Трансуретральная инстилляции процедура в взрослого мужчины мыши

Трансуретральная инстилляции подход был использован в ходе предыдущих исследований как один из методов для создания грызунов моделей мочевого пузыря патологий^1,2,3,4 и может быть использован для оценки эффективность локально поставленного обработок в мышах. Хотя Животные модели нельзя охарактеризовать полностью человеческих патологий, выявление основных механизмов в исследованиях на животных обеспечивает более глубокое понимание человека LUT расстройств, таких как интерстициального цистита/мочевого пузыря болевого синдрома, нейрогенные цистит, аутоиммунные цистит и простаты воспаления⁵.

Трансуретральная инстилляции процедура, проводимая на взрослого мужчины мыши технически более сложной, чем внутрипузырной инстилляции в взрослых женщин мыши⁶. Естественно изогнутые Анатомия мужской уретры наряду с ее малого диаметра сделать технически сложно выполнить трансуретральная ввода катетера. Таким образом подробные инструкции для трансуретральной индукции инфекции мочевыводящих путей мыши⁶ и LUT воспаление^{7,8,9,10,11 , 12 , 13 , 14 , 15} через катетер мочевого пузыря вставить ранее были подготовлены только самок мышей. Эта рукопись призвана обеспечить пошаговое описание методики для трансуретральной инстилляций веществ у мышей-самцов, включая видеоклипы, изображения и иллюстрации. Трансуретральная инстилляции, что процедуры в взрослого мужчины мыши могут быть выполнены с помощью переменной прививает аналогична ранее описанные в женской мыши⁷ и объединена с дополнительные методы, такие как записи ЭМГ visceromotor ответов (VMR)¹⁶.

все процедуры с животными, включая метод и Продолжительность анестезии, а также послеоперационного ухода, были обсуждены с ветеринаром и одобрен институциональный уход за животными и использования Комитет (IACUC) на ассоциированные учреждения. В этой рукописи, с 8 до 15-недельных самцов мышей C57BL/6 были выполнены все процедуры и протокола следует животных ухода руководящими принципами, утвержденными IACUC в университете Колорадо.

1. Подготовка трубы

Примечание: привить посевным материалом, иглы придает полиэтилен (ПЭ) труб ( рис. 1A) или небольшой датчик (< 24 G) angiocatheter может быть используемые () Рисунок 1 g). Использование angiocatheter требует никакой подготовки помимо стерилизации с 70% этанола (EtOH). Посевным материалом является вещество, которое привили/вводят/хранение в мочевыводящих путей. Это может быть решение, содержащее бактерий, вирусов или химического. Это подготовлен заранее и на один протокол исследования. Например, если цель исследования для оценки воздействия инфекции E. coli на нижних мочевыводящих путей, исследователь необходимо будет подготовить посевным материалом, содержащий бактерии, которые могут быть привиты, привил нижних мочевыводящих путей.

