Субретинальное трансплантации эмбриональных стволовых клеток человека производные сетчатки пигментного эпителиальных клеток в большой eyed модель географической атрофии

Sandra Petrus-Reurer; Hammurabi Bartuma; Monica Aronsson; Sofie Westman; Fredrik Lanner; Anders Kvanta

doi:10.3791/56702

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Субретинальное трансплантации эмбриональных стволовых клеток человека производные сетчатки пигментного эпителиальных клеток в большой eyed модель географической атрофии

9.8K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/56702

⸱

22 января 2018 г.

Sandra Petrus-Reurer^*¹^,² , Hammurabi Bartuma^*¹ , Monica Aronsson¹ , Sofie Westman¹ , Fredrik Lanner² , Anders Kvanta¹

¹Clinical Neuroscience, Section for Ophtalmology and Vision, Karolinska Institutet, ²Clinical Sciences, Intervention and Technology, Division of Obstetrics and Gynecology, Karolinska Institutet

^* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Клетки сетчатки пигментного эпителия могут служить клетки заместительная терапия для передовые формы сухие возраста макулярной дегенерации. Этот протокол описывает генерации большой eyed модель географической атрофии и субретинальное трансплантация человеческих эмбриональных стволовых клеток пигмента сетчатки эпителиальных клеток в этой модели болезни.

Аннотация

Географической атрофии (GA), поздней стадии сухие возраста макулярной дегенерации характеризуется потерей сетчатки пигментного эпителия (ПЭС) слоя, который приводит к последующим дегенерации жизненно сетчатки структур (например, фоторецепторов) вызывает тяжелые зрением. Аналогичным образом ПЭС потери и снижением остроты рассматривается в долгосрочной последующей вверх больных с передовых влажные возраста макулярной дегенерации (AMD) лечении интравитреальные анти Сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF). Таким образом с одной стороны, это основополагающее значение для эффективного получения НПП клетки от неограниченный источник, который мог бы служить в качестве заместительной терапии. С другой стороны важно оценить поведение и интеграции производных ячеек в модели болезни, влекущие за собой хирургические и тепловизионные методы как можно ближе к те, которые применяются в организме человека. Здесь, мы предоставляем подробный протокол, основанный на наших предыдущих публикаций, описывающий поколения доклинических модели GA с использованием белых кролика глаза, для оценки человеческих эмбриональных стволовых клеток получены клетки сетчатки пигментного эпителия (Госкомсанэпиднадзором ПЭС) в клинически значимых параметр. Дифференцированные Госкомсанэпиднадзором НПП пересаживают в наивные глаза или глаза с NaIO₃-индуцированной GA-как дегенерация сетчатки, используя технику plana Парс transvitreal 25 G. Оценку выродились и пересаженные областей осуществляется смешанных с высоким разрешением неинвазивные в реальном времени изображений.

Введение

Этот протокол описывает поколения большой eyed доклинических модель географической атрофии (GA), которая позволяет оценить интеграции трансплантированных Госкомсанэпиднадзором-НПП в пространстве субретинальное. Здесь подробно описаны методы были использованы в 3 последних публикаций, которые демонстрируют производства обогащенного, чистый и функциональный населения НПП клеток с Госкомсанэпиднадзором¹, а также создание внешнего повреждения сетчатки и фенотип GA-как индуцированных субретинальное инъекции физиологического солевых растворов (т.е., BSS и PBS) или₃ NaIO в кролика глаза²^,