22 (6), 911-926 (2001).
  8. Page, J., Suja, J. A., Santos, J. L., Rufas, J. S. Squash procedure for protein immunolocalization in meiotic cells. Chromosome Res. 6 (8), 639-642 (1998).
  9. Kotaja, N., et al. Preparation, isolation and characterization of stage-specific spermatogenic cells for cellular and molecular analysis. Nat Methods. 1 (3), 249-254 (2004).
  10. Xu, X., Xu, P. A modified cryosection method for mouse testis tissue. Tissue Cell. 33 (2), 208-210 (2001).
  11. Hess, R., Moore, B. Histological methods for evaluation of the testis. Methods Toxicol. 3 (Pt A), 52-85 (1993).
  12. Bellvé, A. R. Purification, culture, and fractionation of spermatogenic cells. Methods Enzymol. 225, 84-113 (1993).
  13. Ventela, S., Toppari, J., Parvinen, M. Intercellular organelle traffic through cytoplasmic bridges in early spermatids of the rat: mechanisms of haploid gene product sharing. Mol Biol Cell. 14 (July), 2768-2780 (2003).
  14. Bellvé, A. R., et al. Dissociation of the mouse testis and characterization of isolated spermatogenic cells. J Histochem Cytochem. 25 (7), 480-494 (1977).
  15. Burry, R. W. Controls for immunocytochemistry: an update. J Histochem Cytochem. 59 (1), 6-12 (2011).
  16. Zickler, D., Kleckner, N. Recombination, pairing, and synapsis of homologs during meiosis. Cold Spring Harb Perspect Biol. 7 (6), 1-26 (2015).
  17. Hunter, N. Meiotic recombination: the essence of heredity. Cold Spring Harb Perspect Biol. 7 (12), 1-36 (2015).
  18. Scherthan, H., et al. Centromere and telomere movements during early meiotic prophase of mouse and man are associated with the onset of pairing. J Cell Biol. 134 (5), 1109-1125 (1996).
  19. Zickler, D., Kleckner, N. The leptotene-zygotene transition of meiosis. Annu Rev Genet. 32, 619-697 (1998).
  20. Scherthan, H. A bouquet makes ends meet. Nat Rev Mol Cell Biol. 2 (8), 621-627 (2001).
  21. Turner, J. Meiotic sex chromosome inactivation. Development. 134 (10), 1823-1831 (2007).
  22. Royo, H., et al. ATR acts stage specifically to regulate multiple aspects of mammalian meiotic silencing. Genes Dev. 27 (13), 1484-1494 (2013).
  23. Turner, J. M., et al. Silencing of unsynapsed meiotic chromosomes in the mouse. Nat Genet. 37 (1), 41-47 (2005).
  24. Marjanović, M., et al. CEP63 deficiency promotes p53-dependent microcephaly and reveals a role for the centrosome in meiotic recombination. Nat Commun. 6, 7676(2016).
  25. Inanç, B., Dodson, H., Morrison, C. G. A Centrosome-autonomous signal that involves centriole disengagement permits centrosome duplication in G2 phase after DNA damage. Mol Biol Cell. 21, 3866-3877 (2010).
  26. Firat-Karalar, E. N., Sante, J., Elliott, S., Stearns, T. Proteomic analysis of mammalian sperm cells identifies new components of the centrosome. J Cell Sci. 127 (Pt 19), 4128-4133 (2014).
  27. Fukuda, N., et al. The transacting factor CBF-A/Hnrnpab binds to the A2RE/RTS element of protamine 2 mRNA and contributes to its translational regulation during mouse spermatogenesis. PLoS Genet. 9 (10), e1003858(2013).
  28. Lahn, B. T., et al. Previously uncharacterized histone acetyltransferases implicated in mammalian spermatogenesis. Proc Natl Acad Sci U S A. 99 (13), 8707-8712 (2002).
  29. Mermoud, J. E., Tassin, A. M., Pehrson, J. R., Brockdorff, N. Centrosomal association of histone macroH2A1.2 in embryonic stem cells and somatic cells. Exp Cell Res. 268 (2), 245-251 (2001).
  30. Shanmugam, M., Hernandez, N. Mitotic functions for SNAP45, a subunit of the small nuclear RNA-activating protein complex SNAPc. J Biol Chem. 283 (21), 14845-14856 (2008).
  31. Ganem, N. J., Godinho, S. A., Pellman, D. A mechanism linking extra centrosomes to chromosomal instability. Nature. 460 (7252), 278-282 (2009).
  32. Kotaja, N., et al. Preparation, isolation and characterization of stage-specific spermatogenic cells for cellular and molecular analysis. Nat Methods. 1 (3), 249-254 (2004).
  33. Amory, J. K., et al. Suppression of spermatogenesis by bisdichloroacetyldiamines is mediated by inhibition of testicular retinoic acid biosynthesis. J Androl. 32 (1), 111-119 (2011).
  34. Hogarth, C. A., et al. Turning a spermatogenic wave into a tsunami: synchronizing murine spermatogenesis using WIN 18,446. Biol Reprod. 88 (2), 40(2013).
  35. Yoshida, S., et al. The first round of mouse spermatogenesis is a distinctive program that lacks the self-renewing spermatogonia stage. Development. 133 (8), 1495-1505 (2006).
  36. Kluin, P. M., Kramer, M. F., Rooij, D. G. Spermatogenesis in the immature mouse proceeds faster than in the adult. Int J Androl. 5 (3), 282-294 (1982).
  37. Rodriguez, I., Ody, C., Araki, K., Garcia, I., Vassalli, P. An early and massive wave of germinal cell apoptosis is required for the development of functional spermatogenesis. EMBO J. 16 (9), 2262-2270 (1997).
  38. Kangasniemi, M., et al. Modulation of basal and FSH dependent cyclic AMP production in rat seminiferous tubules staged by an improved transillumination technique. Anat Rec. 227 (1), 62-76 (1990).
  39. Martianov, I., et al. Late arrest of spermiogenesis and germ cell apoptosis in mice lacking the TBP-like TLF/TRF2 gene. Mol Cell. 7 (3), 509-515 (2001).
  40. Henriksén, K., Parvinen, M. Stage-specific apoptosis of male germ cells in the rat: Mechanisms of cell death studied by supravital squash preparations. Tissue Cell. 30 (6), 692-701 (1998).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Сперматогенез мышиизоляция герминальных клетокподготовка семенных канальцевлизирующий раствор фиксаторапредметное стекло с поли-L-лизиномиммунофлуоресцентное окрашиваниеэпифлуоресцентная микроскопияформирование хромосомного «букета»
Семенных канальцах Сквош техника для цитологического анализа с помощью мыши модель сперматогенеза
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.