1. Подготовка иглы, придает ПЭ трубы прост и состоит из следующих действий: выберите размер ПЭ трубы основе органа-мишени и возраста животного. Для животных моложе 12 недель, использование труб PE-10 (внешний диаметр составляет 0,024 дюймов и внутренний диаметр составляет 0,011 дюймов). Трубы PE-10 предложил, чтобы быть применимым для (1 первичного посева посевным материалом в передней простаты (AP) и семенных пузырьков (SV), или (2 первичного посева посевным материалом в мочевом пузыре моложе 12 недель возраста животного. ПЭ трубы с диаметром больше до размера 50 PE (внешний диаметр до 0.038 дюймов и внутренний диаметр до 0,023 дюймов) может использоваться для начального заполнения посевным материалом в мочевом пузыре пожилых животных.
2. Сократить примерно 2,5 дюйма труб PE.
3. Выберите иглы, которая будет соответствовать выбранной PE диаметр использоваться. 27 G игла может поместиться в просвете труб PE-10, и иглой 22 G соответствует просвета трубы PE-50.
   1. Подготовить иглы до вставки в ПЭ трубы, потерев острый край иглы на камне коммерчески доступных нефти ( рис. 1A -B) сделать это скучно, или использовать коммерчески доступных Блант игла.
4. Ввести тупой иглой ( рис. 1 c) в просвете ПЭ трубы. Избежание повреждения люмен или вступления в ложных люмен, обеспечивая игла остается в центре люмен. ( рис. 1 d -E). ПЭ трубы при повреждении во время вставки тупой иглой, вырезать поврежденные конца и перезапуска процесса.
5. Место иглы придает ПЭ трубы в 70% случаев EtOH для стерилизации до его использования для процедуры. Флеш, 70%, которую EtOH через иглу ПЭ трубы для стерилизации просвета и обеспечить там не происходит утечки из ПЭ трубы от повреждения во время процесса иглы. Если есть утечка, отбрасываются иглы ПЭ трубы.
   Примечание: Кончик ПЭ трубы должна быть гладкой до катетеризации. Чтобы избежать проблем с внедрением ПЭ трубы в мочеиспускательный канал, рекомендуется вырезать кончик трубки PE непосредственно перед катетеризация ( Рисунок 1F). Предлагаемые минимальная длина труб PE – 1,5 дюйма, который включает в себя часть вокруг иглы.

2. Катетеризация процедура

1. до индукции анестезии, опорожнить мочевой пузырь мыши.
   1. Применить нежное давление и массаж в нижней части живота мыши. Эти маневры обычно приводят к спонтанной мочеиспускания. Полный мочевой пузырь может привести к ослаблению или немедленного утечки любой внушал посевным материалом.
      Примечание: Дополнительные опции для обеспечения пустой мочевой пузырь в мыши, лишить животное воды для по крайней мере за 1 час до начала процедуры ОВОС трансуретрально инстилляции. Лишение воды должен быть одобрен учреждение как часть протокола животных.
2. Использовать машину анестезии с потоком изофлюрановая (2%), чтобы побудить анестезии.
   1. После наркоза животного, поместите его на теплой электроодеяло и покрыть ее с синей колодки с его нос внутри ураном для поддержания непрерывной анестезии.
   2. Подтверждают, что животное находится под наркозом, установив педаль рефлекс (мыс пинча).
3. После того, как педаль рефлекс отсутствует, перейти от втягивания крайней плоти.
   1. Пресс лобковой области с большой палец и указательный палец одной руки ( 2A цифры и 2B) и вытащить пенис желез, с большим и указательным пальцами другой руки ( Рисунок 2 c). Когда это будет сделано правильно, крайней плоти, головки полового члена и полового органа по-прежнему подвергаются. ( 2D рисунок и Рисунок 2F). Не используйте щипцы для вытащить желез пенис, как это приведет к повреждению тканей.
4. Смажьте кончик катетера и головки с стерильные хирургические смазки до ввода катетера. Это облегчит вставки труб PE.
   Примечание: Индивидуально упакованных квадратов хирургических смазочных материалов, вместо одной большой трубы, рекомендуются для каждого использования для поддержания стерильных условий.
5. Аккуратно прижмите кончик пениса, используя тупой щипцами и осторожно выжмите головки вызвать уретры слухового прохода открыть.
6. Держите шприц с иглой придает ПЭ трубы или PE трубы сама и вставьте ПЭ трубы через мочеточниковый слухового прохода.
   Примечание: Для стабильности рекомендуется штатив захват шприца с иглой придает ПЭ трубы или PE трубы себя, используя большой палец, указательный и средний пальцы.
   Примечание: Путь катетеризация следует быть изогнут вследствие естественной кривизны уретры, окруженный головки полового члена и полового органа в взрослого мужчины мыши, как показано на рисунке 3A и 3B рисунок. Catheterized ПЭ трубы может встретить сопротивление при катетеризации, поэтому он рекомендуется для регулировки угла наклона трубы вверх или вниз, чтобы помочь заранее ПЭ трубы в дополнение к целевым органом. При необходимости, чтобы помочь ему маневр через различные резкие повороты уретры ПЭ трубы может поворачиваться слегка. Когда есть слишком много сопротивление, трубы должны быть вытащил обратно и затем снова вперед с минимальным давлением. Потянув ПЭ трубы из полностью и с использованием более смазки могут быть полезны.
7. Выполняют инстилляции посевным материалом после ПЭ трубы достиг желаемого орган, нажав иглы поршень, чтобы привить желаемый объем посевным материалом, (5-200 мкл объем предложил).
   1. Для инстилляций посевным материалом в мочевой пузырь, заранее ПЭ трубы до приблизительно 0,75 дюйма ПЭ трубы вставляется ( рис. 3A).
      Примечание: для инстилляций посевным материалом в ап и SV, как правило, the вставляется трубка встречает сопротивление, когда он достигает точки открытия в передней простаты. Регулируя угол наклона трубы вверх или вниз, ПЭ трубы будут двигаться дальше, до тех пор, пока примерно на 1 дюйм труб PE был вставлен ( рис. 3B).

