Method Article

Предварительного кондиционирования Airways мышей с блеомицин увеличивает эффективность приживления клеток рака легких ортотопическая

DOI:

10.3791/56650

⸱

June 28th, 2018

 ,  , 
1Department of Pathology, Yale University School of Medicine, 2Department of Medical Oncology, Yale University School of Medicine

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы описываем метод значительно повысить ортотопическая приживления клеток рака легкого в мышиных легкие путем предварительного кондиционирования airways с травмой. Этот подход может также применяться к исследованию стромальные взаимодействий внутри легких микроокружения, метастатические распространения, сопутствующие заболевания раком легких, и более эффективно создавать пациента производной ксенотрасплантатов.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Рак легких является смертельной лечения огнеупорных болезнь, которая является биологически гетерогенной. Чтобы понять и эффективно лечить полный Клинический спектр грудной клетки злокачественных опухолей, необходимы дополнительные Животные модели, которые можно резюмировать подтипы рака различных человеческих легких и этапов. Аллотрансплантатом или гранулы ксенотрансплантата модели универсальны и дать количественную оценку онкогенной потенциала в естественных условиях, используя злокачественных клеток мышиных или человеческого происхождения. Однако ранее описанных методов приживления клеток рака легких выполнены в не физиологические сайтов, таких как фланг мышей, из-за неэффективности ортотопическая трансплантации клеток в легкие. В этом исследовании мы описываем метод для повышения ортотопическая легких рак клеток приживления путем предварительного кондиционирования airways мышей с фиброзом блеомицин заставить агент. Как доказательство концепции эксперимент мы применяли такой подход привить опухолевых клеток подтипа аденокарциномы легкого, полученные из антропогенных источников, или мыши в различных штаммов мышей. Мы демонстрируем, что ранив airways с блеомицин до инъекции клеток опухоли увеличивает приживления опухолевых клеток от 0-17% до 71-100%. Существенно этот метод расширения распространенности опухоли легких и последующие нарост, с использованием различных моделей и мыши штаммов. Кроме того раковые клетки прижившимися легких распространять из легких в соответствующих отдаленные органы. Таким образом мы предоставляем протокол, который может использоваться для создания и поддержания новых моделей ортотопическая рака легких с ограничением количества клеток или биопрепаратов и количественно оценить онкогенной способность клеток рака легкого в физиологически соответствующие параметры .

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Рак легких является ведущей причиной рака связанных смертей во всем мире1. У пациентов с раком легких в конечном итоге уступить от метастазов в отдаленные органы, в частности для центральной нервной системы, печени, надпочечники и кости2,3,4. Грудной клетки злокачественных опухолей традиционно были классифицированы как мелкоклеточный рак легких (МРЛ) или легких немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ)5. НМРЛ — наиболее часто диагноз злокачественных новообразований и можно подразделить различных гистологических подтипов, включая аде....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все эксперименты проводились в соответствии с протоколами, утвержденным на институциональный уход животных и использование Комитет (IACUC) в Йельском университете.

1. Установка / Подготовка реагентов.

  1. Блеомицин
    Предупреждение: Основываясь на глобально согласованной системы (СГС) классификации и маркировки химических веществ, блеомицин классифицируется как GHS08 опасность для здоровья.
    1. Подготовьте блеомицин в химические вытяжки. Ресуспензируйте 15 U в 5 мл стерильной фосфатный буфер (PBS).
    2. Аликвота 100-200 мкл раствора в стеклянных ампул и заморозить их при-20 ° C для использования в будущем.....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Для повышения эффективности LUAD раковых клеток приживления в легкие мышей, мы разработали протокол, который сначала предварительные условия авиалинии, блеомицин, следуют ортотопическая опухолевых клеток впрыска (рис. 1). Мы подтвердили, что даже при приеме в ослабленным Атинические мышей, блеомицин индуцированных переходных фиброз день 14, о чем свидетельствуют потери сократимость архитектуры и увеличение коллагена осаждения (рис. 2

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Поразительные параллели клинических документально между раком легких и других хронических заболеваний легких36. В частности увеличение пристрастие для развития рака легких у пациентов с идиопатического легочного фиброза (МГЛ), и эта ассоциация независимо от курения истории37,38. МГЛ характеризуется прогрессивное уничтожение легких архитектуры и нарушение дыхательной функции путем осаждения ECM39. Кроме того после хи.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы заявляют не конкурирующих финансовых интересов.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Это исследование финансировалось за счет субсидий из Национального института рака (R01CA166376 и R01CA191489 для D.X. Nguyen) и Министерство обороны (W81XWH-16-1-0227 для D.X. Nguyen).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
БлеомицинSigmaB5507-15UNОСТОРОЖНО Опасность для здоровья GHS08
Exel Catheter 24GFisher1484121Удалите иглу. Для интрахеального введения
кетамина (Кетазет inl 100 мг/мл C3N 10 мл)Butler Schein56344Для обезболивания мышей
XylazineButler Schein33198Для обезболивания мышей
Кетопрофен, 5,000 мгCayman Chemical 10006661Analgesic
Puralube Ветеринарная офтальмологическая мазьBUTLER ANIMAL HEALTH COMPANY LLC8897Для профилактики сухости глаз во время анестезии
порошок D-люциферинаPerkin Elmer Health Sciences Inc122799для люминесцентной визуализации. Восстановите порошок с PBS до рабочей концентрации 15 мг/мл. Защитить от света
Стенд для интубации грызуновBraintree ScientificRIS-100Рекомендуемый стенд для интрахеального введения
MI-150 ILLUMINATOR 150 Вт MI-150DOLAN-JENNER INDUSTRIESMI-150 / EEG2823MДля подсветки и визуализации трахеи
Graefe Щипцы, длина 2,75 (7 см) зубчатыйRobozRS-5111Для интратрахеального введения
Шприц Luer-Lok Sterile 5млBD / Fisher309646
Satiny Smooth by Conair Dual Foil Влажная/сухая перезаряжаемая бритваConair-ToБритье мышей
Bonn Ножницы, 3,5 дюйма прямые 15 мм острые/острые лезвияRobozRS-5840SC
15 мл коническая трубкаBD / Fisher352097
1,5 мл центрифужные пробиркиСША SCIENTIFIC INC1615-5500
Флакон Сцинтилляция 7 мл Боросиликатное стекло GPIFisher701350
для пипеток (200 μ L)США SCIENTIFIC INC1120-8710
Фосфатный буферный физиологический растворLife Technologies14190-144
0,25% трипсин-ЭДТАLife Technologies25200-056
DMEM с высоким содержанием глюкозыLife Technologies11965-092
RPMI Medium 1640Life Technologies11875-093
Фетальная бычья сыворотка USDALife Technologies10437-028
Пенициллин-стрептомицинLife Technologies15140-122
Амфотерицин BSigmaA2942-20ML
Трипановый синий краситель 0,4%Life Technologies15250-061
Countess Automated Cell CounterLife TechnologiesAMQAX1000
Колба T/C 75 см квадратная скошенная горловина, синяя шапочкаFisher / Corning353135
IVIS Spectrum Xenogen BioluminiscencePerkin Elmer Health Sciences Inc124262Для in vivo биолюминесцентная визуализация
Программное обеспечение для визуализации живых изображенийPerkin Elmer Health Sciences Inc128113Для анализа биолюминесценции in vivo
система газовой анестезии XGI-8Perkin Elmer Health Sciences Inc118918Для анестезии изофлураном
BD Ultra-Fine II Короткоигольчатый инсулиновый шприц 1 куб. см. 31 г x 8 мм (5/16 дюйма)BD / FisherBD328418Для ретроорбитального введения люциферина
Шприц 1 млBD / Fisher14-823-434Для внутрибрюшинных инъекций
26 г x 1/2 дюйма иглаBD / Fisher305111Для внутрибрюшинных инъекций
4% параформальдегидVWR43368-9MОСТОРОЖНО Опасность для здоровья GHS07, GHS08. Для фиксации тканей
пипетка Pipet-Lite, Unv. SL-200XLS+МЕТТЛЕР-ТОЛЕДО ИНТЕРНЭШНЛ
Гематоксилин МайераЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ НАУКИ517-28-2
Эозин Y краситель 0,25% (по массе) в 57%Фишер67-63-0
Массон трихром Морилканабор IMEB IncK7228Для массона трихромное окрашивание для визуализации коллагена
Superfrost плюс стеклянные слайдыФишер
6-луночный планшетCorningC3516
Универсальный набор для обнаружения микоплазмыATCC30-1012K
OCT Встраиваемый составELECTRON MICROSCOPY SCIENCES62550-12Для встраивания ткани для замороженных срезов
Leica CM3050 S ResearchCryostat LeicaCM3050 SДля среза ткани для анализа
окрашиванияФлуоресцентный микроскоп Keyence All-in-OneKeyenceBZ-X700
ImageJНациональные институты здравоохранения СШАIJ1.46http://rsbweb.nih.gov/ij/ download.html
Prism 7.0 для Mac OS XGraphPad Software, Inc.-
Атимические (Crl:NU(NCr)-Foxn1nu) мышиCharles RiverNIH-553
NSG (NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ) мышиJackson Laboratories5557
B6129SF1/J мышиJackson Laboratories101043
клетки NIH-H2030ATCCCRL-5914
368T1любезно предоставлены Монте Уинслоу (Стэндфордский университет)-
PC9 клеткиNguyen DX et al. Cell. 2009; 138:51–
BrM3 cellsNguyen DX et al. Cell. 2009; 138:51– 62-
используется Фильтр наконечники 17014411 1255015 62-H2030

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics, 2015. CA-Cancer J Clin. 65, 5-29 (2015).
  2. Gaspar, L. E. Brain metastases in lung cancer. Expert Rev Anticanc. 4, 259-270 (2004).
  3. Hess, K. R., et al. Metastatic patterns in a....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Orthotopic Lung CancerBleomycin Pre ConditioningTumor Cell EngraftmentLung Adenocarcinoma ModelIntratracheal InjectionBioluminescence ImagingMouse Strain VariabilityMetastasis DetectionFibrosis InductionXenograft Tumor Models

Related Articles