3. В естественных условиях Визуализация нижних мочевыводящих путей и почек

Примечание: цель в vivo изображений в этой рукописи: (1) для подтверждения пространственной локализации посевным материалом; и (2), чтобы оценить распространенность рефлюкс посевным материалом для почки. Для этой цели, может использоваться либо наркотизированных или Усыпленных мышь.

1. Для визуализации нижних мочевыводящих путей взрослого мужчины мыши, выполнить нижней брюшной срединная лапаротомия подвергать мочевого пузыря, предстательной железы и семенных пузырьков.
   1. Надрезать кожу в средней линии от лобковой кости чуть ниже мечевидного отростка, используя ножницы.
   2. Поднять кожу с подкожной клетчатки.
   3. Определить аваскулярный linea alba расположен в срединной и надрезать это вступить в брюшной полости, где расположены все органы.
   4. Подтверждается визуализации синий краситель или другой подходящей отслеживания агента пространственной локализации.

Трансуретральная инстилляции синего красителя через PE 50 трубы в результате инстилляции красителя в мочевого пузыря (рис. 4A) и через 10 ПЭ труб в раскрашивания SV и AP (рис. 4B), соответственно. Чтобы оценить ли выполненных трансуретральная инстилляции вызывает мгновенное рефлюкс посевным материалом для почек или нет, почки и мочеточника наблюдались после инстилляции 100 мкл синий краситель и флуоресцентные краски (рис. 4A-B). Ни один из инстилляции процедуры, с помощью двух разных размеров ПЭ трубы и два различных красителей привело раскрашивания мочеточников и почек.

Рисунок 1: Иглой 22 G подготовки для вставки в полиэтилен (ПЭ) труб 50. Острые иглы (A) шлифованный камень нефти (B) чтобы заглушить острыми краями (C). После того, как иглы скучно, игла вставляется в Люмене ПЭ трубы (D) и расширенный через иглу с тонкой щипцами (E). Труб затем вырежьте приблизительно 1,5 дюймов (F). Может также использоваться angiocath 24 G (G). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Рисунок 2: Мужчины мыши крайняя плоть покрывает головки и уретры слухового прохода (A), с небольшой тягой крайняя плоть головки могут быть подвержены (B), и с небольшой тракции головки (C), весь крайней плоти может быть отозвано (D), таким образом позволяет для легкого доступа к уретры слухового прохода и мочеиспускательного канала. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Рисунок 3: Иллюстрации нижних мочевых органов; мочевого пузыря, предстательной железы и семенных пузырьков (SV) показаны трансуретральная инстилляции, с использованием труб PE 50 (A) и трубы PE 10 (B) для первичного посева мочевого пузыря и простаты SV/передней, соответственно. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Рисунок 4: Изображения верхних и нижних мочевых органов; почек, мочевого пузыря, предстательной железы и семенных пузырьков (SV) после трансуретральной инстилляции, с использованием труб PE 50 (A) и трубы PE 10 (B). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Авторы не имеют ничего сообщать.